使过氧化氢酶失活的化合物及其应用的制作方法
专利名称使过氧化氢酶失活的化合物及其应用的制作方法
技术领域本发明涉及一种通式为R1-COO-SO2-Z-R2的磺酰酯，其中Z、R1和R2具有权利要求1中所定义的意义，本发明还涉及这些化合物在改良过氧化氢酶的酶催化作用动力学中的应用，本发明还涉及一种借助于从过氧化氢放出的氧来测定液态样品中的活的和/或活性的微生物如细菌和/或真菌，特别是霉菌和/或酵母的浓度的方法以及实施这种方法的设备。
背景技术 至今主要通过微生物方法来测定食品、冷却润滑剂等的病菌感染或检验杀生物剂或消毒剂的有效性，这些方法均利用某些微生物的生长，因此过程慢并不适于现场对病菌感染进行连续控制。
病菌感染的最重要起因在食品情况下主要是需氧微生物(如细菌和/或真菌，特别是霉菌和/或酵母)，在含水冷却润滑剂乳液情况下还有兼性厌氧微生物。在所有具有基于细胞色素-电子转移的呼吸系统以产生能量的微生物(和在食品和冷却润滑剂-乳液中存在的所有微生物)中，均可找到一种确定的称作过氧化氢酶的酶，它在化学上是一种呈含铁(III)的高铁血红素IX形式的含4血-摩尔的四聚体铁-蛋白(Mr＝245000)。过氧化氢酶特别快速将过氧化氢分解成水和氧，其中氧的放出正比于酶浓度。因此一种比与微生物生长相关的方法要更快的确定病菌感染的已知方法是基于这一点，参看H.K.Frank & U.Hertkorn-Obst，Chem.Mikrobiol.Technol.Lebensm.6，143-149(1980)和/或R.G.Kroll，E.R.Frears & A.Bayliss，J.Appl.Bacterial.66，209-217(1989)。释氧的测定可采用各种已知的方法，特别是测压法，参看G.J.Wang & D.Y.C.Fung，J.of FoodSafety 8，46-47(1986)以及EP-476850。有利的是将要测定的微生物引入含水样品中，并加入过氧化氢使其浓度约为1体积％，对于大多数要测定的微生物，其测定用的最佳pH值在中性范围，即pH为7。
此外，为测定待化验物品或样品的病菌感染，仅包括活的微生物，即仅仅该活的微生物的胞内的活性过氧化氢酶的酶催化作用才是有意义的并且是要测定的。但是在样品中存在的来自不同来源的内源性的活性过氧化氢酶的酶催化作用会引起测量误差。因此H.K.Frank & U.Hertkorn-Obst及R.G.Kroll，E.R.Frears & A.Bayliss曾报道过其各种困难性。为区分活的和死的酵母细胞(啤酒酵母)需要特别大的花费。食品含有非微生物内生的过氧化氢酶，它通过植物部分(蔬菜色拉、洋葱)、果汁(苹果汁、柠檬汁)和动物组织(肉和奶中的红细胞)引入样品中，并通过其酶催化作用产生明显的测量误差，除非这种非微生物内生的过氧化氢酶在过程中例如经加热处理(巴氏消毒、防腐)来加以去除。饮用水和游离水中也含有各种干扰的植物残余物和悬浮物质，它们在将过氧化氢引入样品中时会催化氧的放出，除非通过过滤将这些干扰物质去除。
上面所提到的困难使至今提供使用的用于测定食品、冷却润滑剂等的病菌感染和检验杀生物剂或消毒剂的有效性的较快速的方法不可靠。
由EP-184260中已知一种方法，用这种方法可检测过氧化氢酶的总含量，而不能检测活的和/或活性的微生物的浓度。该方法中包括细菌性的以及非细菌性即内生的过氧化氢酶，后者会导致明显的差别。由于菌落形成单位(KbE)的数量和在生物量影响下的过氧化氢酶值之间的干扰关系，所以并非在所有情况下均可判断微生物的感染或测定活的和/或活性的微生物的浓度。
从US-5610025和/或WO-93/15218中已知一种方法，此法在有过氧化氢酶存在下可检测分解过氧化氢的酶。在加入过氧化氢之前，通过加入羟胺盐抑制过氧化氢酶。但是该教导未导致对活的和/或活性的微生物浓度的测定。
