1)线性化克隆载体制备；
2)插入片段扩增引物设计；
3)插入片段PCR扩增；
4)进行重组反应；
5)反应产物转化、涂板；
6)克隆鉴定。
GC20 bpGC40%60%
1Hieff CloneTM MultiSDNA ()
2Hieff CloneTM MultiS(Hind III6520 min)
(HieffTM Pfu DNA Polymerase Cat No. 10113ES60) PCR
Hieff CloneTM MultiSPCRPCR
PCR DNA (&5kb) DNA
Hieff CloneTM MultiS53 (15 bp20 bp)
40bpPAGETm
图三：第一片段的反向扩增引物和第二片段的正向扩增引物设计示意图
注：如最终引物长度超过40bp，我们推荐您在引物合成时选用PAGE纯化，可提高克隆成功率。计算扩增引物退火温度时，只需计算基因特异性扩增序列的Tm值，载体末端同源序列不应参与计算。
PCR (Taq) A () Cat No. 10113ES60)
PCRHieff CloneTM MultiSPCRPCR
PCRDNA (&5 kb) DNA
*DpnI8520 minDpnI DpnI
Up to 20 &l
5&CE Buffer
Exnase MultiS
Hieff CloneTM MultiSDNA0.03 pmolDNA
= [0.02&]ng (0.03 pmol)
0.51kb2 kb5 kb0.02 & 5000 = 100 ng
0.5 kb0.02 & 500 = 10 ng
1 kb0.02 & 1000 = 20 ng
2 kb0.02 & 2000 = 40 ng
1. 50200 ngDNA/
2. DNA10 ngDNA10 ng
3. DNA1/54 &l
4. pUC19 control vector, linearized (50 ng/&l)Control insert Mix (0.5 kb, 10 ng/&l; 1 kb, 20 ng/&l; 2 kb, 40 ng/&l)5 &l1 &l
20 &l200 &l30 min
4245902 min
900 &l SOCLB3710 min3745 min
&108 cfu/&g&108 cfu/&g(CaCl2106-107 cfu/&g) 5000 rpm3 min100 &l LB
PCR2050 &l LB 1 &lPCR请问沤好的尿用来淋菜会不会增加蔬菜的病害？我的意思是尿在沤制的过程中有害的细菌病毒是多了还是少了？_百度知道
请问沤好的尿用来淋菜会不会增加蔬菜的病害？我的意思是尿在沤制的过程中有害的细菌病毒是多了还是少了？
试过几次用沤好的尿用稀释十倍的量我在阳台种菜，所以怀疑有细菌什么的，但有的时候也发现浇过后有菜苗会死掉
提问者采纳
另外病害感染相对于烧苗的反应一般要慢一点儿你要看具体是什么症状，假如是发病初期是点状斑点或者是病灶可以考虑是菌类感染。如果使用后出现整株萎靡可以考虑是浓度太高
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盐分是沤不去的这种办法不好，呵呵你的苗子死掉是应为尿液中的尿素和盐的含量太高。不是病毒的原因，营养成分全而且长效。阳台种菜最好使用草炭土
这种东西还是当液体肥灌比较好，叶片耐肥差，容易出问题。。。
尿中尿素含量重，所以你得稀释水要多一些，这样才不会死掉
浇多了 渗透不掉 用肥料呀 种子化肥店就有呀
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3秒自动关闭窗口急,配制LB液体培养基时，酵母提取物加2.5g，我加了5g，影响细菌生长吗？_百度知道
急,配制LB液体培养基时，酵母提取物加2.5g，我加了5g，影响细菌生长吗？
该会影响的，建议你还是重新配一下，资料上显示的比例肯定是最适合这种菌生长的，你加多了的话肯定是有影响的
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出门在外也不愁夏季细菌多 宝宝肠胃健康易受影响
夏季细菌多 宝宝肠胃健康易受影响" width="400" src="/uploadfile/0264202.jpg" />高温影响幼儿摄入营养　　夏季酷暑难挡，气温高达35--38℃以上，超过人体的正常体温。在这种季节里人们只能以大量出汗、加快呼吸来维持体温的恒定。但是随着汗液的蒸发，体内的盐、钙、锌等的排出也相应增加，从而造成胃酸的分泌减少，这不仅使幼儿的食欲减低、胃肠的抵抗力下降，而且因为水份丧失多，补充不足，口干舌燥，消化液分泌减少而不愿进食，因而影响在夏日里幼儿营养素的摄入。夏季孩子饮食的注意一、夏季注意补充汤水　　夏天水份流失比较快，随着汗水会有钠、钾以及其它一些矿物质排出，所以夏季幼儿应该多补充汤水，在补充水的时候，建议让幼儿多吃些水果，或者是以汤类来补充，并且最好少量多餐。要注意补充水时，白开水也不能喝多了，过量的水有可能会引起水中毒。二、夏季幼儿需要补充蛋白质　　幼儿身体发育快，蛋白质又是必不可少的，在高温环境中蛋白质的损失变大，分解变快，所以夏天容易出现蛋白质摄入不足的情况。妈妈们应该注意：补充蛋白质最好用牛奶、鸡蛋、豆制品、肉类，建议每天保证适量的牛奶鸡蛋摄入量。三、多吃水果杂粮以补充维生素　　粗粮、杂粮中维生素含量比较多，汗液中损失较多的是维生素c和b1、b2，多食水果针对性补充维生素c，粗粮中的维生素b1比较多，牛奶以及绿叶蔬菜中含有大量的维生素b2.四、幼儿夏季食欲不振，可少食多餐，多变些花样。　　要做到品种多、荤素搭配合理，食物味道经常变换。五、小心食物变质　　夏天食物容易腐烂，病菌就会趁虚而入，所以吃剩的食物要立即放进冰箱;喝剩的奶粉隔一小时以后就不能给孩子喝了;尽可能控制做菜的量，最好给孩子每顿都吃新鲜菜，冰箱中食物吃第二顿时要注意煮透，因为冰箱中也会产生有害菌，只有彻底加温后才可以起到杀菌作用，否则就会引起食物中毒，造成孩子肠胃功能的障碍。为了杀死冷藏食物中的细菌，在次日食用之前，应将食品加热到75℃以上(肉汤必须煮沸3分钟)。六、小心冷饮　　幼儿贪食冷饮就会对娇嫩的胃肠有不好的影响，会使口腔、胃黏膜的血管剧烈收缩，影响局部的血液供给和胃液的分泌，引起腹痛、腹泻和食欲不振等症状。　　因此，父母应注意让幼儿吃冷饮要适量，特别是不要在饭前吃冷饮，以免引起小儿消化紊乱和营养失调。幼儿吃冷饮时，不要大口大口地嚼着吃，以免对牙齿直接刺激，引起牙痛和影响牙的发育。另外，幼儿吃冷饮过多容易导致体重猛增，影响生长发育。七、注意饮食卫生　　要注意培养孩子良好的卫生习惯，防止病从口入。便后要及时洗手，不喝生水，不吃变质食品，生吃瓜果要洗净。另外，随着家用饮水机的普及，由于未进行定期清洗或清洗不彻底，成为儿童夏季腹泻病新的感染源。最后，还要注意灭蝇灭蛆，防止食品污染。一岁以内的幼儿，如果有条件尽量争取母乳喂养。久久健康网温馨提示：上述就是对为何夏季宝宝肠道易坏的介绍，现在应该是有了解了吧，对于宝宝夏季的健康护理是一定要重视的，希望每个宝宝都能健康。（编辑：樊雪娇）
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