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&&&贵阳DNA亲子鉴定在哪里怎么做
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重庆华溯生物
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鉴定亲子关系目前用得最多的是DNA分型鉴定。人的血液、毛发、唾液、口腔细胞等都可以用于用亲子鉴定，十分方便。　　一个人有23对(46条)染色体，同一对染色体同一位置上的一对基因称为等位基因，一般一个来自父亲，一个来自母亲。如果检测到某个DNA位点的等位基因，一个与母亲相同，另一个就应与父亲相同，否则就存在疑问了。　利用DNA进行亲子鉴定，只要作十几至几十个DNA位点作检测，如果全部一样，就可以确定亲子关系，市场常用的有16位点、20位点、40位点基因检测；如果有3个以上的位点不同，则可排除亲子关系，有一两个位点不同，则应考虑基因突变的可能，加做一些位点的检测进行辨别。DNA亲子鉴定，否定亲子关系的准确率为100%，肯定亲子关系的准确率可达到99.999999%，亲生关系在遗传学上永远达不到100%，国际标准上，亲权指数为99.95%或99.95%以上为亲生结果，我们严格的鉴定机构需亲权指数高达99.99%或以上为亲生。&经国家司法部批准成立，并且通过了国家实验室认可和计量认证，是国内首家通过“二合一”认证的独立的第三方司法鉴定机构，司法鉴定许可证号 。出具的鉴定报告在全国范围内具有司法效力！&&&&&&主城区范围内免费上门取样服务，其他区县预约上门取样需提前预付我们来往路费。&&&&&&&& 联系人：秦老师&&&& 电话：023-&& &&&& QQ：&&&& 网址：&&&& 地址：重庆市南岸区南坪长途汽车站旁城市之光大厦16楼17号&贵阳胎儿亲子鉴定多少钱 贵阳个人亲子鉴定多少钱 贵阳司法鉴定多少钱&&& 贵阳亲子鉴定在哪里做 贵阳亲子鉴定哪里做比较好 贵阳最好的亲子鉴定 贵阳最权威的亲子鉴定机构
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【求助】有没有微生物鉴定手册，包括真菌、霉菌等等
【求助】有没有微生物鉴定手册，包括真菌、霉菌等等
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这个帖子发布于10年零39天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近在做真菌、霉菌的鉴定，哪位朋友有没有做这方面鉴定的技术资料啊？有点急，先谢过！
bigboygong edited on
回复：【求助】有没有微生物鉴定手册，包括真菌、霉菌等等
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《链霉菌鉴定手册》（科学出版社)&常见细菌系统鉴定手册&(科学出版社)《真菌鉴定手册》(上海科技出版社)以下是一篇文献,请参考:分子生物学技术在真菌分类鉴定中的应用一、真菌的分类研究
早在几千年前真菌就已被人类认识和利用，但对真菌的系统研究则只有200多年的历史。在这期间，主要依据形态的描述鉴定了一些种属，并且以比较形态学的观点建立了一些分类系统。到目前为止，已被描述的真菌约有1万多属、12万多种，而且有不少新种在陆续发现。因此有些真菌学家估计，地球上的真菌远远超过此数，包括寄生在植物上和其他生物上的真菌，以及众多的腐生真菌。我国的真菌资源异常丰富，但经描述的还不到8000种，有待于大力挖掘。在数量如此众多的真菌中，如何建立符合客观规律的自然分类系统是一个重大的问题。真菌的分类也和其他生物一样繁乱复杂。曾应用过的真菌分类系统就有De Bary系统（1884）、Gaumann系统（）、Martin系统（1950）、Whittaker系统（1969）、Ainsworth系统（1973）、Alexopoulos系统（1974）等多个，各系统设置的基本出发点和依据各有特色，难以统一。