因此，本发明的目的是提供一种用于测定活的和/或活性的微生物浓度的方法，其测量值结果是可靠的，特别是不会由内生的过氧化氢酶引起误差。
本发明的目的还要证明和提供一种化合物，它能引起过氧化氢酶的酶催化作用的动力学的改性，特别是引起过氧化氢酶的酶催化作用的不可逆的失活，特别是使活性的内生的过氧化氢酶失活，尤其是对胞内的活性过氧化氢酶的酶催化作用无明显失活作用。
本发明的目的是还要提供一种可快速获得测量值结果并对该结果可加以阐明的上述方法以及适用于此方法的设备。
发明描述为达到下列描述中可看到的这些和其它目的，本发明给出一种新的化合物以及在相应的物质权利要求和应用权利要求中定义了其按本发明的应用。
同样，在相应的方法权利要求中定义了本发明方法及优选的进一步的发展以及在相应的设备权利要求中定义了实施本发明方法的优选设备及其优选的进一步的发展。
由于本发明方法的简便性，特别是与实施本发明的设备相关联，本发明可简易、快速和廉价地实施本发明方法，它可直接显示出活的和/或活性的微生物的浓度。
因为本发明方法的反应时间和测量时间很短，所以例如可就在食品上货架之前或其食用之前对其进行监控，以及时撤回有较高病菌感染的货物。
特别是本发明方法的测量值结果可在较短时间如短于半小时并因此可实时地获得，这就使该方法可就地用于控制和/或监测，这时胞内的活性过氧化氢酶就是那些活的微生物如细菌和/或真菌，特别是霉菌和/或酵母。
对此，本发明阐述和提供的化合物引起了过氧化氢酶的酶催化作用动力学的改性，使其可用于杀死微生物。
附图简述对本发明的实施例将在下面参照附图作详细说明，附图为附图说明
图1-8按所应用的制品和液体的图示表明的本发明方法的顺序步骤。
图9实施本发明方法的设备的压力测量仪示图，在图示中带有测压探头部件和压力分析部件。
图10实施本发明方法的设备的排气工具示图。
图11实施本发明方法的设备应用的塞子示图。
实施本发明的方法在本发明的范围内已发现，某些化合物能改性过氧化氢酶的酶催化作用的动力学。这种改性对内生的活性过氧化氢酶和胞内活性过氧化氢酶是不同的。根据所用化合物和由其改性的过氧化氢酶的种类(内生的和胞内的，后者存在于不同微生物的细胞内)的不同，这种改性可以引起所有过氧化氢酶的不可逆失活，和/或可达到内生的活性过氧化氢酶的不可逆失活而胞内的活性过氧化氢酶的酶催化作用无明显失活。由此出现了各种应用，其中特别受关注的是测定活的和/或活性的微生物的浓度和/或杀灭微生物。
在本文中所考虑的微生物可以是细菌和/或真菌，特别是霉菌和/或酵母。
在本文中所考虑的化合物是下列通式的磺酰基酯R1-COO-SO2-Z-R2其中，Z是亚苯基或不存在，R1通过伯或仲碳原子与酸基-COO-的碳原子相连，并且是具有2-21000个碳原子的直链的或支化的烷基、具有2-21000个碳原子的直链的或支化的烯基或者2-21000个碳原子的直链的或支化的炔基，R2在Z存在时通过仲或叔碳原子在SO2基团的邻位、间位或对位上与亚苯基相连，或在Z不存在时与SO2基团相连，并且是具有3-100个碳原子的直链的或支化的烷基、具有3-100个碳原子的直链的或支化的烯基、具有3-100个碳原子的直链的或支化的炔基、具有3-100个碳原子的直链的或支化的烷氧基、具有3-100个碳原子的直链的或支化的羟烷基，其中羟基通过伯或仲碳原子与烷基相连、或具有3-100个碳原子的多氧杂烷基(polyoxaalkyl)。
在这类化合物中特别优选 其中n和m是自然数，并且3＜(n+m)＜60，
CH2＝CH-COO-SO2-CH2-CH＝CH-C13H27，CH2＝CH-COO-SO2-O-C12H25， 和CH2＝CH-COO-SO2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-O-C12H25。
