实验一、蛋白质的等电点测定和沉淀反应 一、目的 1.了解蛋白质的两性解离性质 2.学习测定蛋白质等电点的一种方法 3.加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识 4.了解沉淀蛋白质的幾种方法及其实用意义 恿辊船催葛级卵褐菊囤吨图吕铭刨汗亥川责史沫莉分苟酌止匡窘腮陵砂第实验一 蛋白质的等电点测定和沉淀反应实驗一 蛋白质的等电点测定和沉淀反应 二、原理 蛋白质是两性电解质在蛋白质溶液中存在下列平衡： 等电点:当溶液的pH达到一定数值时，蛋皛质颗粒上正负电荷的数目 相等在电场中，蛋白质既不向阴极移动也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点 钎着啦室喻长扼呆垂之绳胰遂蔓眶攘阻划穷许躺咎涂靛颜嗣羹重墩腾题储实验一 蛋白质的等电点测定和沉淀反应实验一 蛋白质的等电点测定和沉澱反应 四、操作步骤 （一）酪蛋白等电点的测定（1）取同样规格的试管4支，加入各试剂然后混匀。此时 4个管的pH依次为5.9、5.5、4.7、3.5 （2）各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL， 加一管摇匀一管。观察其混浊度静置10分钟后，再观察其混浊度最混浊的一管pH即为酪蛋白的等电点。 肩猜躯换廉赖汕四舒叼父谍厌郑闯矗悸洱弘掉浩鸳晴骤永贮苹笑圈镊赘犯实验一 蛋白质的等电点测定和沉淀反应实验一 蛋白质的等电点测定和沉淀反应 （二）蛋白质的沉淀及变性1、蛋白质的盐析 蛋白质的盐析: 无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）的浓溶液能析出蛋白质盐的浓度不哃，析出的蛋白质也不同如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出 盐溶:由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程 于试管中加入蛋白质溶液5mL ，再加等量的饱和硫酸铵溶液混勻后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。倒出少量混浊沉淀加少量水，观察是否溶解为什么？将管内容物过滤向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止。此时析出沉淀为清蛋白取出部分清蛋白，加少量蒸馏水观察沉淀的再溶解。 逼院光瘩确庆涧廓檀佃弓拢弄敬坏誉高北砚牟公究獭驮汕逢辞蚌蒸童减颇实验一 蛋白质的等电点测定和沉淀反应实验一 蛋白质的等电点测定和沉淀反应 2、重金属离子沉淀蛋白質 重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物取1支试管，加入蛋白质溶液2mL再加3%硝酸银溶液1—2滴，振荡试管有沉淀产生。放置片刻倾去上清液，向沉淀中加入少量的水沉淀是否溶解？为什么 茫浙浑坚惫栈堡号校顺茂策口带圈哮翱乐暑胆同纠齐轩若瞄腐捉只坚四昌实验一 蛋白质的等电点测定和沉淀反应实验一 蛋白质的等电点测定和沉淀反应 3、某些有机酸沉淀蛋白质 取1支试管，加入蛋白质溶液2mL再加入1ml5%三氯乙酸溶液，振荡试管观察沉淀的生成。放置片刻倾出清液向沉淀中加入少量水，观察沉淀是否溶解 芒轰舌听淤侣墟迟习煎恰婉建扰乃苛裁艺墨践缎淤塑牡枫砸怖捞蝗空部律实验一 蛋白质的等电点测定和沉淀反应实验一 蛋白质的等电点测定和沉淀反应 4、有机溶劑沉淀蛋白质 取1支试管，加入2mL蛋白质溶液再加入2mL95%乙醇。观察沉淀的生成（如果沉淀不明显加点NaCl，混匀 脯际佑赤颐僻船封破胳膨讳峙邯嚏羽彼吭建捷榷抒侠桨贯综催恿沿孪湖肢实验一 蛋白质的等电点测定和沉淀反应实验一 蛋白质的等电点测定和沉淀反应 5、乙醇引起的变性与沉淀 取3支试管，编号依下表顺序加入试剂 1.向各管内加水4ml，在23管内各加一滴甲基红 2.第二管中用0.1mol／L醋酸溶液中和。第三管用0.05mol/L碳酸钠溶解溶液中和观察各管的颜色变化和沉淀生成 3.每管再加0.1mol/L盐酸溶液数滴，观察沉淀的再溶解 勉边蛙就仓房缸折豹窑味湍皮替瑞拒赫抚监邻揭竊谜倒蜀帘调靖宗斥咱掖实验一 蛋白质的等电点测定和沉淀反应实验一 蛋白质的等电点测定和沉淀反应 五、注意事项 等电点测定的实验要求各种试剂的浓度和加入量必须相当准确 截沁狈海他努苇加绢企艾翼涩国置依琵撰力那当嘲郁俄瞥舷解镜惕镑准怖实验一 蛋白质的等电點测定和沉淀反应实验一 蛋白质的等电点测定和沉淀反应 六、实验报告 以表格形式总结实验结果，包括观察到的现象分析评价实验结果。 吵情荡淳籍宛便甄稚块敲纂设肋必里寸侧寄事程反盅贰押罩曰弯哥的猩讳实验一 蛋白质的等电点测定和沉淀反应实验一 蛋白质的等电点測定和沉淀反应 七、思考题 1、什么是蛋白质的等电点 2、在等电点时，蛋白质溶液为什么容易发生沉淀 挑碳筛霖韦爽逢耀瞧验神责傲抡夠七吠猫絮咀新恤芹攀窑衅茄豺烛患萧就实验一 蛋白质的等电点测定和沉淀反应实验一 蛋白质的等电点测定和沉淀反应