0.05表示差异有统计学意义
&&& 2.3& 嗅鞘细胞移植后在体内表达CNTF和FGF?2
【摘要】& 目的： 研究嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells, OECs）移植到损伤的脊髓后，能否分泌睫状神经营养因子（CNTF）和碱性成纤维细胞生长因子（FGF?2），以及能否引起脊髓组织内CNTF和FGF?2表达的变化及脊髓的细胞有何数量改变。方法： 体外分离培养大鼠嗅球嗅鞘细胞，通过免疫荧光细胞化学染色检测其CNTF和FGF?2的表达。将嗅鞘细胞移植入脊髓半横断SD大鼠，观察术后7天和21天嗅鞘细胞在脊髓内的存活情况，并对脊髓组织切片进行CNTF和FGF?2免疫荧光组织化学染色，计数阳性细胞并计算阳性面积百分比。结果： 嗅鞘细胞在体外培养和移植后都能表达CNTF和FGF?2。同未移植组对比，移植组脊髓CNTF和FGF?2表达明显增强（P＜0.05），神经元和少突胶质细胞数量增加(P＜0.05)，星型胶质细胞数量无明显改变。结论： 嗅鞘细胞移植入损伤的脊髓后能分泌CNTF和FGF?2，并使脊髓组织内CNTF和FGF?2的表达增加，引起神经元和少突胶质细胞数量增加。
&&& 2& 结& 果
&&& 很多神经营养因子已被报道在脊髓损伤（spinal cord injury, SCI）后对神经有保护作用。CNTF mRNA在脊髓半横断损伤后1～3天增加，然后在10～14天后降低［9］。另外，Lee等［10］发现脊髓半横断后，CNTF在术后7天达到最大值，然后在14天降低到基线水平。脊髓损伤后，FGF?2最早在6 h内增加，在7天后还很明显。增加的FGF?2主要局限在损伤的中心部位，7天后仅仅在损伤位置的头侧端可见。这些营养因子的持续表达可能对组织的修复有很重要的作用。但是嗅鞘细胞移植后，对脊髓组织的CNTF和FGF?2表达影响的研究几乎未见报道。在本实验中，我们观察到了原代培养的嗅鞘细胞 能表达CNTF和 FGF?2。这与Kenta 等［11］的结果一致，但是有报道说明同种的克隆细胞系的嗅鞘细胞(nOECs) 不表达CNTF的mRNA［12］。这与我们的结果不一致，可能nOECs的生物学特征发生了改变。我们还观察到嗅鞘细胞移植后，脊髓内这两种因子的表达增强，尤其在移植21天后表达还明显高于对照组。一方面，移植的嗅鞘细胞在体内表达CNTF和FGF?2；另一方面，移植后，脊髓本身的组织表达这两种因子增强。这两种因子在脊髓的表达增强可能对脊髓的神经元、少突胶质细胞和星型胶质起了重要的影响。
【关键词】& 脊髓损伤； 嗅鞘细胞； 移植； 睫状神经营养因子（CNTF）； 碱性成纤维细胞生长因子（FGF?2）
&&& 成年SD大鼠，体质量（270&20）g，T11～T12脊髓节段间用虹膜剪横断左侧半脊髓。为确保半横断，可用尖刀片在左侧半横断处来回切割2～3次，彻底止血后将明胶海绵填充在半横断处。动物随机分为两组，每组20只。移植组（注射细胞组）：损伤后在立体定位仪下用微量加样器（Hamilton）连接的玻璃针（80 &m i.d;100 &m o.d）立即将准备好的细胞悬液注射到横断处头?尾两侧1.0 mm?距中线0.5 mm处。注射深度分别为1.75，1.25和0.75 mm，每点在约30 s内注射2 &l，另在横断处注射8 &l,共注射12 &l。对照组（注射无血清培养液组）：方法同移植组。
&&& &本实验将嗅鞘细胞移植入大鼠半横断脊髓后，检测发现嗅鞘细胞在体内表达CNTF和FGF?2，并且使得这两种因子在脊髓组织中的表达比对照组高。此外,，细胞移植组神经元和少突胶质细胞的数量也比对照组多，而星型胶质细胞数量没有明显改变。
&&& 1.2& 免疫细胞化学染色
&&& 1.3& 嗅鞘细胞核荧光及细胞悬液的制备
&&& 移植后7天、21天在脊髓切片中均可观察到大量蓝色细胞核即移植的嗅鞘细胞的细胞核，细胞核数量未见减少，形态正常，未见核固缩和核碎裂。说明嗅鞘细胞移植后在脊髓存活良好。
&&& 术后7天和21天，动物取材，固定，脱水。用冰冻切片机作脊髓（纵切）的连续切片，片厚20 &m，每组动物取5张切片。切片用2%的牛血清白蛋白封闭15 min。然后切片置入一抗内孵育。切片所用一抗为：兔抗GFAP(1∶200, Sigma)，用来标记星型胶质细胞；小鼠抗NeuN(1∶1000, Chemicon), 用来标记神经元；兔抗MBP(1∶200, Chemicon)，用来标记少突胶质细胞。切片置入荧光素标记的二抗孵育。所用二抗为：马抗小鼠IgG(1∶100, 博奥森)。其他同前。用Zeiss荧光显微镜观察照相，每张切片取损伤边缘头侧、尾侧和对侧3个视野拍照。10&10放大倍数下每张照片实际面积为1.44 mm2；10&20倍数下为0.40 mm2。面积测量借助显微目镜测量尺进行（Leitz，7988c）。
