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SAT日在香港考试的考生什么时候可以查到成绩？
可以到collegeboard上登入个人帐号，在那里会显示还有多少天会出成绩，不过这次SAT考试普遍成绩都延期了，点开score的那个选项
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是10月11号的考试延期了
20天之后吧。。
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出门在外也不愁第28届北京青少年科技创新大赛
&&&&&&&&&&&
&&&&&&&&&&&&&&&植物学
莴笋组培脱毒及病毒检测的研究
北京市第一○一中学 赵博
辅导教师 马丽霞
&&&&本文把腋芽尖培养和愈伤组织培养相结合，开展莴笋组织培养脱病毒及病毒检测的研究。首先把腋芽尖接种在NAA 2.0(单位mg/L下同) + BA 0.1、NAA 1.0 + BA 0.1、NAA 0.5 + BA 0.5和NAA 0.1 + BA 1.0的4组含不同激素浓度组合的Ms+蔗糖3％+琼脂0.9％，pH6.0-6.5 的诱导启动培养基上，结果4组培养基上愈伤组织诱导率均为100%，而苗芽分化率存在较大差异分别是0%、33%、60%和90%。选择苗芽分化率为0%的含有NAA 2.0 + 6BA 0.1的一组培养基作为愈伤组织诱导继代增殖培养基进行愈伤组织继代增殖，然后转移到1/2MS（大量元素）+ NAA 0.01 + BA 0.01+ 蔗糖3%+琼脂0.9%，pH6.0-6.5的苗芽再分化增殖培养基上进行绿苗再分化并增殖生根形成组培苗，炼苗、移栽成活后定植在大田土壤中生长，开花结实后收获组培苗种子，播种田间长出组培种苗，继续收获种子播种田间长出组培种2代苗；对成功获得的愈伤组织、组培苗、组培种苗、组培种2代苗及其非组培苗分别取样，同时送交病毒检测机构。结果在检出非组培苗感染黄瓜花叶病毒的同时，其余样品都没有病毒，脱毒率达到100%，说明组织培养脱病毒的研究在莴笋上也已经取得成功，对于种子传毒的有性繁殖植物也是有效的，能够克服它们的病毒病害损失。此外，还做了腋芽尖直接组培成苗的对照实验，检测结果显示脱毒率为83.3%，说明腋芽尖培养和愈伤组织培养相结合对于完全脱除病毒很有必要。
关键词：莴笋，腋芽尖，愈伤组织，脱毒。
&&&&Research of producing Lactuca angustana virus-free plants and seeds by tissue culture was experimented with tip of axillary bud. While the CMV which could infects Lactuca angustana were detected by the method of indirect ELISA, and no virus was found in calluses, differentiation shoots from calluses, their seed offspring and progenies of the seed offspring, a technical procedure of producing Lactuca angustana virus-free plants was summarized as follows. Calluses were induced and proliferated over one time from tip of axillary bud planted on the medium: MS + NAA 2.0 mg/L (below unit same as this) + 6BA 0.1 + sucrose 3% + agar 0.9%，pH6.0-6.5. The tissue shoot differentiated from the Calluses transferred on the medium: MS + NAA 0.01 + 6BA 0.01 + sucrose 3% + agar 0.9%，pH6.0-6.5. Virus-Free Seeds harvested from the tissue shoot planted in fields. Using Virus-Free Seeds into production of Lactuca angustana would reduce the heavy loss from infection by Virus.
