58山羊c-Myc原癌基因克隆、原核表达和GST-Myc融合蛋白纯化
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58山羊c-Myc原癌基因克隆、原核表达和GST-Myc融合蛋白纯化
农业生物技术学报，?年，第?18卷，第5期，第?；JournalofAgriculturalBio；研究报告?ALetter?；山羊c-Myc原癌基因克隆、原核表达和GST-M；赵华?*?杨照海?*?刘平卢晟盛卢克焕毕方方郑喜；广西大学动物科技学院，南宁?530005?*同等；**通讯作者，zhxibang.；摘要本研究的目的是通过分子克隆、
农业生物技术学报，?年， 第?18卷， 第5期， 第?931~937页?2010JournalofAgriculturalBiotechnology,2010,Vol.18,No.5,931~937?研究报告?ALetter?山羊c-Myc 原癌基因克隆、 原核表达和GST-Myc融合蛋白纯化赵华?*?杨照海?*?刘平 卢晟盛 卢克焕 毕方方 郑喜邦?**?广西大学动物科技学院， 南宁?530005?*同等贡献作者?**通讯作者，??摘 要 本研究的目的是通过分子克隆、原核表达和蛋白纯化技术获得山羊?GST-Sox2?融合蛋白。用?则葬 澡蚤
)肠组织克隆了? c-Myc 基因,?通过?TA?克隆， 构建了?pMD18-T-Myc 质粒。?RT-PCR?方法从山羊(悦葬责山羊 c-Myc 全长?cDNA?约?1320bp， 该序列包含一个完整的开放阅读框， 编码?439?个氨基 DNA?测序证明，酸， 经分析该序列与绵羊(Ovis aries)的 c-Myc 序列同源性为?99.2%。将该?cDNA片段亚克隆至?pGEX-KG载 体，构建了重组质粒?pGEX-KG-Myc。 经酶切鉴定和测序，将重组质粒导入大肠杆菌?(耘泽糟 澡藻
则蚤 糟 澡蚤
糟燥造 蚤 )? ?由?IPTG诱导表达， 以谷胱甘肽?-Sepharose4B?亲和纯化?GST-Myc融合蛋白。纯 BL21， SDS-PAGE?分析表明， 化的?GST-Myc融合蛋白 约?75kD， 与预期值相符， 且呈现清晰的单一条带。?该融合蛋 Westernblot?检测证实， 白能够被?GST抗体所识别。本实验克隆了山羊 c-Myc 基因， 获得了高纯度的?GST-Myc?融合蛋白， 为其多克 隆或单克隆抗体的制备提供了基础资料， 为山羊?iPS?细胞?(inducedpluripotentstemcells)检测创造了条件。 关键词 山羊，c- Myc 基因， 分子克隆， 原核表达， 蛋白纯化?CloningandProkaryoticExpressionof?Goat c-Myc?Proto-oncogene,and?PurificationofGST-MycFusionProtein?*?*?ZhaoHua?YangZhaohai?**?LiuPingLuShengshengLuKehuanBiFangfangZhengXibang?CollegeofAnimalScienceandTechnology,GuangxiUniversity,Nanning530005,China?*Theauthorswhocontributeequally?**Correspondingauthor,?DOI:10.3969/j.issn.10.05.016Abstract?Thispaperwastoobtaingoat(Capra hircus)GST-Mycfusionproteinbymeansofmolecularcloning,?prokaryoticexpressionandproteinpurification.The c-Myc?cDNAofgoatwasamplifiedbyRT-PCRfromintestine?tissues,andplasmidpMD18-T-Myc?wasconstructedbyT-Acloning.DNAsequencingshowedthatthecDNAwas??acompleteopenreadingframethatencoded439aminoacids,sharinghighernucleotidehomology?1320bp，with(99.2%)withthatofsheep(Ovis aries).ThecDNAfragmentwassubclonedtopGEX-KG,andrecombinant?plasmidpGEX-KG-Myc?wasconstructed,whichwasverifiedbyrestrictionendonucleaseanalysisandDNA?sequencing.Therecombinantplasmidwastransformedinto