&&& 脊髓损伤后出现神经元死亡、轴突脱髓鞘、少突胶质细胞丢失等一系列反应，造成轴突的再生失败。神经营养因子供给不足以及胶质瘢痕的形成可能构成了抑制轴突再生的主要因素,。尽管如此，轴突在合适的环境中仍可能恢复再生的能力。为了营造适合再生的组织环境，嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells, OECs）移植成为一项很有希望的治疗手段。有实验研究证实，嗅鞘细胞移植后能促进损伤脊髓恢复功能并保护神经细胞［1］。虽然嗅鞘细胞在神经保护和促进再生方面的机制还未完全阐明，但其分泌的神经营养因子有可能起关键作用。已知原代培养的嗅鞘细胞能分泌多种营养因子,，包括神经生长因子、神经营养素-4/5、神经调节蛋白、脑源性神经营养因子等。有研究表明，嗅球中睫状神经营养因子（ciliary neurotrophic factor,& CNTF）在嗅鞘细胞的胞核、胞质和突起中表达［2］。此外，嗅鞘细胞在体内还能合成碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, FGF?2)［3］。但目前还没有关于嗅鞘细胞移植和CNTF，FGF?2关系的报道。CNTF和FGF?2都能保护神经元，减少其死亡，尤其CNTF能促进不同类型的神经元存活。此外，CNTF和FGF?2还对少突胶质细胞系起重要的作用，前者能促进少突胶质前体细胞（oligodendrocyte precursor cells，OPCs）的成熟与分化，促进少突胶质细胞合成髓磷脂蛋白，并且防止少突胶质细胞的凋亡［4］；后者能促进少突胶质前体细胞的增殖和迁移，两者具有协同作用。因此，这两种因子在脊髓损伤后对少突胶质细胞的存活及增殖分化起了重要作用。然而，既往的研究报道都是分别关注脊髓损伤后移植嗅鞘细胞的疗效和CNTF与FGF?2对损伤修复的促进作用，还没有关于嗅鞘细胞移植后能否在体内表达CNTF，FGF?2，并引起脊髓这两种因子的表达变化，以及这两种因子对脊髓组织神经元和胶质细胞数量有何影响的报道。为了研究这个问题，我们将嗅鞘细胞移植到SD大鼠的脊髓半横断损伤部位，检测嗅鞘细胞是否能在体内表达CNTF和FGF2，并观察这两种营养因子在脊髓表达是否增强,。由于这两种因子对神经元有保护作用，且对少突胶质细胞的存活和增殖有促进作用，因此本实验还检测了移植后神经元和少突胶质细胞的数量变化。
&&& 参照朱振东等［6］的方法进行。加入Hoechst33342溶液孵育30 min,用胰蛋白酶消化及机械分离，制备浓度为10&106个/ml细胞悬液。嗅鞘细胞标记后，在荧光显微镜下观察，细胞核呈蓝色荧光。
&&& ［Abstract］& Objective: To investigate whether olfactory ensheathing cells(OECs) could secret ciliary neurotrophic factor(CNTF) and basic fibroblastic growth factor(FGF?2), and make expression change of them when planted in the spinal cord, then count the change of number for spinal cord cells. Methods： To culture and identify& the rat OECs. We detected the expression of CNTF and FGF?2 by immunofluorescence cytochemistry in OECs cells. OECs were transplanted into the hemisectioned spinal cord of adult SD rats and their survival condition was observed at 7th days and 21st days after transplantation. The CNTF and FGF?2 positive cell number and the positive area percentage,& as well as the number of& neuron and neuroglia& calculated by immunofluorescence analysis in the spinal cord. Results： OECs could express CNTF and FGF?2 in vitro and in viro post transplantation. Significantly higher levels of CNTF and FGF2 expression were detected compared with control(medium?injected）rats（P＜0.05）. The number of neuron and oligodendrocyte increased dramatically surrounding the wound（P＜0.05）, but not astrocyte. Conclusion： Post?transplanlation, OECs secreted CNTF and FGF2, and increased expression of CNTF and FGF?2 and the number of neuron and oligodendrayte in the spiual cord.