Key Word: Lactuca angustana , Tip of axillary bud, callus, virus-free
&&&&中考结束后，想放松放松，就去郊区的同学家玩，参观她家的菜地时，发现地里种的莴笋参差不齐，有的十分瘦小，有的莴笋叶片发黄并打卷儿，她说这个问题据说是由于莴笋感染了病毒病的缘故，常造成产量和品质的严重损失，打过多种农药都无济于事，已困扰了农民们很久。如何解决这一难题呢？一，可以周年倒茬种，但其它蔬菜或粮食作物的种植收入远低于莴笋，农民们不愿意采纳；二，可以选择感病毒轻的品种种植，但农民们也试验过，未发现明显感病毒轻的品种，一些感病毒略轻的品种却不高产；这时，我想到生物课本上提及过茎尖培养可以有效脱去病毒的内容。于是将这一想法向教过我生物课的马老师汇报，在她的鼓励指导下，查阅了大量文献。莴笋（Lactuca angustana hort. ex Vilmorin[1]），即菊科莴苣属茎用莴苣，是我国南北栽培较广的蔬菜，茎叶都能食用，富含各种维生素和矿物质，具有独特的营养保健功效。但是，莴笋感染莴苣花叶病毒（简称LMV）、蒲公英黄花叶病毒（简称DYMV）、黄瓜花叶病毒（CMV）[2]、巨脉病毒、坏死黄化病毒[3]后，防治困难，损失严重[4]。已经有马铃薯等许多无性繁殖的经济植物通过茎尖培养脱病毒获得无病毒植株在生产上得到广泛推广的实例[5] [6]，但莴笋上还没有发现任何有关进行组织培养与脱病毒研究的报道。因此，决定开展莴笋组织培养脱病毒及病毒检测的研究。
1 材料与方法
1．1 试验材料
&&&&选择北京郊区农民们喜欢种植、笋茎产量较高、菜市场售价较贵的2个莴笋品种作为研究对象：即“北京鲫瓜笋”和“柳叶笋”。
1．2 研究方法
1．2．1 研究思路
&&&&文献[5] [6]报道，目前生产上脱病毒应用的多为茎尖、芽端或苗端的培养，个别也用花药培养。茎尖和花药培养的依据主要是植物细胞的全能性学说和植物病毒在寄主体内分部不均匀理论。前者是说植物细胞含有全套遗传基因，具有形成完整植株的能力；根据后者的理论就可以用病毒分布较少或没有病毒的植物根尖、茎尖、花药作为外植体进行培养，从而获得脱毒苗。这时对外植体的大小要求很高，一般要求长度小于1mm，越小的脱毒效果越好，但是培养成活率变低，而且要用解剖镜无菌剥离，操作麻烦。文献[6]也提到愈伤组织培养脱毒方法，原理是病毒复制与细胞增殖不同步，愈伤组织细胞无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞的不断分裂和活跃的生长速度，所以病毒数量极其微少。
&&&&如果把茎尖或花药培养与愈伤组织培养相结合，取长补短，不就可以操作简单点不用解剖镜也能脱毒效果好吗！这就形成了本研究的思路：田间正常和发病植株――取材――消毒――腋芽尖或花药剥离与接种――愈伤组织继代增殖――组培苗的再分化――组培苗的移栽――结实种子播种长成组培种苗――结实种子播种长成组培种2代苗――病毒检测――看莴笋组织培养脱病毒是否成功：如果愈伤组织、组培苗、组培种苗都没有病毒，而且组培种苗的田间表现同原来正常株，只有原来病株的非组培种苗能够检测到病毒，则说明成功。
1．2．2 组织培养
腋芽尖培养：