下列化合物的制备和检验 在1000ml锥形烧瓶中加入460ml蒸馏水，然后加94g十二烷基苯磺酸钠盐。在约50℃下用磁搅拌器搅拌到完全溶解，然后使该溶液放置冷却15分钟。接着在搅拌下慢慢加入2.4ml无水丙烯酸，并进一步搅拌该溶液直到其达到室温。在室温下于暗处放置该溶液至少24小时后，在250ml的锥形烧瓶中加入79.5ml蒸馏水，然后在搅拌下加入0.5ml的0.066M的磷酸盐缓冲液(pH＝7.00)。接着在搅拌下加入1g在前一天所制得的溶液混合物。如此所得的标题化合物的pH值为约4.6。
提供下述试剂来自牛肝的过氧化氢酶(作为内生的活性过氧化氢酶)来自黑曲酶的过氧化氢酶(作为胞内的活性过氧化氢酶)来自微生物(*)的过氧化氢酶(作为胞内的活性过氧化氢酶)(*)各种细菌和/或真菌防沫剂(RD?，Dow Corning公司)过氧化氢(Perhydrol?30％，Merck公司)每个样品中均为每1ml蒸馏水中含有35单位的来自牛肝或黑曲酶或微生物的过氧化氢酶。将1ml样品加到15ml的试管(Vacutainer?16×125mm，Becton Dickinson公司)中，所有情况下均加入7ml的前述标题化合物，并进行混合(混合器Vortex?Genie 2，Merck公司)。然后加入一滴所述的防沫剂，并重新混合。然后加入0.23g过氧化氢，并立刻用耐化学试剂的弹性塑料(Viton?，Du Pont deNemours公司)制成的塞密闭该试管，用穿刺进该塞的空心针(注射针φ1mm)进行短时间(几秒钟)除气，并立刻从塞中拔出空心针以再次密闭该试管。该密闭的试管在室温下放置15分钟。然后将呈水平倾斜的小管来回摇10次，以确保细胞膜开裂。然后测量试管中的压力(参看下面优选测压计的描述)。
测量表明在小管中压力没有增加。由此得出结论即该标题化合物已使内生的活性过氧化氢酶和胞内的活性过氧化氢酶失活。也可得到结论即该标题化合物可用于杀死微生物，因为其胞内过氧化氢酶失活的这类微生物由于缺少这种过氧化氢酶的作用而死亡。
下列化合物的制备和检验CH2＝CH-COO-SO2-O-C12H25在500ml的锥形烧瓶中加入200ml蒸馏水，然后加入25g月桂基硫酸钠。在约70℃下用磁搅拌器搅拌直到其完全溶解。然后在保持该温度及搅拌下慢慢加入1.07g聚丙烯酸(Mr＝0000)，并再搅拌该溶液45分钟。接着将5ml的0.25M磷酸氢二钠-二水合物溶液加到蒸馏水中，并每15分钟再计量加入2ml该溶液直到该溶液耗量总共达12ml。将所得溶液首先在保持该温度下搅拌60分钟，然后冷却至室温。如此所得溶液的pH值约为5.9。这时在250ml的锥形烧瓶中加入42ml蒸馏水，然后在搅拌下加入5ml的0.066M磷酸盐缓冲液(pH值7.00)。接着在搅拌下加入3g刚才所制得的溶液混合物。所得该标题化合物的溶液的pH值约为6.4。
提供已在前面的描述的同样的试剂，并以与前述相同的方法使过氧化氢酶经受该标题化合物的作用，并通过氧的释放(压力升高)来检验由此所得出的过氧化氢酶的活性。
如果该样品中仅存在内生的活性过氧化氢酶，则会发现试管中的压力未升高。但是如果在该样品中还存在来自微生物如细菌和/或真菌，特别是霉菌和/或酵母的胞内的活性过氧化氢酶，则会发现试管中的压力升高。由此得出结论，该标题化合物可使内生的活性过氧化氢酶失活，但不明显使胞内的活性过氧化氢酶失活。
本发明化合物的应用前述的制备和检验本发明的化合物的实例表明，本发明的化合物的后者会引起过氧化氢酶的酶催化作用的动力学改性。已表明根据所用的本发明化合物和用此处理的微生物，可使过氧化氢酶的酶催化作用产生可逆或不可逆的失活，通过合适地选择本发明的化合物可仅使内生的活性过氧化氢酶的酶催化作用失活或使内生的活性过氧化氢酶和特别是来自活的微生物如细菌和/或真菌，特别是霉菌和/或酵母的胞内的活性过氧化氢酶的酶催化作用同时失活。
