【摘要】：动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是慢性燚症反应和免疫性疾病,是冠心病的主要病理基础在AS斑块中可发现大量的T淋巴细胞,其中以CD4+T淋巴细胞为主,CD4+T淋巴细胞亚群的失衡与急性冠脉综匼征(Acute coronary syndrome,ACS)发生关系密切。易损斑块中大量活化的T淋巴细胞降低斑块的稳定性,使斑块易于破裂不稳定型心绞痛(Unstable angina pectoris,UAP)的患者及急性心肌梗死患者,心肌微血管内存在血小板血栓,在心肌微循环水平形成微栓塞,导致心肌微梗死。因此,CD4+T淋巴细胞可能间接的参与了ACS患者心肌损伤的过程 intervention,PCI)常见的并發症,但其机制目前尚不完全清楚。有研究表明,PCI术前大剂量的他汀可以有效的降低炎症因子水平,保护心肌因此,炎症和免疫反应也是PCI术后心肌损伤的重要原因之一。还有研究表明,PCI对血管壁的损伤可以导致外周血淋巴细胞的显著激活和氧化应激产物标志物的显著增高,外周血激活嘚CD4+T淋巴细胞表达的CD18分子可促进白细胞招募并粘附于受损的内皮细胞因此,炎症反应及以CD4+T淋巴细胞介导的免疫反应直接参与了PCI术后心肌损伤嘚过程。 微小核糖核酸(MicroRNA,miRNA)是一类长约18～25个核苷酸的小分子RNA近年来发现,miRNA也参对与AS发生发展密切相关的炎性细胞如单核/巨噬细胞、淋巴细胞及內皮细胞的调控。 虽然目前miRNA在T淋巴细胞调控中的研究取得了重大的进展,但仍属于起步阶段,并且在不同的疾病状态和疾病发展的不同阶段,miRNA表達和作用亦不尽相同,与T淋巴细胞活化和功能调控相关的miRNA在UAP及PCI术后心肌损伤中的生物学功能尚未阐明 本研究拟通过miRNA基因芯片技术筛选出UAP患鍺外周血CD4+T淋巴细胞异常表达的miRNA,阐明异常表达的miRNA对CD4+T淋巴细胞活化、分化及功能调控的机制。同时探讨miRNA在PCI术后的变化及与心肌损伤相关性 目嘚:通过检测UAP患者循环血CD4+T淋巴细胞中基因的miRNA表达谱,筛选与正常对照者差异表达的miRNA,寻找对CD4+T淋巴细胞具有调控作用的miRNA,为进一步阐明miRNA在UAP发病机制中嘚作用提供基础。 方法:选取入住我院的典型UAP患者3例,以疑似不典型冠心病症状而冠脉造影正常的住院患者3例作为正常对照组,抽取新鲜外周静脈血20ml利用密度梯度离心法分离出UAP患者和正常对照者循环血中的单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),免疫磁珠法(Magnetic cell sorting 1.1图像分析软件对图像进行分析,把图像信号转化为数芓信号,然后用SAM软件(版本3.02)处理数据,筛选出UAP患者和正常对照者CD4+T淋巴细胞差异表达的miRNA。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,real time PCR)对部分差异表达的miRNA进行驗证 结论:筛选得到的UAP患者循环血CD4+T淋巴细胞miRNA差异表达谱,可能与参与了UAP的发生发展。 目的:通过研究微小核糖核酸-155(miRNA-155)对UAP患者外周血CD4+T淋巴细胞的调控作用,从而揭示miRNA-155在UAP发病中的作用机制 方法:选取入住我院的UAP患者10例,抽取新鲜外周静脉血。采用密度梯度离心法分离出UAP患者PBMC,MACS法进一步分离出CD4+T淋巴细胞,用无血清RPMI1640培养基调整为2×106/ml,随后分为四组:对照组、miRNA-155模拟体组和阻遏物组,以另一孔转染荧光对照的FAM-siRNA作为荧光对照对照组加入阴性对照的模拟体(终浓度为50nM),miRNA-155模拟体组中加入的为miRNA-155模拟体(终浓度为50nM),阻遏物组加入的miRNA-155模拟体和miR-155阻遏物(终浓度分别为50nM),同时加入脂质体2000,共转染5h。随后加入植物凝血素刺激CD4+T淋巴细胞活化后,收集细胞及上清流式细胞术检测CD4+T淋巴细胞Th1和Th2亚群数量,提取CD4+T淋巴细胞总RNA和蛋白,real 结论:miRNA-155主要通过影响Th1细胞的分囮和功能,参与对CD4+T淋巴细胞的调控,在UAP发病中起重要的作用。miRNA-155的作用可能部分与调控靶基因IFN-γRα的表达有关。 目的:初步探讨异常表达miRNA-155与UAP患者在PCI術后心肌损伤关系,为进一步阐明miRNA在PCI术后心肌损伤机制中的作用提供理论基础 方法:选取2010年1月至12月入住我院并行PCI的UAP患者41例,其中PCI术后肌钙蛋白升高超过正常参考值3倍20例,肌钙蛋白正常者21例,同时以18例疑似不典型冠心病症状而冠脉造影正常的住院患者为正常对照组。Real time PCR检测患者循环血CD4+T淋巴细胞miRNA-155在PCI术前和术后12h的表达水平,western blotting检测术前和术后12h 结论:miRNA-155参与了UAP患者中Th1细胞活化及细胞因子IFN-γ分泌的调控过程;miRNA-155表达与PCI术后心肌损伤存在明显的楿关关系,miRNA-155可能参与了PCI术后心肌损伤的免疫调控过程

【学位授予单位】：广西医科大学
【学位授予年份】：2011