&&&&由于迄今还没有关于莴笋组织培养的文献报道，就参考与莴笋同属的生菜与山莴苣组织培养的有关方法[7] ~[11]，以及甘蔗通过愈伤组织培养获得100%无病毒植株的报道[12]，制定本培养计划，即取莴笋成株顶梢部，浸入体积分数为70-75％乙醇中30 s，再浸入有效氯含量为1%的次氯酸钠溶液进行表面消毒25-30min，然后用无菌水冲洗干净，在无菌条件下切取腋芽尖为外植体，接种于4组含不同激素浓度（mg/L）（见表2）的Ms+蔗糖3％+琼脂0.9％，pH6.0-6.5 的诱导启动培养基上，置于20-38℃的培养室中光照培养；一定时间后根据培养情况，从4组启动培养基中选出只长愈伤组织、不长苗的1组培养基作为愈伤组织诱导继代增殖培养基进行愈伤组织继代增殖，然后转移到1/2MS（大量元素）+ NAA 0.01 + BA 0.01+ 蔗糖3%+琼脂0.9%，pH6.0-6.5的苗芽再分化增殖培养基上进行绿苗再分化；待幼苗长出完整根系（这时的苗我们称谓组培苗）后，揭去封口膜，开瓶炼苗2―3 d，然后取出组培苗，洗去根部琼脂，先过渡种植于1/1000多菌灵灭菌的装有1份珍珠岩和3份草炭土混匀的花盆中或直接种植在大田土壤中，浇足水后用塑料布覆盖保湿1周，每天要打开塑料布透气一会儿。待组培苗成活后，撤去塑料布，连带花盆土壤移栽田间生长，开花结实后，收获组培苗种子。
花药培养：
&&&&参考草莓花药培养与组培方法[13] [14]，取莴笋成株花枝，切下花蕾，用体积分数为70-75％乙醇浸泡过的棉球檫过表面，在无菌条件下剥取花药接种，培养方法同上。
1．2．3 大田播种定植初步验证脱毒效果
&&&&在苗盘中播种组培苗种子，出苗（这时的苗我们称谓组培种苗）后在大棚和大田中播种定植栽培，与未经脱毒的植株进行对照，分别考察生长变化的情况，以初步验证脱毒效果。收获组培种苗开花结实后的种子，继续播种，长出苗（这时的苗我们称谓组培种2代苗）后，仍然定植观察，进行重复验证。
1．2．4 病毒检测的专门机构检测脱毒效果
&&&&委托北京市农林科学院植物保护环境保护研究所完成。送检样品采自莴笋正常株和病株的愈伤组织、组培苗、组培种苗、组培种2代苗，以及作为对照的原来病株的非组培种苗。如果只有原来病株的非组培种苗能够检测到病毒，则说明莴笋组织培养脱病毒成功。
1．2．5 不同组织培养脱毒方法的脱毒效果比较
&&&&我们设计研究的是茎尖或花药培养与愈伤组织培养相结合的方法，很想实际比较它与单独茎尖培养或单独花药培养的脱毒效果。因此，在上面1．2．2中当4组含不同激素浓度的诱导启动培养基上有再生苗时，把一部分苗不转移到愈伤组织诱导继代增殖培养基上，而是直接转移到苗芽再分化增殖培养基上进行绿苗增殖培养，采集样品编号对应于表4中的好株组培1或病株组培1；把其余苗和愈伤组织都按照我们的设计方法先转移到选择的愈伤组织诱导继代增殖培养基上进行愈伤组织诱导增殖，然后才转移到苗芽再分化增殖培养基上进行绿苗增殖培养，采集样品编号对应于表4中的好株组培2或病株组培2，一起送检进行脱毒效果比较。
2 结果与分析
2．1 组培采样株生长状况
&&&&实际到农民种植的莴笋田间，目测观察成熟后的莴笋正常株和病株（图1-3），各采回3株进行比对、观察和测量（表1），最后装入塑料袋带回实验室组培。由表1整理计算得到图4，可见莴笋感病株比正常株的株高降低、笋茎变细，带叶质量和茎重明显降低，亩产量和亩产值严重受损。由此可以想见开展本研究的必要性和重要性。
2．2 腋芽尖组织培养情况
&&&&从采样株上切下顶梢，消毒（图5）后在超净工作台上去掉叶片用解剖刀切取腋芽尖（图6），接种（图7）到培养基上，每瓶7个（图8）；两周后培养基上的腋芽尖有的萌动伸展成叶片（图9），有的脱分化形成愈伤组织（图9、图10）；3周时愈伤组织继续增殖，原来伸展的叶片随着愈伤组织的产生而出现芽丛（图11、图12）；4周时有的芽丛中开始再分化出绿苗（图13）；40天时开始有愈伤组织和芽丛出现褐化现象（图14、图15），表明生长受限必需转移到新的培养基上继代培养。继代前按瓶总结统计培养情况记录到表2中，由表2整理计算得到表3，可见所有4种激素组合下，愈伤组织诱导率均为100%，而苗芽分化率存在较大差异， NAA 2.0 + BA 0.1的第1组培养基上没有苗芽分化，可以专门作为愈伤组织的诱导继代增殖培养基；其它3组培养基上的苗芽分化率分别为33%、60%和90%，所分化苗芽一部分直接转移到苗芽分化增殖培养基上成苗（记为组培1），一部分转移到愈伤组织的诱导继代增殖培养基上继续脱分化培养（所形成愈伤组织记为愈伤2，再分化的苗记为组培2）。
