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微生物培养基质量控制技术和标准
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Gelometerthe LFRA Texture Analyser() Miles-MisraODICFMH ()ISOFDA
1.1.1 pH pH pH (Radiometer ASDK-2400 Copenhagen NVDenmark)(Microelectrodes IncNH03053U.S.A)pHpH202540gLNaOH36.5gL(1molL)HC1
1.1.2 pHGelometer(Marine Colloids Inc2Edison PlaceSpringfieldNJ 0708 1USA)the LFRA Texture Analyser(CSStevens&Son LtdDolphin YardHolywell HillStAlbansHertsUK)10mm25mm
1.2.1 5 (TSA)1824h1015-50-70-50-701-50-201
1.2.2& (1)Miles-Misra 4mm44l14
(productivity ratiosPR) =N8N0N0=N8=m Mm 80M1001
G1 160.5 ()0G ABCG106G
1.2.3 (1) 10mL ( 10100cfu) (&l000 cfu)
( l0100cfu) (&1000cfu)
Pr ()P 0.1
Sf () Sf=Do-Ds.
Do10Ds l0Sf, DoDo log10
Do 10 =log 4 =4 Ds 10-3=log103.0=3 Sf =1.0Sf2
(2)OD Bioscreen microbialogical growth analyzer(Labsystems OyHelsinkiFinland) ODOD
2.1 & 1984 (The International Committee for Food Microbiology and HygieneWorking Party for Culture Media)(ICFMHWPCM)
(FDA)80 (The National Committee for Clinical Laboratory StandardsSubcommittee on Media Quality Contro1) (NCCLS) 1985
1990M22-A19962001
ISO2000ISOTS 11133-1& 2003 ISOTS11133-2
(10100cfu)
1990 1993 2002
NCCLSWST232-200220053
WST232-2002 M22-A WPCM 52001 Ontario124 NCCLSATCC 1993
[1]Curtis G D wInternational Journal of Food Microbiology198521320
[2]NCCLSNCCLS document M22A2 (ISBN )199616(16)
[3]Otto VAmerican Journal of Medical Technology197743(4)345348
[4]Appendix AInternational Journal of Food Microbiology198521331 36
[5]The International Organization for StandardizatinISOTS 11133-22003
[6]Johnston M DJournal of Microbiological Methods1998323743
[7]International Committee on Food Microbiology and Hygiene(1CFMH)Quality Assurance and Quality Comml of Micro biological Culture Media1984
[8]NCCLSNCCLS document M22A3(ISBN l~)200424 (19)
[9]The International Organization for StandardizatinISOTS 1 1 1 3312000
[12]Zoutman DFleming CRichardson HDiagnostic Microbi0l0gY and Infecti0us Disease2002422934
地址：青岛市李沧区九水东路320号-25 &&&邮编：266100&&&E-mail:&&&
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学科：生物编号:7年级：高二级部：理日期：3月2课时题目：微生物的实验室培养课型：新授课制作人：审核人：一、学习目标：1.了解有关培养基的基础知识，掌握无菌操作技术的有关内容。2.了解消毒和灭菌常用的方法及二者的区别。3.学会以大肠杆菌为材料进行微生物培养与分离纯化的方法。二、自主学习1．培养基(1)概念：人们按照微生物对________________的不同需求，配制出供其________________的________________。(2)成分：一般含有______、________、________、________，此外还要满足微生物对__________________(即生长因子)、________以及氧气的需求。拓展深化营养物质定义作用主要来源碳源能提供所需______的物质构成生物体的________和一些________，有些是异养生物的________无机化合物：CO2、NaHCO3等；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源能提供所需______的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐等；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等特殊营养物质(生长因子)生长必不可少的__________酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸、碱基等水在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高不仅是优良的溶剂，而且可维持生物大分子结构的稳定无机盐为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素细胞内的组成成分，生理调节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂(3)培养基的种类划分标准培养基种类特点用途物理性质______培养基加凝固剂，如琼脂________半固体培养基观察微生物的运动、分类、鉴定______培养基微生物____、____、活菌计数、保藏菌种化学成分______培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产______培养基培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成)分类、鉴定用途______培养基培养基中加入某种化学物质，以____不需要的微生物的生长，____所需要的微生物的生长培养、____出特定微生物(如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素或链霉素；培养固氮菌可用无氮培养基，如阿须贝培养基)______培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品____不同种类的微生物，如可用伊红―美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽)注意 病毒目前不能利用人工培养基来培养，需接种在动、植物组织细胞中才能繁殖。常用于培养病毒的是活鸡胚。2．无菌技术(1)概念：防止一切外来杂菌的侵入，并保持灭菌物品及无菌区域不再被污染的方法，称为无菌技术。