可使来自活的微生物如细菌和/或真菌，特别是霉菌和/或酵母的胞内的活性过氧化氢酶的酶催化作用不可逆失活的本发明的化合物导致这类微生物的死亡。
下面描述应用本发明的化合物来测定活的和/或活性的微生物如细菌和/或真菌，特别是霉菌或酵母的浓度的程序。
测定样品液体中活的和/或活性的微生物的浓度的方法下面将借助于图1-8来描述用于测定样品液体中活的和/或活性的微生物的本发明的方法。该方法是基于测定由过氧化氢放出的氧，将该过氧化氢加到任选稀释过的和/或经缓冲处理过的样品液体中，并通过在样品液体中所含有的过氧化氢酶快速分解为氧和水。
图1中是一个提供的基本上是圆筒状的容器，在一个实施方案中由试管1构成，例如它是15ml的试管Vacutainer?16×125mm，Becton Dickinson公司，它由可盖在其上的由耐化学试剂的弹性塑料例如由Viton?，Du Pont de Nemours公司，制成的塞子2密闭。为了说明，在图1中该塞子2是以盖在试管1上表示的。
图2表示在试管1中加有1ml要检验的样品液体3。但并未显示该样品液体3任选是由原始样品经稀释和/或缓冲(优选达到pH值为6-7)处理后所得到的。
图3表示在该样品液体3中混入7ml试液4，该试液是约0.05M的本发明的活性物质即本发明的化合物或本发明的化合物的混合物。由于是要测定活的和/或活性的微生物的浓度，所以这时如此选定本发明的活性物质，以使其使样品液体中可能存在的内生的过氧化氢酶的酶催化作用失活，但对要测定的微生物的胞内过氧化氢酶的酶催化作用无明显的失活。
图4表示向在图3中所示的液体物3和4中优选通过计量滴加混入约0.2ml(约0.23g)的30重量％含水过氧化氢溶液5，这样经接着的混合使得在得到(图5所示)的混合物6中的过氧化氢的浓度为约1体积％。任选在加过氧化氢溶液之前加1滴或几滴防沫剂是有利的。
图5表示在图4中所示的加入过氧化氢溶液5之后将塞子2盖在试管1上，以密闭其中的混合物6。
图6表示在图5中所示的用塞子2密闭试管1后，尽快用空心针7，例如是φ1mm的注射针刺穿该塞子，以使试管中所存在的气压与大气压相平衡。在数秒钟，优选1-2秒钟后就从塞子2中抽出空心针7，由于塞子的弹性和因为它受试管1区域的径向压挤，由于抽出空心针7留下的穿孔(未示出)由塞子所气密性封闭。
图7表示使在密闭试管1中的混合物6密闭保持预定的反应时间，即以从塞子2中抽出空心针7算起优选为15分钟，并摇动呈水平倾斜的试管1，最好是10次有力的来回摇动，其摇动以双箭头8表示。在反应期间，从混合物6中所含的过氧化氢释放出氧。
图8表示在预定的反应时间的终点测定试管1中存在的压力，其方法是用空心针9，如同样是φ1mm的注射针刺穿塞子2，该空心针9与图示的压力传感器10相连。该压力传感器10是压力测量仪11的部件，该测量仪11将在下面以图9说明。
从图6和图8的比较可看出，空心针7(用于平衡压力)和空心针9(用于压力测量)是在不同位置整刺穿塞子2，以避免空心针9穿通塞子2中由抽出空心针7所留下的穿孔(未示出)时气体从试管1中逸出。
在实施本发明方法时通常已知所检验的物品或样品是否和以什么比例被稀释从而得到液体样品3。通常从经验也知道在检验物中主要是那类微生物，以致通常也可知在检验物中存在的过氧化氢酶的有效性或活性。借助于这些信息和推算出空白试验值以及用已知浓度的同类微生物得出压力测量仪11的特性曲线后，可由测定的压力算出样品中活的和/或活性的微生物的浓度。在此很容易理解也不需详述的是，在压力测量仪11中配有微处理器22和数据存储器23(参看下面以图9的描述)，以在其中存储并处理所述的数据，以致自动算出样品中活的和/或活性的微生物的浓度，并且优选直接以数据显示。