E.coli?BL21,andGST-Mycfusionproteinwas?expressedwithinductionofIPTG,andthenpurifiedwithGlutathione-Sepharose4Bargrose.Illustratedby?sodiumdodecylsulfate-polyacrylamidegelelectrophoresis(SDS-PAGE),thepurifiedfusionproteinwasabout75?kD,aclear,andsingleband,whichwasexpected.Westernblotassayrevealedthatfusionproteincouldbe?identifiedbyGSTantibody.Inconclution,wehaveclonedgoat c-Myc?gene,obtainedGST-Mycfusionprotein?withhigherpurity,whichwillleadtopreparationofpolyclonalormonoclonalanti-Sox2antibody,andfurtherto?DOI:10.3969/j.issn.10.05.016?基金项目： 本研究由广西区自然科学基金项目(桂科自?No.0728019； 桂科自?No.0991043)、 广西亚热带生物资源保护利用重点实 验室开放课题(No.SB0907)和广西大学科研基金项目(No.X081102)共同资助 收稿日期：?接受日期：??932农业生物技术学报?JournalofAgriculturalBiotechnology?applicationinidentificationofgoatiPScells(inducedpluripotentstemcells).Keywords Capra hircus, c-Myc?gene,Molecularcloning,Prokaryoticexpression,Proteinpurification?近两年来，利用特定的转录因子将体细胞诱导 1 结果与分析 为多能性干细胞(inducedpluripotentstemcell，?细 iPS?1.1 山羊 cDNA RT-PCR 扩增胞)?的研究获得了突破性进展。Takahashi?等?(2006)?利用?4?个转录因子?Oct3/4，?，?和?Klf4?， 把 Sox2c-Myc?从山羊小肠组织提取总?RNA，经?RT-PCR?扩 小鼠皮肤成纤维细胞诱导成为多能干细胞；?增， 以?cDNA?为模板， 依据设定条件通过?PCR?扩增 Takahashi?等(2007)用同样的方法把人皮肤成纤维细 胞诱导成为多能干细胞， 该细胞可以形成嵌合体， 并 且在许多特征上与胚胎干细胞(embryonicstemcells，ESCs)相似。iPS?细胞这项进展使人类有可能不再从 胚胎获得具有多向分化能力的胚胎干细胞，转而从 成体细胞直接获得。c-Myc 原癌基因是?Neel?等(1982)最早发现的禽 类骨髓病毒?MC29?的 v-Myc 的细胞同源序列。核内 原癌基因 c-Myc 的扩增是?Collins?和?Groudine(1982)?和?Favera?等?(1982)首先报道的。 c-Myc 基因是一种 致癌基因， 存在于绝大多数人类癌症中， 在近?1/3?人 类癌症疾病中可观察到该基因高表达?(Yanoetal.,?1993)。自从?20?世纪?90?年代初期确立了?c-Myc蛋白 作为转录因子的本质以来，有关其下游靶基因的研 究已成为分子生物学的研究热点之一，人们寄希望 于通过研究其靶基因来阐明 c-Myc 在细胞生命过程 中所起的作用(朱 微和朱剑琴,2001)。c-Myc?的转 录能在许多发育中的组织中检测到。妊娠中期的小 鼠胚胎， 高水平 c-Myc 表达与活跃的细胞增殖相关， 它的表达下调则伴随着有丝分裂停止，分化的开始?(李江宁,2008)。?Dalla-favera?等(1982)研究发现人类伯基特淋巴瘤细胞上的 c-Myc 癌基因位于染色体?8?号区域。Miyamoto?等?(1985)对人 c-Myc 基因进行分子克隆且 分别在大肠杆菌和酵母菌中进行表达，并比较了蛋 白产量。 朱 微和朱剑琴(2001)将人源 c-Myc 基因中 编码?bHLH/LZ结构域的?92?个氨基酸的?cDNA?片段 克隆到?pGEX-2T载体上， 诱导表达并纯化。目前， 国 内外关于山羊?c-Myc?原核表达及抗体制备的研究还 未见报道。家畜?c-Myc?的研究常因蛋白相关抗体的 不易获得而受到限制，因此制备针对山羊?c-Myc?的 高质量抗体对推动有关干细胞自我更新机制的研究 具有重要意义。本研究以山羊为研究对象， 利用基因 克隆技术，拟从山羊肠组织获得 c-Myc 基因，构建c-Myc 基因原核表达载体， 通过原核表达分离纯化得 到高纯度目的蛋白。 目的片段， 扩增产物经?1%?琼脂糖凝胶电泳， 得到大 小约?1320bp?的单一条带，与预期的目的片段相符?(图?1)。1.2 pMD18-T-Myc 质粒的酶切鉴定与测序纯化的?PCR?产物与?pMD18-T?载体连接，转化大肠杆菌DH5琢，构建的重组质粒经BamH玉及Xho玉 双酶切和?1%?