&&& 培养第14天进行免疫细胞化学染色。用多聚甲醛固定细胞，CNTF和FGF?2免疫荧光细胞化学染色（兔抗FGF?2，1∶200,博奥森,；兔抗CNTF，1∶200, USCN life Science & Technology Company；羊抗兔二抗IgG，1∶100, 博奥森），用Zeiss荧光显微镜观察照相。
&&& 1.5& 标本处理和免疫荧光组织化学染色
&&& 手术后7天和21天，脊髓横断处的周边组织均可见CNTF和FGF?2表达。移植组CNTF和FGF?2的表达都明显高于对照组（P&0.05）。见图3。
&&&&&&&&&&& 作者：毕文杰 章为 王廷华 朱振东 王健 马玉琼 郑翔 周雪
&&& 2.1& 嗅鞘细胞在体外表达CNTF和FGF?2
&&& 图片用联机ImagePro 5.0系统做图像分析，所得各组数据用&s表示；细胞移植组与对照组的数据比较用分组t检验，统计分析软件采用SPSS11.5，数据导入Excel2003作图。P&0.05表示差异有统计学意义。
&&& 术后7 天和21天，移植组神经元和少突胶质细胞的数量高于对照组（P＜0.05），星型胶质细胞的数量和对照组没有明显差异（P＞0.05）。见图4,5。
&&& 嗅鞘细胞移植入损伤的脊髓后，CNTF和FGF?2可在部分细胞的胞核和胞质中检测到（图2），说明移植的嗅鞘细胞能够表达CNTF和FGF?2。
&&& 按照李绍波等［ 5］的方法进行。无菌条件下取1月龄的SD大鼠嗅球最外两层, 经分散后将细胞种植于含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基中。采用差速贴壁和阿糖胞苷抑制相结合的方法培养。在培养第14天行胶质原纤维酸性蛋白(GFAP) 和神经生长因子受体(NGFRp75) 的免疫细胞化学染色鉴定, 并计算嗅鞘细胞的纯度。
&&& 1& 材料和方法
&&& 1.1& 嗅鞘细胞纯化培养及纯度鉴定
&&& 1.4& 大鼠半横断损伤模型的建立及嗅鞘细胞移植
&&& 3& 讨& 论
&&& 2.4& 移植前后脊髓T10节段CNTF和FGF?2表达变化
&&& OEC移植入成年大鼠的脊髓损伤处能促进功能的恢复和轴突的再生，形态学观察到它们桥接在损伤导致的空洞处，促进轴突穿过病变区，并且形成髓鞘围绕再生的或脱髓鞘的轴突，来增强轴突的传导性［7］。我们的前期工作从行为学、电生理和追踪等观察到嗅鞘细胞可促进损伤脊髓的功能恢复［6］。但其作用机制还不清楚，推测嗅鞘细胞能合成某些特殊的细胞外基质和营养因子来支持轴突的黏附和生长［8］。
&&& 免疫荧光细胞化学染色显示，培养第14天，嗅鞘细胞的核和胞质呈明显的CNTF与FGF?2阳性（图1）。
&&& 2.2& 嗅鞘细胞的存活情况
&&& 2.5& 移植前后神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞数量的变化
&&& ［Key words］&& olfact&& ciliary& basic fibroblast growth factor
&&& 1.6& 实验数据分析相关的主题文章：
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例如： 前面合同描述 8000元/平方米， 房屋面积： 140 平， 套内建筑面积：115平方米， 公摊： 25平方米，
