7、如何理解分光光度法的定量基础郎伯朗伯 比尔定律律?

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包菜中 甲萘威含量的测定
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仪器分析第四章 紫外可见分光光度法
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3秒自动关闭窗口一、基本原理
光线是高速运动的光子流,也是具有波长和频率特征的电磁波。光子的能量与频率成正比,与波长成反比。肉眼可见的光线称为可见光。可见光只占电磁波谱的很窄部分(400nm到760nm)。不同波长的可见光具有不同的颜色。波长大于760nm的光线称为红外线。波长小于400nm的光线称为紫外线。
当一束白光通过一杯有颜色的溶液时,具有一定波长的光线,选择性的被溶液所吸收。不同物质由于其分子结构不同,对不同波长光线的吸收能力不同,因此每种物质都具有其特异的吸收光谱。吸收光谱的测定可以用来鉴定各种不同的物质。
例如核黄素之所以呈现黄色,是由于它仅吸收可见光中的蓝光范围,并测得其吸收峰在450nm(图2-1)。在紫外光范围它还有两个吸收峰。它们分别是260nm和370nm。
(核黄素22mmol/L溶于0.1mol/L 磷酸钠中,pH7.06,吸收杯厚1cm)
分光光度法常被用来测定溶液中存在的光吸收物质的浓度。其理论依据是郎伯&比尔(Lambert-Beer)定律。
(一)郎伯定律(Lambert&s Law)
一束单色光在通过一溶液时,由于溶液吸收一部分光能,使光的强度减弱。若溶液的浓度不变,则溶液的厚度愈大,光强度的减弱也愈显著(图2-2)
分光光度法[Spectrophotometry]
若I0表示入射光强度,I表示光线通过溶液后的强度,L表示溶液的厚度。
作者:士锋 & 来源:上海士锋生物科技有限公司 & 日期:日&
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