MTT实验结果判断(对照组,低浓度,高浓度,实验原理)
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[MTT实验结果判断(对照组,低浓度,高浓度,实验原理)] 上周做的MTT实验，结果很意外，对照组OD值0.2054，低浓度组OD值0.2084，中浓度组OD值0.3150，高浓度组OD值0.3792。按照MTT实验原理，活细胞越多OD值应该越高（产生的formazan约多），那对照组OD值应该最高才对。为什么我的结果刚好相反，是什么原因呢？请各位高人赐教，帮小弟分析一下，先谢了。 关键词:[对照组 低浓度 高浓度 实验原理 活细胞]…
上周做的MTT实验，结果很意外，对照组OD值0.2054，低浓度组OD值0.2084，中浓度组OD值0.3150，高浓度组OD值0.3792。按照MTT实验原理，活细胞越多OD值应该越高（产生的formazan约多），那对照组OD值应该最高才对。为什么我的结果刚好相反，是什么原因呢？请各位高人赐教，帮小弟分析一下，先谢了。
回复低浓度组\中浓度组\高浓度组是什麽药吗？回复药物的颜色可能会对结果产生影响，比如阿霉素在浓度较高时显红色，从而导致高浓度组OD值反而较低浓度组高！希望对你有用！回复我做的mtt也出现类似情况，我用的是肾上腺素损伤细胞，可是对照组的od值很低0.1左右，100微克的肾上腺素组的od值却很高，镜下观察这一组是细胞皱缩，有许多絮状物飘在细胞层上，不过孔板底确实长满了似乎是细胞的细小颗粒，起初以为是污染，但发现浓度高的用药组均出现这种情况，加入mtt没几分钟，就可以看到紫蓝色结晶。好象如果是污染的话mtt 染色应该是颜色偏浅的，但我的对照组一直是颜色偏浅，od值仅在0.1左右，请大家帮我分析以下，谢谢！回复更正lilygood，污染的话MTT结果的颜色是变深的，我做MTT时曾经有过个别孔细菌污染，结果污染孔颜色极重，能高出一个数量级。回复首先谢谢各位我做的是用一种荧光物质（波长大概610nm）来干预Hela细胞生长，不知道是不是对结果有影响。另外孔内细胞未长满，小气泡，或者MTT的量是不是也会有影响，听听大家的高见吧回复小气泡是有影响的，细胞没有长满也没有关系，加MTT后轻轻震摇均匀就可以了MTT 就用过5MG/ML的，不知道，应该也有影响的，不过同一批细胞应该影响不大回复我也有同样的问题，给药组的od值高于空白对照，如果药物没有背景颜色的话，最大原因是什么呢/希望和大家交流回复我也有同样的问题，给药组的od值高于空白对照，如果药物没有背景颜色的话，最大原因是什么呢/希望和大家交流回复如果其它操作无误的话，而且差别很大的话，那可能就是你的药物对细胞没有抑制作用反而有增殖作用了。还可以尝试一下提高浓度，药物的作用时间！回复我的目的是为了检测一种新的荧光物质对活细胞是否有毒性作用及是否抑制细胞生长（国外报道有毒性），选择MTT方法应该可以吧，希望能够得到大家的支持，一起交流一下。回复1，药物浓度是要摸索的，参考浓度一个是临床上的用药，换算成细胞用药的浓度，一个是参考前人做过的浓度，如果这两样都没有，那只好自己来摸索了。2，药物浓度的设置一般是等比级，例如2，4，8，16，等等。一种是指数形式，即10的几次方那种。一次可以设5组，根据结果再上下调整。时间也需要参考的！有些药物作用迅速，有些要慢些！3，用药后（干预因素都可以），OD值与细胞对照比是高是低，除了取决于药物本身的毒性外，还要注意溶剂（溶解药物的液体）对细胞生长的影响，所以摸索实验还要有溶剂对照。——除非你确定有报道你用的溶剂对细胞生长没任何影响！4，其他意外因素：还有一个问题：加进去的MTT，DMSO会不会和细胞以外的成分发生化学反应！——有些细胞分泌一些因子出来，可能会干扰实验本身的原理，这种就不能用MTT法了！细胞被污染的时候，颜色也会受到干扰，OD结果也不准的！5，还有一种对比实验，麻烦一些，不过可以用于那些怀疑药物确实没作用，又不敢确定是否完全平衡掉影响因素的朋友。就是数细胞了，在显微镜下台盘蓝法（只染死细胞）对，同样要有细胞对照。这个麻烦点，但可以大致知道干预因素是否影响细胞生长了！6，以上是影响OD值的主要因素，还有些例如加样的准确，或者板子本身的颜色，以及DMSO的时间，MTT的时间，都属于要平衡的因素了，只要设置好对照就可以了！回复建议楼主可以试试改良的MTT就是CCK-8 ，可以搜搜看，线性关系比较好些，也不会有沉淀。国外最新活细胞活性检测方法 同仁化学另外好像你做的时间有没有足够，对照组最好等到od值近1为好吧，如果你是做抑制实验的话。回复还有一种情况：细胞接进去的时候，可能细胞之间的个体差异而导致的细胞数量的不同，也许你这种药物对细胞没有什么抑制作用吧.回复首先，你应该重复一下实验。在加入MTT之前，在显微镜下观察一下细胞的多少。这样就可以判断是细胞的问题，还是检测的问题了。很简单的事情。另外各种因素对结果都有影响。一般只是DMSO检测时就有背景的，并且不同空有差异。这也是考虑因素。回复同意楼上意见.显微镜下可以清晰看见细胞,怀疑检测结果不对的话可以直接数细胞.比如在20倍镜下数几个镜头比较,太离谱可以看的出来.其次加DMSO摇匀后注意颜色,颜色深的OD值低肯定有问题.