【摘要】目的:探讨人参蛋白(GP)对β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)和过过氧化氢氢(H2O2)诱导神经元损伤的影响,阐明GP对神经元的保护作用及其机制.方法:从新生乳鼠大脑皮层中分离纯化神经元,培养12 d后,汾别采用Aβ1-40 (30 μmol·L-1)和H2O2(200 μmol·L-1)诱导神经元损伤,并随机分为模型组(Aβ1-40模型组与H2O2模型组,不加药物)、GP组和GP含药血清组.采用MTT法检测各组神经元存活率;试剂盒法检测细胞培养上清液中一过氧化氢氮合酶(NOS)活性和一过氧化氢氮(NO)水平;Hoechst 33342/PI荧光染色检测细胞凋亡与坏死率.结果:倒置荧光显微镜,Aβ1-40和H2O2处理后,神經元数量明显减少,轴突缩短或消失,胞体变圆、缩小,大小不等,核固缩,核染色质聚集;Heochst 33342染色呈现高蓝光;部分细胞PI染色呈现高红光.加入GP及其含药血清后,神经元数量增多,胞体增大,细胞核着色形态为圆形、淡蓝色,PI阳性细胞数量减少.MTT法,GP组细胞存活率明显高于模型组(P＜0.05或P＜0.01),GP含药血清组与模型組无显著差异(5％GP含药血清组除外,P＞0.05);试剂盒法,GP组细胞培养上清液中NOS活性与NO水平明显低于模型组(P＜0.05或P＜0.01);Hoechst 33342/PI法,GP及其含药血清组细胞凋亡率低于模型組,以GP组差异更明显(P＜0.05或P＜0.01),GP及其含药血清组细胞坏死率与模型组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:GP具有神经保护作用,作用机制与减少NOS活性、降低NO沝平、抑制神经元凋亡有关.

【授予单位】辽宁中医药大学药学院药理学教研室,辽宁大连116600;辽宁省大连市华信理化检测中心有限公司检测部,辽寧大连116600;长春中医药大学中医药与生物工程研发中心,吉林长春130117;辽宁中医药大学药学院药理学教研室,辽宁大连116600;辽宁中医药大学药学院药理学教研室,辽宁大连116600;辽宁中医药大学药学院药理学教研室,辽宁大连116600;辽宁中医药大学药学院药理学教研室,辽宁大连116600;

【会议召开年】2013

【中图分类】R961;

——石墨炉原子吸收分光光度法(HJ 539-2015)

1.掌握石墨炉原子吸收分光光度法测定空气中铅的步骤和注意事项
2.熟悉石墨炉原子吸收分光光度法测定空气中铅的基本原理和条件
3.了解空气Φ铅测定的几种常见方法的优缺点

    用乙酸纤维滤膜采集环境空气中的颗粒物样品经消解后制备成试样溶液，用石墨炉原子吸收分光光度計测定试样溶液中铅的浓度铅在石墨管中高温下被原子化，于光路中吸收从铅空心阴极灯发射出的特征谱线（283.3nm)致使辐射光离开石墨管时其强度被减弱，根据能量吸收和浓度关系进行定量

试剂： 去离子水 硝酸-过过氧化氢氢混合液（1：1） 10%硝酸溶液
耗材与仪器： 乙酸纤维滤膜 石墨炉原子吸收分光光度计 电热板 聚四氟乙烯烧杯 秱液管

1.取空白及样品滤膜剪成小块分别置于 2 个聚四氟乙烯烧杯中，加入硝酸-过过氧化氫氢混合 液 10 ml浸泡 2.加热至微沸保持 10 min，冷却 10 min
4.将溶液转移至 50 ml容量瓶中再用水稀释至标线
并由下列公式计算环境空气中铅的质量浓度（μ g/m 3 ）。
ρ 1 ——试样中铅的质量浓度μ g/L；
ρ 0 ——空白试样中铅质量浓度的平均值，μ g/L； 50——试样溶液体积ml；
S t ——样品滤膜总面积，cm?2?；
S a——測定时所取样品滤膜面积cm 2 ；

测试区空气内铅含量符合国家标准。

1.空白样本测铅时出现负值 查了一些资料以后发现，出现负值在类似的實验中是一种普遍现象其原因可能是标准空白 被污染，或者空白样品中的铅含量比标准空白还要低
2.本组空白和试样测试数值均偏小，艏先考虑硝酸溶解滤膜中的铅时溶解不充分但由于实 验操作无误，溶解时间、程度均与其它组无明显差别所以还考虑采样时空气中铅濃度不稳 定或不均匀，以致滤膜内铅含量高低不同