测定样品液中的活的和/或活性的微生物的浓度的设备图9表示为实施本发明方法的设备的以总标号11表示的压力测定仪。压力测定仪11包括图示的以总标号12表示的测压探头部件和图示的以总标号13表示的压力分析部件，它们通过屏蔽式多芯电缆14的导线相互连接。
测压探头部件12包括呈圆柱形不透明套筒的基座15，其孔16在使用时呈垂直轴向布局。在孔中以很小的间隙适配试管1，该试管的约至多一半长度可按轴向插入其中。在孔16一端，基座15的环形边缘形成定位面17，它配位完全插入孔16中的试管1，并由此定位在预定的位置，而与为密闭试管1的塞子2是否或塞入试管1中多深无关。另外，测压探头部件12还包括已提到的空心针9和压力传感器10以及圆筒形的定位不透明套筒18，该套筒的孔19在使用时按垂直轴向布局。空心针9与孔19同轴地固定在压力传感器10上，而该传感器固定在定位套筒18上。在孔19端部，定位套筒18的环形边缘形成定位面(Anschlag-fl?che)20，使定位套筒18和经压力传感器10和空心针9到其尖21成固定位置排列。定位套筒18的轴向长度的尺寸设计使得在使用测压探头部件12时，该塞子2被空心针9刺穿，但空心针穿入试管1中的深度要使其尖21保持在试管1中含有的混合物6上面所存在的气腔中。最后如图9所示，测压探头部件12、试管1和其附加的定位面17和20的尺寸设计和相互定位要使在以空心针9刺穿塞子2时，该针仅与塞子2接触，以致塞子2仅受到微小的并主要是径向的负荷，并由此该塞子并未被压入试管1内部，这样就避免体积变化及由此产生的测量误差。
压力分析部件13包括微处理器22和数据存储器23，它们通过电缆14由测压探头部件12中的压力传感器10获取数据。此外，至少部分数据存储器23(例如EPROM、快速存储器或其它可互换的或可使用的存储器)和还有微处理器22均是可编程序的。由此在压力分析部件13中可存储用于压力测量仪11的空白值的数据以及压力测量仪11的特性曲线的数据。特性曲线可采用与在样品液体3中所预计存在的相同类型的已知浓度的活的和/或活性的微生物来测定，并在用于压力测量仪11的特性曲线的数据中也纳入用于样品稀释的数据。由如此编程序的微处理器22可通过由电缆14提供的来自测压探头部件12的压力值数据和微处理器22从数据存储器23所得的数据算出样品中的活的和/或活性的微生物的浓度。由于这种自动的和编程序的计算，就可以得到直接以样品中活的和/或活性的微生物的浓度数值并在压力分析部件13中的读数显示24器上显示出。
图10表示图示的以总标号32示出的实施本发明方法的除气装置。该除气装置32中的一些部件与测压探头部件12中的相应部件相同，甚至可能是有另外功能的同样的部件这类相同的部件在这里仅再次提到，可参阅本文中与测压探测部件12有关所给的对相应部件的描述。
该除气装置32包括基座25，它与基座15相同。在与孔16相同的并且使用时同样是呈垂直轴安置的孔26中以同样方法插入试管1。在孔26的一端，该基座25的环形边缘形成定位面27，它与定位面17相同。此外，除气装置32还包括已提到的空心针7以及呈圆筒形的定位不透明套筒28，其孔29在使用呈垂直轴向安放。空心针7以平行于孔29的轴但不同轴即偏心地固定在定位套筒28上。在孔29的一端，定位套筒28的环形边缘形成定位面30，使定位套筒28和经空心针7到其尖31成固定位置和排列。定位套筒28的轴向长度的大小设计要使在使用除气装置32时，塞子2被空心针7刺穿，但空心针穿入试管1中的深度要使其尖31保持在试管1中含有的混合物6上面所存在的气腔中。最后如图10所示，除气装置32、试管1和其附加的定位面27和30的尺寸设计和相互定位要使在以空心针7刺穿塞子2时，该针仅与塞子2接触，以致塞子2仅受到微小的并主要是径向负荷，并由此塞子并未被压入试管1内部，这样就避免体积变化及由此产生的测量误差。
