FOLIN-酚试剂（FOLIN-PHENOL REAGENT）的显色原理主要是：試剂中的磷钼酸-磷钨酸 混合物被蛋白质还原形成多种还原型的混合酸，并且有特殊的蓝色包括两步反应。

Folin-酚试剂法（Lowry法）测定蛋白质含量

  疍白质含有两个以上的肽键（—CO—NH）,因此有双缩脲反应在碱性溶液中，能与CU2+  形成络合物Folin-酚试剂反应是在双缩脲反应的基础上，引进Folin试劑（磷钼酸-钨酸试剂）,蛋白质-铜络合物能还原磷钼酸-磷钨酸试剂生成蓝色物质。在一定条件下蓝色强度与蛋白质的量成正比例。

   本法嘚优点是操作简便、灵敏度高、较此外吸收法灵敏10~20倍较双缩脲法灵敏100倍，反应约在15min内有zui大显色并至少可稳定几小时。其不足之处是此反应受多种因素干扰对双缩脲反应发生干扰的基团，Tris.HCL缓冲剂以及蔗糖、硫酸铵、巯基化合物酚类及柠檬酸，均对此反应有干扰作用茬测试时应排队干扰因素或做空白实验消除。含硫酸铵的溶液只需加浓Na2CO3-NaOH溶液即可显色测定若样品酸度较高，显色后色浅则必须将Na2CO3-NaOH溶液嘚浓度提高1~2倍。

   （C）2%酒石酸钾钠溶液（或酒石酸钾、酒石酸钠）；

（2） Folin-酚试剂(试剂乙)：在1.5L容积的磨口回流瓶中加入100g钨酸钠（Na2WO4.2H2O）25g钼酸钠（（Na2MoO4.2H2O），及700ml蒸馏水50ml 85%磷酸，100ml浓盐酸充分混合烧瓶内加小玻璃珠数颗，以防溶液溢出接上回流冷凝管以文火回流10h。回流结束后加入150g硫酸鋰（LiSO4）,50m重蒸水及数滴液溴，开口继续沸腾15min以除去多余的溴。冷却后溶液呈金黄色（如果仍呈绿色须再重复滴加溴水的步骤），定容至1L过滤，滤液置棕色瓶中保存可在冰箱长期保存。若此贮存液使用过久颜色由黄变绿，可加几滴液溴煮沸数分钟，恢复原色仍可继續使用使用时用标准NaOH滴定酸度，以酚酞为指示剂该试剂的酸度应为2mol/L左右，将之稀释至相当于1mol/L酸度使用即为Folin-酚试剂。

（3）标准蛋白质溶液：可用结晶牛血清蛋白预先经微量凯氏定氮法测定蛋白质含量，再根据其纯度配制成500?g蛋白/ml溶液

绘制标准曲线：以OD650值为纵坐标，標准蛋白量为横坐标在坐标纸上绘制标准曲线。

2.样品溶液蛋白质浓度测定