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DNA测序样品的要求
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3秒自动关闭窗口16s DNA 鉴定试剂盒中的3个测序引物有什么用?看到TAKARA试剂盒中提到3个测序引物.只是说用来测序,以前做植物做T-A克隆了就直接送出去了.他这里给这3个引物是做什么的?_作业帮
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16s DNA 鉴定试剂盒中的3个测序引物有什么用?看到TAKARA试剂盒中提到3个测序引物.只是说用来测序,以前做植物做T-A克隆了就直接送出去了.他这里给这3个引物是做什么的?
16s DNA 鉴定试剂盒中的3个测序引物有什么用?看到TAKARA试剂盒中提到3个测序引物.只是说用来测序,以前做植物做T-A克隆了就直接送出去了.他这里给这3个引物是做什么的?
都是什么引物?应该是测序用的特异性引物吧,如果你连入TA克隆,用通用引物也一样.您所在位置： &
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多粘类芽孢杆菌SC2全基因组测序.pdf93页
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山东农业大学
硕士学位论文
多粘类芽孢杆菌SC2的全基因组测序
姓名：王翠翠
申请学位级别：硕士
专业：微生物学
指导教师：杜秉海；李俊
山东农业大学硕士学位论文
多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus
polymyxa ）SC2 是一株分离自辣椒根际的广谱拮抗
菌，并具有较好的植物促生及溶磷、解钾能力。
本研究将传统 Sanger
测序方法与 454
高通量测序相结合，利用 Newbler
Phred/Phrap/consend 软件进行基因组序列拼接，同时进行必要的PCR 重复测序以校正序
列，最终获得多粘类芽孢杆菌 SC2 基因组序列完成图谱。结果显示 SC2
的基因组由 1
条染色体和 1 个质粒组成，其中染色体的长度为 5731683bp，G+C 含量为 45.24% ；质粒
的长度为510115bp，G+C 含量为 37.61% 。建立生物信息学软件分析系统，使用Glimmer3
对全基因组序列进行开放阅读框（ORFs ）的预测，染色体及质粒分别编码 5385 个及 647
个 ORF 开放阅读框；使用 tRNAscan-SE 程序对染色体及质粒基因组序列进行扫描，发
现并注释可能的 tRNA 数量分别为 110 和 44 个；使用 RepeatMasker 定位重复区域。使
用 Rbsfinder 程序进行核糖体结合位点的预测，并获得 14 套 16S/23S/5S rRNA 操纵子区
域。下载 GenBank 上的 nr 数据库、Swiss-Prot 蛋白数据库，COG、CDD 和 String 数据
库，InterPro 整合数据库等，对基因功能进行预测及分类信息、结构域信息的二次注释。
与其他已测序的类芽孢杆菌属基因组不同的是，菌株 SC2 含有一个质粒。将注释结
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channel+catfish+rag1基因测序及rag1表达在淋巴细胞来源肿瘤MRD检测中的应用
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官方公共微信请问，克隆测序的时间及花费？(测序|克隆)
20:19:00&&&来源：&&&评论：&&
[请问，克隆测序的时间及花费？(测序|克隆)] 我的PCR产物片段为1300kb，我想了解全部序列，是否只能转质粒测序？如果自己转质粒，并转入E coli DHa5，筛选阳性克隆后送公司测序，大概要花多久时间及多少费用，我有5个标本，另我是新手。此外请大家赐教还有什么办法？谢 关键词:[测序 克隆 质粒 序列 筛选阳性克隆]…
我的PCR产物片段为1300kb，我想了解全部序列，是否只能转质粒测序？如果自己转质粒，并转入E coli DHa5，筛选阳性克隆后送公司测序，大概要花多久时间及多少费用，我有5个标本，另我是新手。此外请大家赐教还有什么办法？谢
回复:PCR产物也能直接测序，但效果不好，因为PCR产物从一定程度上讲是混合物。 将PCR产物克隆到T载体，然后再送徐测序会比较好，并且统一样本你可以重复侧，这样可以确定是PCR出现剪辑错配还是测序误差。买国产T载体比较便宜，但我没用过。我用的是Promege的pGEM-T系列，很好用的，一个样本肯能要300元， 包括克隆和测序。克隆两天，测序一般要三天以上。。回复:质粒测序是最好的办法，很省钱，而且ecoli DH5a 能够蓝白筛选，大大减少了筛选的工作量。至于价钱，看来不同地方价钱也不一样，我们这里一个样本一般60元左右，测序时间要7天。回复:那么克隆的所需的内切酶的花费计算在内了吗？再问那个公司的克隆质粒和感受态的细胞即相对经济切好用？哪位能告知我具体的操作流程呢？万分感谢！感谢楼上两位！回复:对不起，插句话：测序用的酶一定要高保真啊！否则就需要同时测两头，而实际上1300kb很少有公司能测通的。。。。。。回复:对不起，插句话：测序用的酶一定要高保真啊！否则就需要同时测两头，而实际上1300kb很少有公司能测通的。。。。。。什么意思？克隆质粒测序就是为了确切了解片段碱基序列嘛，又不是直接测序，怎么会两头不准呢？回复:是这样的，普通Taq酶PCR扩增的时候，扩增产物中很可能有错配，这样测序出来即使有一个碱基突变也不能判断是原始模板的错；但是，如果是错误扩增造成的假阳性，一般不会在反向测序时仍然在同一位点再次出现，所以说“需要同时测两头”。如果结果并不一致，就很可能是酶造成的假阳性。不过我认为，用于测序的PCR干脆用用高保真的酶，以免麻烦。回复:那么克隆的所需的内切酶的花费计算在内了吗？再问那个公司的克隆质粒和感受态的细胞即相对经济切好用？哪位能告知我具体的操作流程呢？万分感谢！感谢楼上两位！测序一般看你是用的什么载体，测序公司一般都有大部分载体的通用引物，用通用引物测序就行了，测序是不需要用到酶的，所以没有内切酶的花费。另外，现在测序一般是一个反应只能测到500个bp，你的要是1300bp的话，可能需要三个反应了。现在测序比较可靠的好像是上海生工，50元一个反应回复:
我的PCR产物片段为1300kb，我想了解全部序列，是否只能转质粒测序？如果自己转质粒，并转入E coli DHa5，筛选阳性克隆后送公司测序，大概要花多久时间及多少费用，我有5个标本，另我是新手。此外请大家赐教还有什么办法？谢我做过一些克隆，就我的经验将PCR产物转入质粒再测序的时间及经费给你一些解答：1、用高保真DNA，TaKara的pyrobest,价格400元左右，PCR产物为平末端。连接入经EcoRV酶切后回收的PII载体过夜（做克隆的一般都有，向别人要点就行），1天。2、转化，挑选白斑，提质粒鉴定：看你用几种内切酶，每种一支价格120元左右，具体可以向公司代理打听。3天3、测序：1300Bp一个反应测不通，上海博亚现在一个反应能测1000Bp，你用正反两个反应就够了，不用三个反应，否则还得合成测序用的小引物。每种质粒150元（正向选3730，测1000Bp，90元，反向选377，测500Bp，60元），7天左右。如果你做实验很细心，可以5种同时做，顺利的话，两周就可搞定了。祝你一切顺利！回复:克隆测序的整个过程大概要三天,先做PCR扩增目的片断（2小时）-------同载体连接（3小时或过夜）---转化（大约3小时）-----涂平板（过夜）---摇菌（一天）提质粒（3小时）-------酶且检测（3小时）---邮寄大概是要这个过程，不过平板，菌液，三角瓶都要提前灭菌的。
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