琼脂糖凝胶电泳，得到?1320bp?条带， 与?PCR?产物大小相符(图?2)。 阳性质粒送往上海生工测序，结果表明： 山羊 c-Myc 编码序列全长是1320bp， 该序列包含一个完整的开放阅读框，编码?439?个氨基酸(图?3)。 用?DNAStar软件将该基因核苷酸序与其1?M?bp2000?图?1山羊cDNART-PCR?1：RT-PCR?产物；M：DNA?markerDL2000?Figure1ElectrophoresismapforRT-PCRproductsofgoat?cDNA?1：RT-PCR?product?M：DNA?markerDL2000?1?M?bp图?2pMD18-T-Myc 酶切鉴定?1：Bam H 玉 和Xho 玉 双酶切；M：DNA?markerDL2000?Figure2IdentificationofpMD18-T-Myc?byrestrictiveenzyme?digestion?1：pMD18-T-?Myc?digestedby BamH 玉?and Xho 玉?M：DNA??markerDL2000???山羊 c-Myc 原癌基因克隆、 原核表达和?GST-Myc融合蛋白纯化?CloningandProkaryoticExpressionofGoatc-Myc?Proto-oncogene,andPurificationofGST-MycFusionProtein?933它物种进行同源性比较发现，山羊与绵羊核苷酸序 融合， 而且未发生移码， 说明目的基因已正确插入表 列同源性最高， 达?99.2%； 与牛(Bos taurus)、 野猪(Sus scrofa)、 猫(Feline leukemia)、 犬(Canis lupus)的同源性 分别为?97.8%、?、?和?91.7%(图?4)。将测序 93.6%92.6%达载体。确认的阳性质粒命名为?pGEX-KG-Myc。 1.4 重组质粒 pGEX-KG-Myc在大肠杆菌中的诱导 正确的重组质粒命名为?pMD18-T-Myc。 1.3 重组质粒 pGEX-KG-Myc 酶切鉴定?pMD18-T-Myc 和?pGEX-KG?载体分别经过 BamH 玉及 Xho玉双酶切后， 把目标基因片段连接到?pGEX-KG?载体上，转化大肠杆菌?DH5琢菌株， 获得 的重组质粒再次经 BamH 玉及 Xho 玉双酶切鉴定， 得到?1320bp?的目的片段(图?5)。阳性质粒再次经过 测序验证， 显示目的片段含有完整的读码框， 与?GST?图?3山羊c-Myc?测序结果?ATG： 起始密码子；TAA： 终止密码子； 下划线部分：PCR?引物?Figure3TheDNAsequencingresultofgoat c-Myc?gene?ATG：Start?codon?TAA：Stop?codon?Theunderlinedparts?：PCRprimers?Percentidentity?1?2?3?4?5?6?1?92.0?97.9?92.3?98.0?93.5?1?Bos taurus 2?8.4?92.2?94.3?92.2?92.6?2?Canis lupus 3?2.2?8.3?92.6?99.2?93.6?3?Capra4?8.1?5.6?7.8?92.7?92.3?4?Feline leukemia hircus 5?2.1?8.3?0.8?7.8?94.0?5?Ovis aries 6?6.8?7.8?6.7?7.7?6.3?6?Sus scrofa?1?2?3?4?5?6?图?4山羊 c-Myc 基因核苷酸序列与牛、 犬、 猫、 绵羊、 野猪物种 进行序列同源比较?Figure4Nucleotideidentitycomparisonof c-Myc?geneamongCapra hircus, Bos taurus, Canis lupus, Feline leukemia, Ovis aries?andSus scrofa表达用空载体?pGEX-KG?和重组质粒?pGEX-KG-Myc 分别转化感受态大肠杆菌?BL21， 经?IPTG诱导， 同时 设置未诱导重组菌液作为阴性对照。SDS-PAGE?分 析显示，诱导的重组菌液在相对分子量约?75kD?处都有一特异性蛋白条带；未诱导的菌液没有目的带 出现；诱导的空载体在相对分子量约?26kD?处有一 条带， 系?GST?单体蛋白， 均符合预期值大小， 说明?GST-Myc?融合蛋白在大肠杆菌中成功表达(图?6)。 1.5 c-Myc 蛋白 Western blot 检测由于预期表达产物为?N-?端含有?GSTtag?的融 合蛋白，故利用该标签的特异抗体对样品进行?Westernblot?分析。结果表明：空载体在约?26kD?处 有一条清晰条带， 与?GSTtag?的分子量相近； 未诱导 菌液没有条带出现；含有重组质粒的菌体蛋白出现 了一条?GST?抗体能特异性识别约?75kD?的杂交带， 同?GST分子量与?c-Myc?的分子量之和?75kD?