&&&&从表3中还可以发现，不同采样株的苗芽分化率也存在差异，表现正常植株的腋芽尖组培苗芽分化率比表现感病植株的高；对比图9和图10、图11和图12、图14和图15，也可发现表现正常植株的腋芽尖的愈伤组织和苗芽增殖速度都比表现感病植株的快。这表明表现感病植株的外植体内的病毒可能也对组织培养过程产生抑制效应。
&&&&苗芽分化增殖培养基上的培养物，一般3到6周后均可形成绿苗（图16），有部分绿苗也同时形成再生根（图17）而成为完整植株（图18）。炼苗后移栽到花盆中（图19），过渡种植（图20）约2周时间，完全成活后定植于日光温室田间约4周时间开花结实（图21），收获组培苗种子供后续试验。
2．3 花药培养情况
&&&&取莴笋成株花枝，在室内临时水培（图22），切下花蕾（图23），在超净工作台上消毒后剥取花药（图24），接种到培养基上（图25）。培养1周后全部污染，说明所用简单消毒方法不当，有待以后改进。
2．4 大田播种定植初步验证脱毒效果
&&&&把所收获的组培苗种子，取一部分先播在苗盘内（图26、图27）育出组培种苗（图28），然后定植在田间，在非组培苗种子后代植株中出现病毒感染植株（图1）的同时，组培种苗植株中未观察到病毒感染植株（图29），初步说明腋芽尖愈伤组织培养具有明显脱毒效果。收获组培种苗植株所结实种子，以备发芽育出组培种2代苗供后续实验。
2．5 病毒检测的专门机构检测脱毒效果
&&&&检测实验样品的采集设计与编号见表4，委托北京市农林科学院植物保护环境保护研究所检测的结果见表5。对应表4和表5数据可见，在供检测的14株莴笋成株期植株样品中，20-23号4株样品的检测结果均为阴性，与设计时考虑它们同属1个感病毒轻的品种而作为阴性对照的思路吻合，从而也验证其是名副其实；6-10号5株样品中有4株呈阴性，1株外观表现较次的正常株被判定为接近阳性，基本与设计思路吻合，处于正常株和病株的临界位置时，肉眼观察的灵敏度就不及仪器了；1-5号5株样品只有外观表现感病最轻的5号显示阳性，感病程度中等的3号为接近阳性，其余3株尤其是外观表现感病最重的2株都却呈现阴性，这表面看来似乎与设计思路不符合，但实际考虑病毒是随着细胞增殖生长而繁殖时，恰恰反映它们早期染病毒最重而严重抑制细胞生长甚至死亡，才使器官矮小瘦弱到外观明显为感病最重植株。因此，说明本次检测结果有效可靠。
&&&&其余28份样品中，3份非组培种苗中就有2份呈现阳性，阳性率为67%；3份感病毒轻品种的样品全部呈现阴性，阳性率为0；剩余22份经过腋芽尖组织培养后的样品中仅有1份呈现阳性，阳性率仅为4.5%，说明脱毒效果良好。
2．6不同组织培养脱毒方法的脱毒效果比较
&&&&由于花药培养全部污染，这里就考察腋芽尖直接成苗和腋芽尖经愈伤组织继代增殖后再生苗这2种组织培养脱毒方法的脱毒效果。仔细分析表4和表5，22份经过腋芽尖组织培养后的样品中，33、35、36、38、39、42等6份是腋芽尖直接组培成苗的方式，其中35号呈现阳性，阳性率为16.7%，脱毒率为83.3%；其余16份均是腋芽尖经愈伤组织继代增殖后再生苗的方式，全部呈现阴性，阳性率为0，说明脱毒效果最理想，脱毒率达到100%。
