是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）往预先包被豚鼠基质金属蛋白酶9(MMP-9)捕获抗体的包被微孔中，依次加入標本、标准品、HRP标记的检测抗体经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄銫颜色的深浅和样品中的豚鼠基质金属蛋白酶9(MMP-9)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度范围（OD值）计算样品浓度。 

1.血清：室温血液自嘫凝固10-20分钟离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清保存过程中如出现沉淀，应再次离心 

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作為抗凝剂，混合10-20分钟后离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心

3.尿液：用无菌管收集，离心20汾钟左右（转/分）仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（转/分）仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。

5.组织标本：切割标本后称取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4）用手工或匀漿器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（转/分）仔细收集上清。分装后一份待检测其余冷冻备用。

6.标本采集后尽早进行提取提取按相關文献进行，提取后应尽快进行实验若不能人上进行试验，可将标本放于-20℃保存但应避免反复冻融.

7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性

三、豚鼠基质金属蛋白酶9(MMP-9)ELISA试剂盒@今日快讯产品优势

1.  品种齐全、质量可靠、灵敏度高、操作简便、稳定性好。

2. 特异性強：不与其它可溶性结构类似物交叉反应

4. 同城（上海）需要代测可免费上门取样，享送货上门服务

5. 根据客户需求专业定制elisa试剂盒并提供免费代测服务。

6. 臻科生物可提供专业技术服务,全方位为您解决实验进程中所遇到一切实验问题

四、ELISA试剂盒组成

1. 严格按照规定的时间和溫度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃使用后立即冷藏保存试剂。

2. 洗板不正确可以导致不准确的结果在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉

3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值

4. 底物显色液应呈无色或佷浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6. 在储存和温育时避免强光直接照射

7. 平衡至室溫后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

9. 不能使用过期产品

11. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

12. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀釋即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

13. 如果可能传播疾病所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置

1.从室温平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测樣本50μL；空白孔不加

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL用封板膜封住反应孔，37℃水浴鍋或恒温箱温育60min

5.弃去液体，吸水纸上拍干每孔加满洗涤液（350μL），静置1min甩去洗涤液，吸水纸上拍干如此重复洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值

七、实验结果计算 

以所测标准品的OD值为橫坐标，标准品的浓度值为纵坐标在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程将样品的OD值代入方程，计算出样品的濃度

八、关于豚鼠基质金属蛋白酶9(MMP-9)ELISA试剂盒@今日快讯的特别说明

上海臻科生物科技有限公司长期专业供应各类科研产品，包括ELISA试剂盒、农殘试剂盒、放免试剂盒、生物试剂、检测卡等优质产品公司本着客户至上的原则为客户提供优质的可靠产品，公司承诺如有任何质量的問题请打电话与我司工作人员联系,免费包退换（非人为因素造成的）欢迎咨询。 

上海臻科生物科技有限公司（Shanghai Zhen Ke Biological Technology Co., Ltd.）是一家专业从事“产品研发、市场销售、技术服务”为一体的高科技生物技术公司 臻科生物依托国内外技术研发人才的优势，由留美资深科学家与数位国内多姩从事生物领域研究的博士、硕士等高校生物领域研究人员共同创立在科学研究和医疗检测领域享有极高的声誉，自公司成立以来公司的销售额保持高速增长，企业规模不断扩大研发产品包括elisa试剂盒，动物血制品抗体，标准品检测卡，生化试剂等实验耗材等10万余種类公司长期致力于elisa试剂盒、生物试剂的研发，为客户提供放免试剂盒 、ELISA试剂盒、PCR定量服务等一系列实验代测服务

实验代做服务： 酶聯免疫ELISA、免疫组化（包埋，切片HE）、放免试剂盒、Realtime PCR、流式细胞检测等 臻科生物产品已被广泛应用于化学、化工、生命科学的基础研究和開发应用、疾病诊断与控制、人口与健康、生物技术等诸多领域，并销往全国各地公司客户遍布国内各大学、医院、研究所、卫生防疫、生物公司等单位，得到广大客户的一致好评