如果对照组细胞确实少的话,检查操作过程,排除浓度错误,细胞未混允的因素.,回复OD值才0.2几的话板中接的细胞量也太少了吧？细胞数太少的话对实验结果影响太大，建议楼主把接种的细胞浓度加大再重复做几次吧，个人认为对照组OD值在1.0~2.0之间较为合适。回复我认为接种的细胞量太少了，在这种情况下MTT的误差是很大的，这样在细胞增殖时，任何偶然的因素都可能产生比较明显的影响，建议加大细胞浓度。做正式实验之前先预试，除了要预示药物浓度（梯度），MTT浓度，作用时间，还有溶剂对照，空白对照，细胞浓度，选择最佳的做效果才好。回复我不知道回复我不知道回复我不知道回复我不知道回复我不知道回复我不知道回复我不知道回复我不知道回复我不知道回复首先谢谢各位的建议。接种细胞数少可能是原因之一吧，细胞接种后在孔内的生长状态不好也会影响到结果吧。CCK8的原理与MTT是一样的吗？回复MTT说明书上就没有一些类似的注意事项吗？
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做MTT中100uM指的多少浓度
另外如果为固体样品;ml,配100uM药物浓度该怎么配MTT中100uM指的是umol&#47,溶剂为DMSO;L还是ug&#47
uM指umol/L,需要样品的量为 100X(10^-6) mol&#47.你首先应该知道其物质的量Moleculor Weight。如果你用1mL DMSO. 样品瓶子上一般标为MW，如果没标 就到网上查;LM指mol/L * 1X(10^-3) L * MW g&#47
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[求助]MTT试验中的MTT的终浓度和DMSO的量？
[求助]MTT试验中的MTT的终浓度和DMSO的量？
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这个帖子发布于9年零173天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请问：在MTT试验中，MTT的终浓度必须是0.5mg/ml吗？DMSO的量如何确定？
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以5mg/ml的MTT浓度加到溶液中，终浓度是0.5mg/ml，这是很多文献上一致的做法，好像MTT说明书上也是（记不太得了），四到六小时后，吸去溶液，加入DMSO，根据我的经验，DMSO的量以溶解后测量值在仪器的检测可信范围内就行（打个比方，如果24孔板中一个孔我可以加500ul，如果值太高，我可以吸出100，用100毫升DMSO稀释，知道达到要求，当然各孔是平行的）
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我们实验室是MTT的终浓度是0.2mg/ml.好象0.5也可以的.加MTT后温箱孵育4小时后,把孔里的液体吸出来,再加150ul的DMSO.就可以了(96孔板)
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我们也是常把5mg/ml的MTT10ul加到每孔已有100ul的培养板中，其实终浓度就不是0.5mg/ml了，所以我想这个浓度也是大致的吧，也可能结果只是做出来一个趋势，所以要求不那么绝对严格吧。谢谢以上两位。
重症医学科
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感觉MTT浓度不能太高,支持楼主的观点,我的终浓度差不多也这样.20ul加到15ul里面.效果很理想.
重症医学科
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20ul加到150ul里,上面打错了,不好意思.
关于丁香园做MTT时,96孔培养板细胞浓度该是多少?_百度作业帮
拍照搜题，秒出答案
做MTT时,96孔培养板细胞浓度该是多少?
做MTT时,96孔培养板细胞浓度该是多少?
博凌科为我觉得细胞的浓度并不需要那么精确,关键是接种于每孔的细胞数就大致处于同一水平.比如我做MTT,起初用的细胞浓度为5000/ml,每孔100ul,培养3天观察,发现细胞数太少,各孔OD值反面难于比较.后来我换用 10000/ml,结果就很好.当然细胞数也不能太多,这其实取决于你细胞的生长速度,生长快的细胞,可接种浓度低点.这主要是使细胞增殖率不致受处理因素之外的其他因素影响,比 如接触抑制,营养竞争.总之,做MTT时细胞数应较低,目的就是为了排除其他因素的影响,以使每孔细胞生长情况尽可能地反映出处理因素的影响.细胞接种的浓度和你的实验目的、要求、细胞种类、处理因素的特殊要求都有关系.没有简单的,每孔接种多少的一个标准.当然,可以用楼上建议的浓度开 始摸索.同时,注意肿瘤细胞核正常细胞的生长数度也不一样,前者生长快,后者慢,细胞数的量也有讲究.到底多少合适,得根据你的实验具体要求来摸索.我做 b16转染时,因为脂质体要求细胞融合度为30%-50%,曾经没孔接种过300-500个细胞,效果非常好,}