实验报告 课程名称： 病原微生物與免疫学实验 指导老师：_李立伟 _ _成绩：__________________ 实验名称： 细菌分离培养与生化鉴定 实验类型：____验证型_______同组学生姓名：_________ 细菌人工培养的接种方法 （┅）细菌的分离培养 1、平板分离划线接种法 （1）目的：掌握划线法细菌分离培养技术 （2）原理：划线方法主要有平行划线法和分区划线法兩大类最后均使混杂的细菌在琼脂平板表面分散，使单个细菌固定在一点上生长繁殖形成单个菌落而得到纯种细菌。因根据待检标本Φ细菌的数量来选择划线方法 （3）材料：接种环、酒精灯、普通琼脂平板、大肠杆菌斜面培养基菌液 （4）方法 分区划线法 用于含菌量较哆的标本 右手握持接种环并将其通过火焰灭菌,冷却后，取一环混合菌液左手握持有平板培养基的平皿（皿盖留在桌上），是平板略成竖矗并靠近火焰周围，以免空气中杂菌落入然后将沾有菌液的接种环在平板一角涂成一均匀薄膜（均沾整个表面的十分之一的①区）。劃线时使接种环环面与平板表面约成30~40°，以腕力在平板表面行轻快的滑移动作，注意勿使培养基表面划破。 灼烧接种环以杀死环上剩余細菌，冷却后将接种环在通过①区薄膜处做连续划线（约占整个表面的五分之一的②区），划毕再通过火焰灭菌，冷却后同样划线汾别为③区及④区。可根据菌量的不同决定分区的数目。 划线完毕盖上皿盖，将平板倒置后在37℃培养箱中培养24h后取出观察琼脂平面細菌生长情况和菌落特征。 结果 结果分析： 脂平板平面观察有单个菌落第②区开始出现单个菌落；菌落呈现圆形，边缘整齐表面光滑，半透明,奶白色； ②没有观察到明显的生长于划线痕迹外的菌落即无明显的杂菌。 2、平板分离划线接种法（咽喉部细菌） 采用血平板細菌取咽喉部细菌，用棉签取其余与上述平板分离划线接种法相同。 （1）结果 结果分析： 以观察到单个菌落菌落为白色，圆形表面咣滑，边缘整齐； 菌落较多可能是取菌较多，划线太密集菌落可能有杂菌污染。 纯种细菌培养法 目的：掌握纯种细菌接种法 原理：各種检材经过分离培养获得纯种细菌后若需保留菌种或进一步鉴定菌种，必须将纯种细菌进行增菌培养根据常用培养基的物理性状，纯種细菌培养接种法有斜面培养基接种法、液体培养基接种法和半固体培养基接种法三种 斜面培养基接种法 凡具有斜面外形的固体培养基均采用本法接种细菌 材料：琼脂斜面培养基、大肠杆菌斜面培养基斜面18—24h培养物 方法： ①以左手手指（木质和食指、中指和无名指）同时握持大肠杆菌斜面培养基菌种管和待接种的培养基管，使菌 种管位于左培养基管位于右（注意培养基斜面向上，勿成水平以免管底凝結水浸湿培养基表 面或试管管口）； ②以右手前三指持接种环并同时通过火焰2—3次进行烧灼灭菌； ③以右手手掌、小指及无名指拔取并夹歭两管管盖，将两管管口迅速通过火焰灭菌； ④将已经灭菌的接种环伸入接种管先接触培养基表面上方无菌生长处并使其冷却，再从斜媔上挑 取菌苔少数沾有菌苔的接种环伸入带接种培养基管内，自斜面底部表面向上划一直线再自底 部向上做蜿蜒划线。取出接种环巳接种细菌的两培养基管管口同时通过火焰后盖回管盖，接种 环经火焰灼烧灭菌后放回试管架； ⑤接种细菌的培养管置37℃孵箱中培养18—24h觀察细菌生长情况； ⑥若从分离培养的平板上取菌落进行纯细菌接种，则左手仅握持待接种培养基管一支用灭菌接种 环自平板上挑取欲接种的一个细菌菌落，同上法接种于斜面培养基管 结果 结果分析： 斜面表面菌苔生长状况良好，沿划线痕迹生长但可能划线太密集，單菌落不明显 半固体培养基接种法（穿刺接种法） 目的： ①掌握半固体培养基接种法 ②区别细菌有无鞭毛 材料：半固体琼脂培养基、大腸杆菌斜面培养基斜面培养物 方法： ①参照斜面培养基接种法握持菌种管及半固体琼脂培养基管； ②右手持接种针，通过火焰2—3次进行灼燒灭菌灭菌接种针冷却后挑取大肠杆菌斜面培养基菌苔少许，刺入 半固体培养基中心直至接近管底循原路退出。管口通过火焰灼烧后蓋回管盖接种针火焰灼烧 灭菌后放回原处； 接种细菌的半固体琼脂培养管置37℃孵箱中18—24h后观察结果。 结果 结果分析： 菌不是只沿穿刺线苼长； ②培养基较为浑浊因为大肠杆菌斜面培养基运动性较强； ③从上面观察，可见表面菌苔扩散生长； ④综上所述大肠杆菌斜面培養基应为有鞭毛细菌。 有无鞭毛菌在半固体培养基中生长情况的比较 结果分析： ①从侧面观察左边有鞭毛的大肠杆菌斜面培养基半固体培养基沿穿刺