相吻 合， 证明表达产物具有免疫反应性(图?7)。 1.6 GST-Myc 融合蛋白的纯化采用谷胱甘肽?-Sepharose4B?亲和层析方法对表 达的融合蛋白进行初步纯化。结果(图?8)显示： 菌体 裂解物离心后的上清液中含有该目的蛋白，说明?c-Myc?主要以可溶的形式存在；第?3?后收集的上清中没有条带，说明已将杂蛋白全部洗脱；纯化的?GST-Myc融合蛋白在相对分子质量约?75bp?M1?1?M2?bp?图5重组质粒pGEX-KG-Myc 酶切鉴定?M1：姿 -Eco?T14 玉?digestDNAmarker；M2?：DNA?markerDL2000；?1：Bam H玉和Xho 玉双酶切后的pGEX-KG-Myc?Figure5Agoroseelectrophoresisdetectionofdigestedproductof?pGEX-KG-Myc?plasmid?M1：姿 -Eco?T14 玉?digestDNAmarker?M2：DNA?markerDL2000??1：pGEX-KG-?Myc?digestedbyBamH玉?andXho 玉??934农业生物技术学报?JournalofAgriculturalBiotechnology?没有其它杂带， 得到了纯化的?kD?处出现单一条带，GST-Myc融合蛋白。备抗体时， 免疫原性强， 用于基础免疫更有利于激发 特异性回忆反应(Lacham-Kaplanetal.,2006)。本研 究采用的宿主菌 E. coli?BL21(DE3)，属于?lon?和?2 讨论本实验采用?LA Taq?DNA?聚合酶代替?EX Taq?ompT?蛋白酶缺陷型，其胞内和胞间周质蛋白酶均 己失活，这样当进行外源蛋白的可溶性表达时， 不易DNA聚合酶进行?PCR?扩增，保证了?PCR?扩增的忠 被宿主菌的蛋白酶水解而稳定存在；另外 E. coli?其染色体 实性； 采用?GCBuffer?代替?Ex Taq?Buffer， 解决了长 BL21(DE3)也是一类?T7?启动子表达菌株， 引物和高?GC?含量所带来的扩增难问题，成功地克 隆了山羊 c-Myc 基因。JonakandKnight(1984)报道， 在正常生长状态下，c- Myc?mRNA?在人淋巴母细胞 样细胞系?Daudi?有高水平的表达。本实验中成功地 从成年山羊的小肠组织中扩增了 c-Myc 基因。在原核蛋白表达过程中，选择构建一个合适原 核表达体系需要综合考虑三大因素， 即表达载体、 宿 主菌株和表达诱导条件， 以获得最满意的表达效果。 本实验采用载体?pGEX-KG，此载体是表达?GST?融 合蛋白的高效表达载体，其所表达的蛋白产物在?N?端带有?GST?序列，GST?分子量为?26kD， 此标签蛋白 本身溶解性高， 可增加融合表达蛋白的溶解性,也有 利于用?GST?亲和层析法纯化融合蛋白；GST??标签蛋 白在大肠杆菌?BL21?中不易被蛋白水解酶降解?(Harris,1998)。GST?分子量大， 结构复杂， 免疫动物制 kD?M?1?2?3?4?5?6?7?图6GST-Myc?融合蛋白的?SDS-PAGE分析?M：PageRuler?prestainedproteinladder；1?： 诱导的?pGEX-KG?空 载体；2?：未诱导的重组菌；3~7?：用?0.10、0.25?、0.50?、1.00??和?2.00mmol/LIPTG分别诱导GST-Myc?融合蛋白表达；1、?7?：箭 头分别代表?GST单体和?GST-Myc?融合蛋白?Figure6SDS-PAGEanalysisofexpressedGST-Mycfusion?protein?M：PageRuler?prestainedproteinladder?1：pGEX-KG?vector?withinductionbyIPTG?2?：Recombinant? E.coli?BL21without?inductonbyIPTG?3~7：Expression?ofGST-Mycfusionprotein?inducedbydifferentconcentrationsofIPTG(0.10,0.25,0.50,?1.00and2.00mmol/L)?Arrowsinlane1and7representGST?tagandGST-Mycfusionprtein，respectively?上携带一拷贝由?lacUV5?控制的?T7RNA?聚合酶基因，T7?RNA?聚合酶的选择性和活性保证了?T7?启动 子对外源蛋白表达的高效性和专一性，使得几乎所有细胞资源都用于目标基因表达?(Davanlooetal.,?kD?M?1?2?3?4?5?6?7?图7Westernblot?检测GST-Myc?融合蛋白表达?M：PageRuler?prestainedproteinladder；1?： 诱导的?pGEX-KG?空 载体；2?： 未诱导的BL21；3~6： 用0.10、0.25?、0.50?、1.00?和?2.00?mmol/LIPTG分别诱导?GST-Myc?