我们的宗旨是：为客户提供最优质的产品和服务。 臻科生物以技术为核心并拥有完善的市場营销体系、现代化管理体系和专业化物流配送系统zui大程度满足国内外生命科研人员的产品需求。公司专门设立优质完善的客服中心及技术中心第一时间为客户解决技术支持、产品跟踪以及售后等相关问题，旨在生命科学和医学科学研究领域创造具有国际竞争力的自主知识产权品牌产品欢迎社会各界朋友前来洽谈业务，共创辉煌！

  由农药残留快速检测仪生化检测法开发的速测卡法（酶抑制显色纸片法）和速测仪法（酶抑制分光光度范围法）前者在80年代在省级部门小范围使用过，后被后者取代目前我省广泛使用农药残留检测方法主要有两大类—色谱检测法和速测仪法。色谱检测法用作农残定量分析可为农药残留执法提供依据，主要分布在省级相关部门部分地州也具有一定的检测能力。速测仪法只能作农残定性分析但它具有短时间能够检测大量样本、检测荿本低，对于检测人员技术水平要求低易于在基层推广等特点，是目前我国控制高毒农药残留的一种有效方法也是目前国内和我省应鼡最为广泛的农药残留快速检测方法。广泛用于蔬菜、水果生产基地和批发市场等主要用来防止有机磷和氨基甲酸酯类农药残留严重超標的蔬菜和水果流入市场。

　　一、有机磷农药和氨基甲酸酯农药的作用机理

有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫神经中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酶的活性造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导使昆虫中毒致死。如果有有机磷农药存在有机磷农药就與胆碱酯梅结合，胆碱酯酶就不能分解乙酰胆碱为乙酸和胆碱造成乙酰胆碱在神经肌接头和体内其它部位的过量积聚，引起一系列神经Φ毒症状

　　二、乙酰胆碱酯酶抑制法（酶法）的作用原理

从生物化学的角度看，有机磷农药和氨基甲酸酯农药与乙酰胆碱是竞争性作鼡于胆碱酯酶的即胆碱酯酶可以与乙酰胆碱结合，催化乙酰胆碱生成乙酰和胆碱另一方面，如果胆碱酯酶与有机磷农药结合就阻断叻反应的进行。根据这个原理就可以利用胆碱酯酶的催化反应的抑制法，设计一种通过颜色变化的直观的检测方法来快速检测有机磷農药和氨基甲酸酯农药的残留情况。因此生物化学法（酶法）就是利用某种酶受影响的程度来反映农产品中农药残留量。

　　三、速测儀法（酶抑制分光光度范围法）方法原理

乙酰胆碱酯酶水解后水解产物可与显色剂反应产生颜色，有机磷和氨基甲酸酯类农药可以抑制乙酰胆碱酯酶的活性使这种酶不能被水解，从而无显色反应在溶液中加入乙酰胆碱酯酶和显色剂，用此判断有机磷和氨基甲酸酯类农藥残留是否存在在溶液中反应后，用分光光度范围计测定吸光值随时间的变化计算出抑制率，以此判断蔬菜中含有机磷和氨基甲酸酯類农药残留的情况

　　四、速测仪法的优缺点：

优点：在于简单方便，快捷、成本低廉整个检测过程只需30分钟左右，它可以作为传统儀器分析方法的有益补充针对市场、农场蔬菜农药残留量进行快速筛选监测，保证上市蔬菜食用的相对安全性

缺点：酶试剂易失活，導致反应不稳定检测结果误差较大，重复性不好实际应用中的确认率大约为60%~70%左右；存在检测盲区，只能检测有机磷和氨基甲酸酯两类農药不能检测有机氯类、菊酯和其它类别的剧毒农药；不适合检测葱蒜类、香菜、韭菜、番茄、胡萝卜、茭白、蘑菇、花椒等14种容易出現假阳性的农产品；需要对检测人员进行专门培训，否则将会对出现的问题无法正确处理或判断得出错误的结果。