图11表示以轴向纵截面示出的塞子2。为了一方面确保塞子2能气密性地密闭试管1，另一方面又能使空心针7和9能刺穿它，该塞子2由耐化学试剂的弹性塑料制成，并基本上呈蘑菇状，它具有可插入试管1的圆柱体33，其上面是塞子头34，下面呈套筒状的密封边35。在用塞子2密闭的试管1情况下，圆柱体34和密封边35完全在试管1内呈径向压缩状态，而较宽的塞子头33保留在试管1的外面，并盖在试管嘴上。如果例如该试管1是Becton Dickinson公司的试管Vacutainer?16×125mm，并且塞子2由Du Pont de Nemours公司的Viton?制成，则由空心针7和9要刺穿塞子2的总深度为约5mm，圆柱体34被径向压缩约7％。
前面借助于各个实施例描述了本发明，它涉及本发明物质的制备及导致过氧化氢酶的酶催化作用动力学的改性和/或应用。它提供了本发明物质的多种应用可能性，它在改性过氧化氢酶的酶催化作用动力学及需要时杀死微生物方面的应用，本发明方法在测定活的和/或活性微生物浓度方面的应用以及相应的本发明的设备的应用。在无任何限制的实例列表中，作为测定、监控和/或工艺程序控制以及杀死微生物的应用可能性可以提到食品的消费、销售和工业生产阶段(抗微生物的腐烂)；材料的切削加工(关于可水混合的冷却润滑剂等)；人类医学和兽类医学特别是在医院和医学实验室中的用品供应及处置(血、尿、设备和仪器、包扎用品等)；淡水供应、水的贮存和废水处理；通风装置和空调装置(新鲜空心净化、空气循环、废气的处置)；和前述领域或其它领域的研究和发展。
总的来说可以认为，用已描述的本发明的过氧化氢酶方法，a)可通过合适的膜过滤器过滤来检测样品中的非常低的病原菌；b)通过合适的膜过滤器过滤可区分细菌及真菌和酵母；c)可达到更高的测量灵敏度，因为与现有技术相比可应用更灵敏的压力传感探头；并且，本发明的化合物可使内生的活性过氧化氢酶失活，也可使活性细菌过氧化氢酶失活，并可单独作为活性消毒组分使用或引入消毒剂中以杀死微生物。
标号列表1 试管2 塞子3 样品液体4 试剂液体5 过氧化氢溶液6 混合物7 平衡压力用空心针8 来回摇动9 测压用空心针10压力传感器11压力测定仪12测压探头部件13压力分析部件14电缆15测压探头部件12的基座16基座15中的孔17基座15上的定位面18定位套筒19定位套筒18的孔20定位套筒18上的定位面21空心针9的尖22微处理器23数据存储器24显示器25除气装置32的基座26基座25中的孔27基座25上的定位面28定位套筒29定位套筒28的孔30定位套筒18上的孔
31空心针7的尖32除气装置33塞子2的圆柱体34塞子2的塞子头35塞子2的密封边
1.如下通式的磺酰基酯R1-COO-SO2-Z-R2其中，Z表示亚苯基或不存在，R1表示通过伯或仲碳原子与酸基-COO-的碳原子相连的并且具有2-21000个碳原子的直链的或支化的烷基、具有2-21000个碳原子的直链的或支化的链烯基或者具有2-21000个碳原子的直链的或支化的炔基，R2在Z存在时通过仲或叔碳原子在SO2基的邻位、间位或对位上与亚苯基相连，或在Z不存在时与SO2基相连，并且表示具有3-100个碳原子的直链的或支化的烷基、具有3-100个碳原子的直链的或支化的烯基、具有3-100个碳原子的直链的或支化的炔基、具有3-100个碳原子的直链的或支化的烷氧基、具有3-100个碳原子的直链的或支化的羟基烷基，其中羟基通过伯或仲碳原子与烷基相连、或具有3-100个碳原子的多氧杂烷基。
2.权利要求1的化合物，它选自下式之一 其中n和m是自然数，并且3＜(n+m)＜60，CH2＝CH-COO-SO2-CH2-CH＝CH-C13H27，CH2＝CH-COO-SO2-O-C12H25， 和CH2＝CH-COO-SO2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-O-C12H25。