融合蛋白表达?Figure7WesternblotdetectionofGST-Mycfusionprotein?M：PageRuler?prestainedproteinladder?1：pGEX-KG?vector?withinductionbyIPTG?2：Recombinant? E.coli?BL21without?inductionbyIPTG?3~6：Expression?ofGST-Mycfusionprotein?inducedbydifferentconcentrationsofIPTG(0.10,0.25,?0.50,1.00and2.00mmol/L)?kD?M?1?2?3?图?8GST-Myc?融合蛋白纯化?M：PageRuler?prestainedproteinladder；1?：菌体裂解上清；2?：第?3次洗脱杂蛋白后收集的上清；3?： 纯化的GST-Myc融合蛋白?Figure8ThepurificationofGST-Mycfusionprotein?M：PageRuler?prestainedproteinladder?1：Supernatant?removed?fromsonicatedrecombinantbacteriumfluid?2：Supernatant??collectedafterthethirdwashofunspecificproteins?3：Purified??GST-Mycfusionprotein?山羊 c-Myc 原癌基因克隆、 原核表达和?GST-Myc融合蛋白纯化?CloningandProkaryoticExpressionofGoatc-Myc?Proto-oncogene,andPurificationofGST-MycFusionProtein?935?加入75%冰冷乙醇500滋L?， 旋涡振荡混匀，1984；Studieretal.,1990)。本研究建立了 c-Myc 基因 上清， 7?500?的原核表达体系，实验表明?IPTG?终浓度为?2.00?弃上清， 倒置风干， 用适量的?DEPC?r/min?离心?5min；处理水溶解，原 ?℃冻存备用。 20?mmol/L?的?IPTG?诱导效果较差，可能由于高浓度?IPTG?将导致蛋白质合成速度过快而使外源蛋白在 3.3 目的片段克隆与测序胞内不能得到充分正确折叠，导致以不溶性包涵体根据?GeneBank?中绵羊(Ovis aries) c-Myc?mRNA?的形式表达或对菌有一定的毒害作用所致；采用低 温诱导?GST-Myc?融合蛋白表达， 基本避免了包涵体 序列设计。 的形成， 所得大部分融合蛋白以可溶形式存在。本研究中?SDS-PAGE结果表明目的蛋白的表达 量在菌体中的含量明显高于其它蛋白质组分，说明 该表达系统较适于 c-Myc 基因的表达。Westernblot?分析，融合蛋白能与?GST?抗体产生特异性免疫反 应， 提示?pGEX-KG-Myc 在?BL21?中表达的重组抗原能够正确折叠， 保持着具有活性的免疫功能区， 具有 抗原特异性，为进一步研究?c-Myc?重组蛋白的免疫 原性提供基础资料。纯化的?c-Myc?蛋白可以用于制 备抗?c-Myc?蛋白抗体。 3 材料与方法3.1 材料?TRIzolLS?o?R?RegentRNA?提取试剂盒购自?Intrivigen?公司?(美国)；反转录试剂盒、Ex? Taq?DNA?聚合酶、2伊?GCBuffer?玉、dNTP?、限制性内切酶BamH玉、Xho 玉， 质粒?pMD18-T、IPTG??及?Marker?购自?Takara?生物公司(日本)； 引物合成及?DNA?序列测定均由上 海生工公司完成；T4?DNA?连接酶和预染蛋白?Marker?购自?Fermentas?公司(立陶宛)； 感受态大肠杆 菌(Escherichia coli)DH5琢和?BL21、 载体?pGEX-KG?由本实验室保存；质粒小提试剂盒、胶回收试剂 盒、 鼠源?GST?标签抗体、 辣根过氧化物酶(HRP)标 记的山羊抗鼠?IgG， 以及化学发光剂均购自天根公 司(北京)。3.2 山羊 RNA 的提取从当地屠宰场无菌采集新鲜成年山羊(Caprahircus)?小肠组织，2~3?h内送回实验室。将肠组织用 灭菌的手术剪剪碎， 放入研钵中加液氮充分研磨。边磨边补充液氮，把研磨成粉沫状的组织用药匙移入?DEPC?处理好的?1.5mLEP?管中，加?1mLTRIzol， 涡 悬混匀，室温放置?5min；再加入?200 滋L?预冷的氯 仿， 振荡混匀， 室温放置?10min；12?000r/min、4??℃ 离 心?15min， 取上清?500 滋L?， 加等体积预冷的异丙醇 室温静置?10min，12?000r/min、4??℃离心?10min； 弃 上游引物：?；BamH 玉下游引物：?CCGCTCGAGTTAGGCGCAAGAGTTCCGTATC。Xho 玉预计扩增片断长度为?1320bp， 引物由上海生物工程公司合成。从山羊小肠组织提取总?RNA， 再反转录为?cDNA，以?cDNA?