&&&&进一步分析表4和表5，16份都是采取腋芽尖经愈伤组织继代增殖后再生苗的脱毒方法的样品中，不仅愈伤组织、再生苗或移栽苗等组培当代样品表现脱毒完全，而且由组培苗结实种子播种后长成的24-27号组培种苗，尤其是由组培种苗再次结实种子播种后长成的14-16号组培种2代苗，都仍然全部呈现阴性，保持无毒状态，说明我们设计使用的腋芽尖结合愈伤组织培养的组织培养脱病毒方法对于种子传毒的有性繁殖植物也是有效的。
&&&&本文把腋芽尖培养和愈伤组织培养相结合，开展莴笋组织培养脱病毒的研究已经取得成功，按照这种方法获得的愈伤组织、组培苗、组培种苗、组培种2代苗送交病毒检测机构检测表明脱毒率达到100%，说明莴笋组织培养脱病毒方法对于种子传毒的有性繁殖植物也是有效的，能够克服它们的病毒病害损失。腋芽尖直接组培成苗的对照实验的检测结果显示脱毒率为83.3%，说明腋芽尖培养和愈伤组织培养相结合很有必要。
&&&&1．首次从莴笋腋芽尖诱导出愈伤组织并再生出完整植株，为莴笋组织培养脱病毒、细胞和基因工程育种以及生理生化研究奠定了基础。该创新点的依据是关于莴笋组织培养，经过专门文献检索机构检索目前还未见文献报道。只发现与莴笋同一个莴苣属中的生菜（叶用莴苣）和山莴苣2个物种从1989年开始有组织培养的研究报道，这为我的研究提供了一定的借鉴。
&&&&2．经病毒检测证实，获得了莴笋脱病毒的组培苗及其脱病毒的组培种苗，从而首次经实验证明：对于种子传毒的有性繁殖植物，也能通过组织培养有效脱病毒。该创新点的依据是文献检索已经查阅到马铃薯等许多无性繁殖的经济植物通过茎尖培养脱病毒获得无病毒植株在生产上得到广泛推广的实例，仅在有性繁殖植物番茄上报道（Zhuk, IP; Kravchenko, RV；In vitro regeneration of tomato somaclones and selection of those resistant to tobacco mosaic virus.Russian Agricultural Sciences，-17）通过体细胞无性系的离体再生方式进行病毒脱除，但并没有对其种子繁殖后代进行病毒检测和利用。而我们的研究同时对莴笋组培苗结实种子发芽种植产生的组培种苗、组培种2代苗送交病毒检测机构实际检测表明脱毒率达到100%，用实验说明组织培养脱病毒方法对于种子传毒的有性繁殖植物也是有效的，能够克服它们的病毒病害损失。
&&&&3．实验表明由腋芽尖结合愈伤组织培养的综合方法可以彻底脱病毒，弥补了传统茎尖培养脱病毒严格限制外植体大小等所引起的操作不便的缺陷。该点依据我自己已经查阅到马铃薯等许多植物通过茎尖培养脱病毒的实例，国内仅见草莓还可通过愈伤组织或花药培养、甘蔗通过愈伤组织培养获得100%无病毒植株的报道，为我的研究思路提供了可行性，于是我想把茎尖培养和愈伤组织培养结合起来，既方便操作，更能保证脱病毒彻底，从而设计完成了自己的实验。但是经过专门文献检索机构检索发现早在1973年日本人就报道了通过分生组织的愈伤组织大规模生产草莓无病毒植株的方法（Nishi, S.Ohsawa, K.，Mass production method of virus-free strawberry plants through meristem callus.，Japan Agriculture Research Quarterly (Japan)July ). p. 189-194.），由于是日文，检索到的也就是这一题目，大概是这一缘故导致2004年的有关综述[5] [6]也并没有收录该文及其方法。在事先不知道，至今也没有获得该文章的情况下，我的研究以腋芽尖直接组培成苗的对照实验的检测结果显示脱毒率为83.3%，而腋芽尖培养和愈伤组织培养相结合的脱毒率为100%，用事实说明分生组织培养与愈伤组织培养的结合对于彻底脱毒很有必要。
5．参考文献