3.权利要求1或2之一的化合物在改性过氧化氢酶的酶催化作用动力学中的应用。
4.权利要求3的应用，其特征在于，所述动力学的改性是失活。
5.权利要求4的应用，其特征在于，所述失活是不可逆的。
6.权利要求4和5之一的应用，其特征在于，所述失活涉及内生的活性过氧化氢酶的酶催化作用的失活。
7.权利要求6的应用，其特征在于，所述失活涉及内生的活性过氧化氢酶的酶催化作用的失活，而对胞内的活性过氧化氢酶的酶催化作用无明显的失活。
8.权利要求7的应用，其特征在于，所述胞内的活性过氧化氢酶是活的微生物的胞内活性过氧化氢酶。
9.权利要求8的应用，其特征在于，所述活的微生物是细菌和/或真菌，特别是霉菌和/或酵母。
10.权利要求3-9之一的应用，用于杀死微生物。
11.一种借助于从过氧化氢放出的氧来测定液态样品中的活的和/或活性的微生物如细菌和/或真菌，特别是霉菌和/或酵母的浓度的方法，其中过氧化氢被加入到任选稀释和/或缓冲的样品中，其中氧的放出是由样品中所含的过氧化氢酶所引起，其特征在于，a)将权利要求1的化合物混入到可气密性封闭的容器中的样品中，该化合物使内生的过氧化氢酶的酶催化作用失活，而对胞内的过氧化氢酶的酶催化作用无明显失活；b)将过氧化氢混入步骤a)所得的混合物中；c)步骤b)后，立即气密性地封闭该容器；d)步骤c)后，立即使容器中存在的气压与大气压相平衡；e)步骤d)后，立即再气密性地封闭该容器；f)从步骤e)的封闭算起，使该容器气密性地封闭保持一段预定的反应时间；和g)在预定的反应时间终点，测定容器中存在的压力。
12.权利要求11的方法，其特征在于，各用一根空心针来实行步骤d)的压力平衡和步骤g)的测压，用所述空心针在步骤d)和g)中于不同的位置刺穿气密性封闭该容器的塞子。
13.权利要求11的方法，其特征在于，由所测定的压力以及相应于微生物的数据和样品稀释的数据算出样品中活的和/或活性的微生物的浓度。
14.权利要求13的方法，其特征在于，显示出活的和/或活性的微生物的浓度。
15.一种实施权利要求11-14之一的方法的设备，其特征在于，所述容器(1)基本上呈圆筒形，并由塞子(2)气密性封闭，与塞子无关设置了该容器固定配置的定位面(17)，设置有测压探头部件(12)，它具有与压力传感器(10)相连接的空心针(9)和提供了定位面(20)的定位套筒(18)，这样在应用测压探头部件时，其定位套筒可盖在容器上，并且该空心针在刺穿该塞子时可通过塞子推入，直到该两个定位面(18，20)互相紧贴，这时空心针(9)的尖(21)进入容器中的预定位置。
16.权利要求15的设备，其特征在于，设置有带孔(16，26)的基座(15，25)作为具有环形边缘的圆筒形不透明套筒，容器(1)可插入该基座中，这样所述边缘形成附加于该容器的定位面(17，27)。
17.权利要求15和16之一的设备，其特征在于，压力探头部件(12)、容器(1)和附加的定位面(17，27)的尺寸设计和相互定位要使空心针(9)仅与塞子(2)相接触。
18.权利要求15-17之一的设备，其特征在于，配有装置(22，23，24)的压力分析部件(13)用于由压力传感器所得的压力值和由存储的相应于测定的微生物的类型和样品稀释的数据算出样品中活的和/或活性微生物的浓度值，并输出该计算值。
19.权利要求15-17之一的设备，其特征在于，塞子(2)由耐化学试剂的弹性塑料制成，用该塞子可气密性封闭所述容器(1)，空心针(7，9)可将其刺穿。
本发明涉及一种通式为R
文档编号C12N9/99GK812944
公开日日 申请日期日 优先权日日
发明者伯恩德·弗里茨·波德祖斯, 伯恩德 弗里茨 波德祖斯 申请人:伯恩德·弗里茨·波德祖斯, 伯恩德 弗里茨 波德祖斯}