为模板，进行?PCR?扩增，PCR?反应体系为：12.5 滋L?2伊GC?BufferI，2.5? 滋L??dNTP(10正、 反义引物滋mmol/L)，(20 滋mol/L)?各?0.5 滋LL??，， 0.15? 94?加?ddH滋L?OEx8.1 Taq 滋?L??DNA?补足至聚合酶，模板?25 滋L??体系。反应条件 ?cDNA?0.75 2为：?℃?3min?预变性，94??℃?30s?变性，61.6??℃?90s?退火，72??℃?1min?延伸，共?30?个循环，72??℃延伸?10?min。经?1%琼脂糖凝胶电泳、切胶后， 用胶回收试剂 盒纯化?PCR?产物。目的片段与?pMD18-T载体?16?℃ 连接过夜， 次日转化?DH5琢感受态细菌。转化菌液涂 布在含氨苄青霉素的?LA?平板上，37??℃培养?16~21?h。 挑取阳性菌落加入含?滋5mLLB(含氨苄青霉素?100 粒， g/mL)??分别用的试管中 BamH玉,37?和 Xho℃振荡培养 玉进行双酶切鉴定， ?12~16h。小提质鉴定的阳性克隆送上海生物工程公司测序。 3.4 山羊 c-Myc 基因原核表达载体构建选择测序正确的?pMD18-T-Myc 质粒，分别用 BamH玉和 Xho 玉 将?pMD18-T-Myc 与表达载体?pGEX-KG?进行双酶切，胶回收目的片段与线性化的?pGEX-KG?载体，用?T4?DNA连接酶?16?℃连接过夜。 连接产物转化?DH5琢感受态细菌， 培养、 挑斑、 菌、双酶切鉴定和测序， 具体方法同 3.3。3.5 重组质粒在大肠杆菌中诱导表达将测序正确的重组质粒命名为?pGEX-KG-Myc， 并将其转化大肠杆菌?BL21感受态细菌， 涂板、 挑菌，在含?Amp?的?LB?培养基中?37?℃振荡培养过夜后， 取 重组菌按?1颐100??体积比接入含氨苄青霉素的?30mL?LB?培养基中，220?r/min、37??℃ 振荡培养至 OD600 =??包含各类专业文献、专业论文、文学作品欣赏、各类资格考试、外语学习资料、生活休闲娱乐、行业资料、58山羊c-Myc原癌基因克隆、原核表达和GST-Myc融合蛋白纯化等内容。　
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Spectra Multicolor Low Range Protein Ladder, 25 &l
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PageRuler Broad Range Unstained Protein Ladder, 2 x 250 &l
&2 x 250 &l
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PageRuler Broad Range Unstained Protein Ladder, 25 &l
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PageRuler Low Range Unstained Protein Ladder, 2 x 250 &l
&2 x 250 &l
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PageRuler Low Range Unstained Protein Ladder, 25 &l
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Spectra Multicolor Broad Range Protein Ladder, 2 x 250 &l
&2 x 250 &l
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PageRuler Prestained NIR Protein Ladder, 2 x 250 &L
&2 x 250 &l
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PageRuler Prestained NIR Protein Ladder, 25 &L
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Thermo Scientific PageRuler Unstained High Range Protein Ladder, 2 x 250 &L
&2 x 250 &l
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Thermo Scientific PageRuler Unstained High Range Protein Ladder, 25 &L
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