MULTILINGUAL MULTISCRIPT PLANT NAME DATABASE，unimelb.edu.au/Sorting/Lactuca.html#Note
莴苣、莴笋病毒病，
戴启洲沈金龙宋雅光陆雷军，莴苣病害的识别与防治，植物医生，）：35-36
寻求莴笋病害防治新技术、新农药，
张大栋，吉晓佳，杨永华，植物脱毒技术及其在现代农业中的应用，科技与经济，）：62-64。
植物脱毒与病毒检测=%E4%B8%93%E9%A2%98%E5%BA%94%E7%94%A8
罗淑萍、张智俊、秋田求，根癌农杆菌介导的叶用莴苣基因转化系统的建立，新疆农业大学学报，）：30-33
李丹山红艳邵素清李喜文，美国叶用莴苣的组织培养与植株再生，植物生理学通讯，）：148
朱路英[1] 刘玲[2] 孟祥栋张振贤，叶用莴苣离体培养和植株再生，园艺学报，）：181-182
韩阳奚惕，莴苣通过胚状体途径的快速繁殖，植物生理学通讯 -20
何奕昆路铁刚孙敬三，山莴苣细胞和组织培养研究，植物学通报，1991，8（增刊）：55-58，36
许莉萍陈如凯李跃平，利用愈伤组织培养和茎尖培养去除甘蔗花叶病毒，福建农业大学学报，）：253-256。
王常云王作全谢永福李晓亮，草莓花药培养及脱毒苗产业化生产技术研究，山东农业科学，1996， 4：17-19
牛建新　蒋迪军　高守强，草莓茎叶切块愈伤组织试管苗生长结果调查，北方园艺，-54。
6附表与附图
表1、组培田间取样的莴笋正常株和病株生长状况
组别植株号
去叶后茎粗(cm)
去叶后周长(cm)
带叶质量(kg)
总质量4.25
总质量1.50
表2、不同激素浓度组合下腋芽尖组织培养情况统计表
NAA 2.0 + BA 0.1
NAA 1.0 + BA 0.1
NAA 0.5 + BA 0.5
NAA 0.1 + BA 1.0
表4、莴笋病毒检测送检样品的采集设计与编号表
1病株最严重
9正常株次好
17耐病品种苗
25组培种苗
33好株组培1
41病株组培2
2病株次严重
10正常株最好
18耐病品种苗
26组培种苗
34好株组培2
42病株组培1
3病株中严重
11非组培种苗
19耐病品种苗
27组培种苗
35好株组培1
4病株次轻度
12非组培种苗
20耐病品种株
28组培移栽苗
36好株组培1
5病株最轻度
13非组培种苗
21耐病品种株
29病株组培2
37好株愈伤2
6正常株最次
14组培种苗2
22耐病品种株
30病株组培2
38好株组培1
7正常株较次
15组培种苗2
23耐病品种株
31病株组培2
39好株组培1
8正常株中等
16组培种苗2
24组培种苗
32病株组培2
40好株愈伤2
&&&&1-5是从大田观察感觉感病毒程度由重到轻的病株取样；
&&&&6-10是从大田观察感觉生长健康程度由次到好的正常株取样；
&&&&20-23是从大田观察感觉生长健康的感病毒轻的品种植株取样；
&&&&1-10与20-23一起构成1组成株期对比。
&&&&11-19构成1组苗期对比。
&&&&24-42构成1套组织培养期对比。
表5、莴笋黄瓜花叶病毒(CMV) 检测结果
0.1643(±)
0.1676(±)
备注：+表示阳性结果；-表示阴性结果；±表示接近阳性结果
表3、不同激素浓度组合下腋芽尖愈伤组织诱导率与苗芽分化率表
组尖种类jjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjji
NAA 2.0 + BA 0.1
NAA 1.0 + BA 0.1
NAA 0.5 + BA 0.5
NAA 0.1 + BA 1.0
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