如何建立一个符合客观实际的自然分类系统，是关系到人们对真菌的正确认识、归类定秩、鉴定、命名以及指导开发利用、控制感染等一系列问题。传统的分类方法主要主要依据于真菌的形态、细胞生理和生化，尤其是有性生殖阶段的形态特征，与真菌自然特性间有一定差距。近年来多门新兴学科和技术的发展，尤其是分子生物学技术的兴起使真菌分类学获得更大的推进。一些已经或即将用于真菌分类研究的分子生物学技术指标日渐显示出重要的分类学潜能。现对有希望成为真菌分类学依据的分子生物学指标及有关技术作一介绍。（一）DNA中G+C mol%含量测定
这是最早用于真菌分类学研究的分子生物学技术。目前在酵母菌的应用较为成功。即利用真菌DNA中核酸序列的同源性及基因大小相似性的遗传特征，测定DNA中的碱基含量（G+C mol%含量）作为真菌分类鉴定的重要遗传指标之一。因为每种真菌都有固定的G+C mol%范围且较为稳定，不同生物种的G+C 含量是不同的，生物种之间的亲缘关系越远，其G+C 含量差别就越大，反之亦然，因而可作为真菌的分类学指标。Belozersky 首先对真菌的碱基组成进行研究。随后Storck等系统研究了真菌的DNA G+C mol%，并以此为指标对真菌的分类鉴定作了实质性评价。通过对大量的真菌菌群间的DNA G+C mol%值的比较发现，该数值随着真菌由低等向高等菌属进化而递增。原核生物的DNA G+C mol%最宽，为25%～75%，真菌为27%～70%，其中子囊酵母27%～50%、担子酵母34%～67%、无孢子酵母27%～69%。一般认为，G+C mol%差别大于20%是不同属的菌；差别在10%～15%之间是同属不同种，差别在5%以内则可能是种内不同菌株。医科院皮研所林桦等采用热变性法测定念珠菌属7个种的DNA的G+C mol%，其变异范围为30.74%~ 45.14%，各菌株之间相差不等，克柔念珠菌、副克柔念珠菌和伪热带念珠菌的(G+C)mol%最低，高里念珠菌的值最高。上海长征医院赵志强等测定了致病隐球菌的DNA G+C mol%，结果罗伦特隐球菌最低，新生隐球菌最高，新生隐球菌上海变种介于罗伦特隐球菌和新生隐球菌格特变种之间，均达到变种要求，进一步支持将新生隐球菌分为3个变种的观点，即新生变种、格特变种和上海变种。医科院皮研所滕传远等测定了I~V型红色毛癣菌总DNA中的G+C mol%，变异范围小于1%~4%，属种内变异。需要指出的是G+C mol%值在分类中主要用于否定，即若2株菌的G+C mol%差异显著，则肯定它们不是同一类群，因而是个判异指标。（二）核酸杂交技术
包括DNA-DNA/rRNA杂交分析、核酸分子探针杂交等。采用示踪物标记的一条DNA分子与另一条在适当条件下杂交，可获得两者间的杂交百分率即DNA同源性，以此判断两菌株是否属同一种。一般在相同的菌种中，DNA/DNA杂交的成功率高达80%以上，若低于20%基本可考虑为无关菌系，65%～80%之间的菌有较多的同源性，提示为同一属的不同种。但如结果在20%～25%范围时则难以作出判断，应并用其它方法分析确定。对属或属以上水平的分类则采用DNA/rRNA杂交，因为rRNA在进化过程中保守性更强。将用示踪物标记的rRNA分别与DNA杂交，根据Tm值或RNA结合数可获得被测DNA分子亲缘关系的资料。Kurtzman等首先开展对黄曲霉群中各菌种的DNA关系研究，黄曲霉和寄生曲霉显示79%的DNA杂交率，而集峰曲霉和黄曲霉的DNA杂交率只有39%。Kurtzman根据这些研究结果建议把黄曲霉和寄生曲霉划为黄曲霉的两个变种，而集峰曲霉则划分为一个新种。