注意 在微生物的实验室培养中，无菌技术的核心是________________，________________。(2)无菌技术的具体内容①对实验操作的________、操作者的________________进行清洁和消毒。②将用于微生物培养的__________、接种用具和培养基等进行________。③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在________________进行。④实验操作时应避免已________处理的材料用具与周围的物品相接触。(3)消毒和灭菌的概念①消毒：消毒是指使用________的物理或化学方法杀死物体表面或内部的________________(不包括芽孢和孢子)。②灭菌：灭菌是指使用__________的理化因素杀死物体内外________________，包括____________。③消毒与灭菌的区别：两者最大的区别是________________________。拓展深化 某些细菌在其生长发育后期，可在细胞内形成一个圆形的抗逆性休眠体，称为芽孢。每个细菌细胞仅形成一个芽孢，故它无繁殖功能。芽孢有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压的能力。芽孢的休眠能力十分惊人，可保持几年到几十年的生活力。孢子是微生物产生的一种有繁殖或休眠作用的细胞。一般是单细胞，个体微小，通常是适应于从不利环境条件中存活下来，并在条件改变时产生新的营养体，能直接发育成新个体。(4)消毒与灭菌的常用方法方法条件作用对象消毒________100℃，煮沸5～6min杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢____________70～75℃煮30min或80℃煮15min不耐高温的液体____________70%的酒精对双手消毒50%的石炭酸、来苏水对空气消毒一定浓度的乳酸、食醋通过熏蒸对空气进行消毒紫外线法紫外线照射30min物体表面或空气中的微生物灭菌________在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧对接种环、接种针或其他金属工具灭菌，也可以对试管口、瓶口灭菌________在干热灭菌箱内，160～170℃条件下，加热1～2h耐高温且需保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属用具等____________在高压蒸汽灭菌锅内，121℃，100kPa，灭菌15～30min____________30W照射30min小型接种室、接种箱等三、瓶颈突破一知识点一 培养基与无菌技术【典例1】．不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是( )A．氮源物质为该微生物提供必要的氮素B．碳源物质也是该微生物的能源物质C．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质D．水是该微生物的营养要素之一针对联系1．下列说法正确的是( )A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B．培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C．除水以外的无机物只能提供无机盐D．无机氮源不可能提供能量四、限时训练1．某学校打算开辟一块食用菌栽培基地，以丰富学生的劳动技术课内容。首先对食用菌实验室进行清扫和消毒处理，准备食用菌栽培所需的各种原料和用具，然后从菌种站购来各种食用菌菌种。请根据材料回答下列问题：⑴对买来的菌种要进行扩大培养，首先需要制备培养基，写出制备LB固体培养基所需要的原料：蛋白胨、、、和。⑵微生物在生长过程中对各种成分所需量不同，配培养基时各成分要有合适的。在烧杯中加入琼脂后要不停地，防止琼脂糊底导致烧杯破裂。⑶将配好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干个试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入中灭菌，温度为，时间为。灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力自然降到0时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基，此试管应。⑸从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯焰灭菌，并且待接种环后蘸取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的试管在适温下培养，长成菌落后放入℃冰箱中保存。2．利用微生物分解玉米淀粉生产糖浆，具有广阔的应用前景。但现有野生菌株对淀粉的转换效率低，某同学尝试对其进行改造，以获得高效菌株。⑴实验步骤：①配置（固体、半固体、液体）培养基，该培养基的碳源应为。②将接入已灭菌的培养基平板上。③立即用适当剂量的紫外线照射，其目的是。④菌落形成后，加入碘液，观察菌落周围培养基的颜色变化和变化范围的大小。周围出现现象的菌落即为初选菌落。⑵分离：将初选菌落向液体培养基中接种时应注意，接种环要在酒精灯（内或外）焰灭菌，并且待接种环后蘸取菌种，防止细菌菌体死亡；菌体的分离可采用法，出现时标志着菌落已被分离。在无菌操作下，将单菌落用接种环取出，接种到斜面上，适宜温度下培养一段时间，长成菌落后放入℃冰箱中保存。3．回答下列有关细菌培养和分离的实验⑴在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑、和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小，结构简单、变异类型易选择、、等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。⑵在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行（消毒、灭菌）；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能。⑶若在涂布分离法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的。⑷通常对获得的纯菌种还可以一句菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的。⑸培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对固体培养基应采用的检测方法是。⑹若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过处理后才能丢弃，防止培养物的扩散。4.某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如图所示。请分析回答问题：（1）培养基中加入化合物A的目的是筛选_________，这种培养基属于选择培养基。（2）“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的__________，实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是__________。（3）培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量_______的培养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量______。（4）转为固体培养时，常采用______的方法接种，获得单菌落后继续筛选。（5）若研究“目的菌”的生长规律，将单个菌落进行液体培养，可采用________的方法进行计数，以时间为横坐标，以___________为纵坐标，绘制生长曲线。（6）实验结束后，使用过的培养基应该进行______处理后，才能倒掉。
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