感受态是指受体细胞易接受外源DNA爿段并实现其转化的一种生理状态感受态由受体细胞的遗传性状所决定的，受菌龄、外界环境因子的影响cAMP可提高感受态水平一万倍，洏Ca2+存在也可大大促进转化的作用新鲜，幼嫩的细胞是选择做感受态细胞的佳材料

带有外源DNA 的重组质粒，在体外构建后导入宿主细胞，随着细胞的大量复制、繁殖才能够有机会获得纯的重组质粒DNA，该过程称之为转化过程受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl 等化学试劑）的处理后细胞膜的通透性发生变化，能容许外源DNA 的载体分子通过感受态细胞在0℃，CaCl2的低渗溶液中菌细胞膨胀成球形，而转化混匼物中的DNA形成抗DNase（DNA酶）的羟基--钙磷酸复合物并粘附于细胞表面，经42℃短时间热冲击处理可促使细胞迅速收缩，吸收DNA复合物完成转化。

图1 大肠杆菌菌落（来源：百度）

2、大肠杆菌DH5α感受态制备实验步骤：

（1）从-80℃冰箱中取出保种的DH5α菌株，用灭菌的枪头吸取少量保菌液加入至合适的LB液体培养基要不要摇瓶大肠杆菌中在LB固体培养基进行涂板处理，置于37℃培养箱中过夜培养

（2）次日，从LB固体培养基上挑取湿润圆滑的大肠杆菌单菌落，接种于无抗生素的5ml LB液体培养基要不要摇瓶大肠杆菌中37℃下振荡培养过夜，至对数生长后期将该菌悬液以1:100～1:50的比例接种于100ml LB液体培养基要不要摇瓶大肠杆菌中，37℃振荡培养2-3h至OD600＝0.3-0.5左右（注：此步必要时可在显微镜下镜检菌细胞是否形态一致，有无杂菌污染）

（3）在无菌条件下将菌液转移到冰上预冷的离心管中，冰上放置10-30min使培养物冷却至0℃，然后4℃4000rpm/min离心10min；

（4）弃掉上清，倒置1 min以便将培养液流尽；

（6）弃掉上清，并倒置1 min以便最后的培养液流尽；

（7）加入4 ml预冷含15%甘油（已灭菌处理）的0.1 mol/L的CaCl2溶液，轻轻悬浮細胞冰上放置几分钟，即成感受态细胞悬液；

（8）感受态细胞100 μL分装贮存于-80 ℃保存备用。

（1）为制备转化效率较高的感受态细胞可將保种液用于制作感受态细胞。

（2）注意挑取LB固体培养基上湿润圆滑的克隆，以防挑取杂菌

（3）进行二次培养的时候，摇床转速应选擇较低转速空载转速在100-150 rpm/min左右。

（4）制作感受态的过程中尽量冰上操作操作的动作尽量轻柔，稳健；试验中所用的试剂转子，离心机需要提前预冷

文章来源：每日生物评论

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