随着DNA研究的深入，DNA探针在真菌分类领域的应用日益广泛。DNA探针之所以受到重视，其一是由于DNA探针与其它一些分子生物学技术结合起来，具有极高的敏感性，可对痕量DNA样品进行分析检测，同时，DNA探针的特异性使其实验结果很少受到非特异性因素的干扰。迄今真菌DNA探针大致可分成两类：种特异性探针和多态性探针。种特异性探针主要用于鉴定真菌菌种。多态性探针在20世纪90年代发展迅速，筛选获得了不少有意义的探针。从来源上来分，真菌多态性探针基因组DNA多态性探针、线粒体DNA（mtDNA）多态性探针、rDNA多态性探针、微（小）卫星重复序列DNA探针等。基因组多态性探针的研究资料不少，尤其是在酵母菌方面。其中开展最早，研究最多，进展最快的当属Ca3、Ca5、Ca7、Ca24探针系列。Ca3为白念珠菌种内多态性探针，Ca7为念珠菌属内多态性探针，它们形成的杂交带数目适中、清晰、稳定性高，具有良好的分辨力和稳定性。mtDNA的保守性较强，用白念珠菌mtDNA/EcoRⅠ酶切片段制备的探针与基因组DNA酶切产物进行Southern杂交可见白念珠菌的株间差异很小，而念珠菌各种间的带型差异明显且富特征性，因此mtDNA探针有望成为种以上水平分类指标。与此类似，rDNA是编码核糖体RNA的基因序列，在进化中有高度的保守性。以rDNA作探针可对同源性低的菌群进行鉴别。rDNA探针的研究以酵母和构巢曲霉较多，进展迅速，应用面较广。不足之处是由于rDNA的保守性，且只占总DNA中很小的一部分，所能检测的也只是rDNA及其邻近DNA片段的差别，因而对同源性较高的菌种没有明显的鉴别意义。以简单的微（小）卫星重复序列（GACA）4、（GTG）5、（GATA）4等制备的探针对念珠菌、隐球菌等酵母基因组DNA杂交的结果显示良好而稳定的属间、种间和株间多态性。微（小）卫星重复序列探针因其具有序列简单、便于人工合成、易于标准化和便于比较等特点可发展为一种很有前途的探针。（三）限制性酶切片段长度多态性分析
限制性酶切片段长度多态性，即RFLP，是指在生物进化进程中，DNA碱基序列发生插入、缺失或突变，从而改变了限制性核酸内切酶（RE）的识别位点。因此，同种生物不同个体的DNA分子用同一种RE酶切，会产生不同长度的片段，在凝胶电泳时呈现不同的带型。RFLP的研究对象是基因组DNA和线粒体DNA。原则上只要内切酶选择合适，对所有真菌均能显示任何分类水平上的多态性和特异性，常用于种以下的分类，一般适用于2～3种菌之间的比较。1987年Scherer等首先将这种方法用于念珠菌的研究。用EcoRⅠ对6株白念珠菌DNA进行酶切分析，可见到许多条带，最明显的带型有3条。对同一株菌反复酶切分析，带型不发生改变，证明其具有良好的重复性。将同一株菌传代400余次后酶切分析，传代前后具有相同的酶切图谱，显示了良好的稳定性。目前用于真菌研究的限制性内切酶已达20余种。Magee等对12株不同来源的白念珠菌rDNA进行了酶切，发现 6株菌的 EcoRⅠ酶切片段能产生 3条杂交带，即 6.4 kb、3.75 kb、2.6 kb，并具有良好的重复性和稳定性，且不同于啤酒酵母和念珠菌的其它种。其它6株菌也能产生这3个杂交带，差别在于这 6株菌出现了额外的条带。进一步的研究发现，每一种念珠菌的 HinfⅠ酶切图谱也存在菌株间差异，因此可以将 EcoRⅠ、HinfⅠ以及其它限制性内切酶的 RFLP联系起来，作为念珠菌的分类工具。Vazqauez等采用EcoRⅠ和MspⅠ对白念珠菌进行酶切。EcoRⅠ酶切产生6个基因型，MspⅠ产生6个基因型，两种酶联合分型为17个基因型，说明联合酶切可提高分辨率。
线粒体DNA是真核生物核外DNA的一种，呈环状的小分子双链DNA结构，单拷贝，不含基因间隔区和内含子，进化历史简单明了，酶切位点少，易于分析。不足之处是与基因组DNA相比，它所包含的遗传信息要少得多。近年来已有学者将其用于真菌分类学研究。Varma等应用 EcoRⅠ、SamⅡ和XbaⅠ对20株新生隐球菌的线粒体DNA进行RFLP分析。作者应用同一种酶作用于不同血清型或不同变种菌株不能产生相同长度的酶切片段；同一血清型（除B型外）或同一变种的不同菌株用同一种RE酶切，能够产生相同大小的片段，提示该片段mtDNA在型内或变种内的序列保守性。Kozlowsmi等研究曲霉属中18个种群的线粒体DNA内切酶谱，并建立了有关线粒体DNA RFLP比较方法，描述了各个种群之间的亲缘关系。
