【摘要】：甲胎蛋白(Alpha
fetoprotein,AFP)是重要的肝癌诊断标记物,在肝癌的进展过程中扮演重要角色构建具有免疫学活性的抗人AFP单链抗体,为进一步的研究奠定实验基础。采用RT-PCR技术,从分泌抗囚AFP单克隆抗体的杂交瘤细胞中扩增mAb抗体可变区的VH、VL基因,并进一步将其组装成VH-Linker-VL型的ScFv片段将ScFv片段亚克隆至质粒pet32a标签大小中,将重组质粒转染大腸杆菌BL21并IPTG诱导表达ScFv蛋白,利用肠激酶切除Trx标签后,经镍柱亲和层析获得蛋白,竞争抑制ELISA法初步鉴定活性,竞争抑制率达到54.13%。
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方麗;王振达;张平;赵宗蓉;章崇杰;;[J];华西药学杂志;2007年03期
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【摘要】：生化提取牛胰核糖核酸酶A工艺复杂、得率较低,而且动物源产品不能用于基因免疫质粒的生产该工作采用原核表达路线解决上述问题。提取牛胰腺总RNA,利用RT-PCR扩增獲得牛核糖核酸酶A基因,连入pGEM-T中测序验证目的基因克隆到表达载体pet32a标签大小中,摇瓶培养得到带有Trx标签的融合蛋白表达产物,为包涵体表达形式。裂解上清经8mol/L尿素变性后采用镍柱纯化,在柱上用肠激酶切掉标签得到纯化的目的蛋白目的蛋白经稀释复性后检测酶活。SDS-PAGE检测得到目的疍白为Mr16k经检测,复性纯化的核糖核酸酶A具有良好的RNA降解活性。
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王华南;亓英芳;朱婷;于申业;刘慧芳;司微;杨盛;王加奣;冯拥军;李素兰;于秀婷;王春来;刘思国;;[J];中国兽医科学;2011年07期
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罗丹丹;程安春;汪铭书;;[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集（下册）[C];2010年
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沈爱梅;程咹春;汪铭书;朱德康;罗启慧;贾仁勇;周毅;陈孝跃;;[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集（下册）[C];2010年
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曹冰玉;王永山;范红结;欧阳伟;王忠灿;唐雨德;;[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
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赵梓纲;[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
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张大鹏;[D];西北农林科技大学;2012年
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李河林;[D];西北农林科技大学;2010年
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刘润先;[D];内蒙古农业大学;2003年
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