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& 细菌和真菌的区别知识点 & “请你仔细观察图中的生物并回答问题：（1）...”习题详情
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请你仔细观察图中的生物并回答问题：（1）填出各图所示生物的名称：A青霉&；B香菇&；C细菌&．前两者属于真菌&类生物．（2）请你说出图C中生物在形态结构方面区别于A、B的两个特点：细菌是单细胞&、细菌不具有成形细胞核&．（3）A和B的主要生殖方式是孢子生殖&；C的主要生殖方式是分裂生殖&．（4）以上三种生物的细胞内都没有叶绿体，所以它们获取营养的方式都是异养&，它们在生态系统中的主要作用是作为分解者参与物质循环&．
本题难度：一般
题型：填空题&|&来源：网络
分析与解答
习题“请你仔细观察图中的生物并回答问题：（1）填出各图所示生物的名称：A____；B____；C____．前两者属于____类生物．（2）请你说出图C中生物在形态结构方面区别于A、B的两个特点：____、____．（...”的分析与解答如下所示：
细菌的基本结构有细胞壁、细胞膜、细胞质和DNA集中的区域，没有成形的细胞核，没有叶绿体；真菌的基本结构有细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核，没有叶绿体．因此细菌与真菌的根本区别在于真菌具有成形的细胞核．
（1）青霉菌为多细胞真菌．无性繁殖时，菌丝发生直立的多细胞分生孢子梗，梗的顶端不膨大，但具有可继续再分的指状分枝，每枝顶端有2-3个瓶状细胞，其上各生一串灰绿色分生孢子．分生孢子脱落后，再适宜的条件下萌发产生新个体．所以青霉菌的形态呈扫帚状，据图可知A是青霉，B是香菇，C是细菌，青霉和香菇属于真菌．（2）细菌的基本结构有细胞壁、细胞膜、细胞质和DNA集中的区域，没有成形的细胞核，没有叶绿体；真菌的基本结构有细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核，没有叶绿体．因此细菌与真菌的根本区别在于细菌不具有成形细胞核．青霉和香菇属于多细胞真菌，细菌是单细胞．（3）真菌是孢子生殖，细菌通过分裂的方式进行繁殖，也就是一个细菌分裂成两个细菌．（4）细菌和真菌的细胞内都没有叶绿体，因而不能进行光合作用，都必须靠现成的有机物维持生活，因此营养方式为异养．腐生细菌、真菌是生态系统中的分解者，细菌、真菌能把动植物的遗体遗物分解成二氧化碳、水和无机盐，这些物质又能被植物吸收和利用，进而制造有机物，可见，细菌和真菌对于自然界中二氧化碳等物质的循环起着重要的作用．故答案为：（1）青霉；香菇；细菌；（2）细菌是单细胞；细菌不具有成形细胞核；（3）孢子生殖；分裂生殖；（4）异养；作为分解者参与物质循环
解答此类题目的关键是熟知细菌真菌的结构．
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请你仔细观察图中的生物并回答问题：（1）填出各图所示生物的名称：A____；B____；C____．前两者属于____类生物．（2）请你说出图C中生物在形态结构方面区别于A、B的两个特点：____、_...