RFLP技术方法简便，影响因素少，稳定性高。这种方法存在的缺点是用RE消化整个基因组DNA产生的酶切图谱往往伴有浓重的背景，使特征性酶切条带在这一背景下较难辨认。另外限制性酶切图谱中特征性的条带主要是基因组DNA中具有高度重复序列的线粒体DNA或rDNA的酶解片段。无论mtDNA或rDNA在生物进化演变过程中均是保守序列。它们产生的RFLP有限，不能完全反映不同菌株间的差异。近年来将RFLP分析与其它技术如PCR技术、杂交技术结合起来，对PCR产物进行RFLP分析或将基因组DNA RFLP图谱以特定探针杂交后分析杂交带的大小与数目，可弥补单纯RFLP分析时结果模糊之缺陷。（四）电泳核型（EK）分析
电泳核型是指细胞中的染色体在一定电场作用下在固体包埋物中的排列情况，反映了染色体的大小、数目和形状的差异。它是通过脉冲电场凝胶电泳（PFGE）完成的，能分辨50 kb至 10 Mb范围内的DNA分子，基本满足酵母菌和丝状真菌的要求。对病原体而言，EK分析特别适用于低等真核微生物或原虫，它无需用RE消化和探针杂交，就可方便地从EK的差异区别不同的菌种。医科院皮研所刘维达分析了23株新生隐球菌标准株和临床分离株的电泳核型，发现新生隐球菌染色体数目新型变种为10或12条，格特变种及上海变种为11条，大小在 0.4～2.1Mb之间。作者同时发现新生隐球菌的EK与其血清型有较好的相关性，同一血清型往往有相似的EK带型。Magee等分析了5株白念珠菌及5种其它念珠菌的核型，发现5株白念珠菌的染色体带型均彼此不同，并分离出9～10条染色体带，同时确定类星形念珠菌的染色体数为9，光滑念珠菌为10，而季也蒙念珠菌仅为6。EK分析带型清晰易辨、分辨力较强，电泳条件稳定时结果重复性好。但EK受电泳条件影响较大，影响不同实验室间的可比性，而且相同大小两条不同染色体往往因迁移率相近呈现为同一条带，影响分辨力。此外它需要昂贵的仪器，DNA的制备及PFGE过程也均较费时。（五）随机扩增多态性DNA（RAPD）分析
RAPD分析是一种利用随机合成的单个寡核苷酸引物通过PCR反应扩增靶细胞DNA，扩增产物经凝胶电泳，分析DNA片段大小和数量多态性，从而比较靶基因差异的一种技术。RAPD自1990年问世以来，已陆续用于酵母菌和丝状真菌的鉴定、分类和流行病学研究。这一方法适用于真菌各秩级的分类学研究，因为真菌基因组庞大，RAPD能对整个基因组序列做大致的分析，特别适用于分子生物学研究甚少、不了解基因组DNA序列的真菌。它借用的基本方法是PCR技术，操作简便、迅速，便于大规模使用。
Meyer等用（GTG）5、（GACA）4和噬菌体M13编码顺序（GAGGTGCGGCTCT）作为RAPD的随机单引物，对42株新生隐球菌进行研究。结果表明RAPD标志（亦称PCR指纹）具有高度重复性，且在种、变种和单个菌株水平上存在差异。新生隐球菌新生变种的A、D血清型的指纹截然不同, 而格特变种的B、C血清型其指纹则不易区分。结果表明，新生变种的两种血清型在遗传学上是不同的。格特变种的两种血清型(血清型B和C)比新生变种的两种血清型(血清型A和D)在遗传学上更为同源。上海长征医院温海用（GTG）5、（GACA）4和（GATA）4为引物，PCR扩增30株来自意大利米兰的新生隐球菌临床分离株和野生株、12株来自中国上海的临床分离株和6株标准株。结果能清晰地区分隐球菌的不同种、不同血清型及相同血清型的不同株，与Meyer的报告相似。上海长征医院顾菊林以（GACA）4作为RAPD的随机单引物，分析了11株新生隐球菌标准株和14株新生隐球菌临床分离株，结果显示（GACA）4引物产生的PCR指纹在新生隐球菌的种、血清型和株水平上呈现明显特征性差异。实验还发现1例隐球菌复发病例，其初始分离株和复发分离株其PCR指纹相同，说明为同一菌株，提示隐球菌病的复发是原始菌株的复燃所致，而不是新菌株的感染所为。作者认为RAPD分析可以发展为一种对新生隐球菌进行分类鉴定和流行病学调查的工具。RAPD对烟曲霉鉴定和分型亦有良好的应用价值。Loudon等以8聚寡核苷酸为引物，以RAPD分析了从6例患者的曲霉球中分离的19株烟曲霉。以引物CGCGGCCA可扩增出烟曲霉特有的RAPD带型，但不能反应菌株间的差异，因此可作为鉴定烟曲霉至种水平的依据。使用引物GCGCACGG将该菌分为6型，各型均有一条0.603kb的保留电泳带。使用引物GCTGGTGG可将该菌分成5型，保留带的分子大小为1.353kb。联合使用这两种引物则可将烟曲霉分成12型。而且有3例患者的烟曲霉球中分离出不同RAPD带型的菌株，说明同一病灶可由二个或二个以上型别的烟曲霉同时或先后感染。上海长征医院朱红梅采用寡核苷酸重复序列(GACA)4、(GTG)5及M13中心序列等3种引物，扩增20株红色毛癣菌和须癣毛癣菌临床分离株的DNA，观察产物电泳带型的差异。结果在3种引物的扩增中，均可见红色毛癣菌和须癣毛癣菌呈现出具有种特异性的DNA指纹,并检出其中2株原据表型鉴定为须癣毛癣菌的红色毛癣菌。认为红色毛癣菌可以用PCR方法加以鉴定，以(GACA)4作引物区分这两种菌最为合适。（六）rDNA序列分析
真菌基因组中编码核糖体的基因包括4种，25S rDNA、5S rDNA、18S rDNA和5.8S rDNA。它们在染色体上头尾相连、串联排列，相互之间由间隔区分隔。间隔区是位于核糖体大小亚基基因之间的核苷酸序列。位于25S rDNA的3&端与18S rDNA的5&端之间的序列称为核糖体内转录间隔区（internal transcribed spacers，ITS）；位于25S rDNA的5 &端与18S rDNA的 3 &端之间的序列称为核糖体基因内间隔区（intergenic spacers，IGS）。真菌的4种核糖体基因及间隔区有不同的进化程度，有的序列比较保守，有的序列进化较快，因此可以根据它们的序列，将真菌鉴定到属及属以上、种、亚种、变种、甚至菌株的水平。（表1）表1
核糖体不同序列分类等级表核糖体序列 适合分类水平5S rDNA
科（family）及科以上5.8S rDNA
属（genus）18S rDNA
属、种（species）25S rDNA
属、种、变种（variety）ITS
种、亚种（sister species）、变种IGS
种、变种、菌株（strain）（七）多位点酶电泳（mutilocus enzyme electrophoresis, MEE）
这是一种表型分子生物学分类方法。提取真菌胞浆并进行淀粉（或其它）凝胶电泳，以特异性酶活性染色法染色，观察各酶的移动情况。常被检测的酶有乙醇脱氢酶、葡萄糖－6－磷酸脱氢酶、谷氨酸脱氢酶等活性较高的酶。根据各酶的电泳迁移率，计算待检真菌间的相似系数。此法可靠方便，分辨力尚佳，重复性好，便于不同实验室对不同批次结果的比较。除此之外，还有一些分子生物学技术应用于真菌的分类研究中，但多是上述方法的变形或发展。需要指出的是任何一种好的分类学技术指标仍不能单独用于物种分类，必须结合多个可靠的分类指标，如形态性状、生理性状、生化性状乃至基因水平的指标综合考虑。在此基础上才可能建立符合客观规律的自然分类系统。应正确处理表型研究和基因型研究间的关系，两者的关系似应为表型鉴定、基因型证实，基因型是菌种之间存在差异的物质基础，表型是使菌种鉴定得以在常规临床实验室开展成为可能。
真菌分类是人为界定的，其目的在于使人们更为系统地认识真菌，并以此为着眼点更好地认识自然界，从人为分类向自然分类过渡。真菌分类是一个笼统的词，实际上包括了三个内容即真菌鉴定、真菌分类和真菌系统发育，代表了3种认识水平。真菌鉴定是针对单个真菌个体的比较和分类，因此上述用于真菌分类的分子生物学技术大多可用于真菌的鉴定研究。
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重庆华大方瑞成立于2002年，是国内做亲子鉴定最早的鉴定机构，经过国家司法部门审批成立的独立第三方司法鉴定机构，出具的司法鉴定报告全国范围内都可以使用，主要从事：亲子鉴定、司法亲子鉴定、移民亲子鉴定、亲缘鉴定、产前亲子鉴定、个人寻亲亲子鉴定、动物亲缘鉴定等。从02年开展业务至今，案例量总超13万例，帮助寻亲者找到亲人的案例过万。拥有国内最大的DNA寻亲信息库。
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