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等考点的理解。
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细菌和真菌的区别
与“请你仔细观察图中的生物并回答问题：（1）填出各图所示生物的名称：A____；B____；C____．前两者属于____类生物．（2）请你说出图C中生物在形态结构方面区别于A、B的两个特点：____、____．（...”相似的题目：
下面描述的是细菌和真菌的一些特征，请将属于真菌的特征用序号填写在空格上：&&&&、&&&&、&&&&．①既有个体微小的种类，也有个体较大的种类，细胞内有真正的细胞核．②能产生孢子，孢子能发育成个体．&&&&&&&&③通过分裂的方式繁殖后代．④个体微小、细胞内没有成形的细胞核．&&&&⑤细胞内没有叶绿体．
营养学家提倡多吃蘑菇和酸牛奶，酸牛奶中的乳酸菌能有效抑制有害细菌对肠道的入侵，形成生物屏障．下列有关蘑菇和乳酸菌的叙述正确的是&&&&都能进行孢子生殖都有细胞壁由蛋白质外壳和和内部的遗传物质构成都是单细胞生物
某生态系统受到DDT污染，经检测该生态系统中甲、乙、丙、丁四种生物体内DDT含量如下表所示．由此推断这四种生物构成的食物链最可能是&&&&
DDT（万倍）
66丙→丁→甲→乙甲→乙→丙→丁乙→甲→丁→丙丁→乙→甲→丙
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该知识点好题
1乳酸杆菌是一种细菌，可用于制作酸奶．它与酵母菌的主要区别是&&&&
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该知识点易错题
1细菌与真菌的共同特征是&&&&
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你可能喜欢（2013o临沂模拟）阅读下列材料，请分析回答：材料一：H7N9型禽流感是一种新型禽流感，于2013年3月底在上海和安徽两地率先发现．被该病毒感染者均在早期出现发热等症状．专家提示，一旦出现发热、咳嗽等急性呼吸道感染症状，尤其是出现高热、呼吸困难者，应及时就医．保持勤洗手、咳嗽和打喷嚏时遮掩口鼻等个人卫生习惯，能够有效预防流感等呼吸道传染疾病．同时还应避免接触和食用病（死）禽、畜．材料二：我国滥用抗生素的现象非常普遍，有些人甚至把它当作感冒和咳嗽等疾病的“万灵丹”．据统计，我国每年约有8万人直接或简接死于滥用抗生素；由于长期使用或用药不当，细菌对抗生素的耐药性逐渐增强．（1）从传染病学的角度分析，H7N9禽流感病毒被称为病原体．它与细菌在结构上根本区别是无细胞结构．（2）隔离&H7N9流感患者，从预防传染病的措施看，这属于控制传染源．专家建议“保持勤洗手、咳嗽和打喷嚏时遮掩口鼻等个人卫生习惯”这属于切断传播途径．（3）感冒时，使用抗生素治疗流感效果并不显著，主要是因为抗生素的作用对象主要是细菌．（4）随着抗生素的使用，细菌的耐药性增强，这说明细菌发生了变异，这是抗生素对细菌进行选择并逐代积累的结果．
解：（1）病原体指能引起疾病的微生物和寄生虫的统称．微生物占绝大多数，包括病毒、衣原体、立克次体、支原体、细菌、螺旋体和真菌；寄生虫主要有原虫和嚅虫．病原体属于寄生性生物，所寄生的自然宿主为动植物和人．H7N9禽流感病毒被称为病原体．病毒无细胞结构，只有蛋白质的外壳和内部的遗传物质构成，病毒不能独立生活，只能寄生在其它生物体内．（2）传染病的流行包括三个基本环节：传染源、传播途径和易感人群．传染病流行的时候，切断三个基本环节中的任何一个环节，传染病的流行即可终止．我们预防传染病的各种措施，都是分别针对三个基本环节中的某个环节的．因此，针对传染病流行的三个基本环节，预防传染病的一般措施可分为：控制传染源、切断传播途径、保护易感者．故上述资料提到的相关预防措施中，隔离&H7N9流感患者是为了控制传染源，专家建议“保持勤洗手、咳嗽和打喷嚏时遮掩口鼻等个人卫生习惯”属于切断传播途径．（3）因为流行性感冒90%是由于病毒引起的，抗生素是用来杀菌的，对病毒不起任何作用，所以效果不明显．（4）滥用抗生素导致细菌耐药性的产生，按照达尔文的理论，病菌抗药性是这样产生的：细菌个体中存在着对抗生素耐药性的变异，在抗生素使用时耐药性强的个体生存下来并繁衍后代，其耐药变异遗传给后代；随着抗生素的频繁使用（滥用），细菌耐药性逐渐增强．故答案为：（1）病原体；无细胞结构（2）控制传染源；切断传播途径（3）细菌（4）变异；选择此题考查的知识点是特异性免疫及传染病、自然选择学说等等知识．解答时可以从特异性免疫的过程、原理、特点以及传染病的流行环节及自然选择学说等进行综合分析．}