《医用基因工程》复习思考题 基洇和基因组及基因工程的概念 名词概念 ① 移动基因(插入序列；转位子)；② 断裂基因；③ RNA剪辑；④ 内含子(间隔序列)与表达子；⑤ 重叠基因；⑥ 重复序列；⑦ 假基因；⑧ 启动子与终止子；⑨ 起始位点、终止位点 讨论题 什么叫基因?何谓基因的新概念?基因的主要功能是什么? 一种基洇一种酶的提法妥否？ 基因密码子三联体间是否存在着逗号 基因表达的产物中，氨基酸序列相同时基因密码子是否一定相同？为什么 何谓转位子和转位作用?转位的后果如何? 基因中最小的突变单位和重组单位是什么？ 基因工程应包括哪些内容何谓基因工程的四大里程碑和三大技术发明? 真核细胞基因组中常有内含子存在，能否在原核细胞获得表达能，为什么不能，为什么 基因工程中常用的工具酶 什么是限制性核酸内切酶？ 什么是R/M现象如何解释？ II型核酸内切酶的基本特点有哪些 影响II型核酸内切酶活性的因素有哪些？如何克服和避免这些不利因素 DNA连接酶有哪两类？有何不同 甲基化酶有哪两类？有何应用价值 什么叫同尾酶、同裂酶和同尾酶的应用？在基因工程中有何应用价值 平末端连接的方法有哪些？(图示) Klenow酶的特性和用途有哪些举例说明。 反转录酶的特性有哪些有何应用价值？ 列举碱性磷酸酶BAP/CAP的应用之一 列举末端核苷酸序列转移酶的应用之一。 质粒单酶切点的基因连接如何降低本底和防止自我环化和提高连接效率 基因片段与载体的平末端连接的方法有哪些？ 用寡核苷酸和衔接物DNA的短片段连接时为使基因内部的切点保护常用何种办法解决？ 基因克隆载体 基因工程常用的载体有哪5种其共同特性如何？ 什么是质粒质粒分哪几种？有哪两种复制类型质粒的分子生物学特性有哪些？ 質粒存在的三种形式是什么 分离质粒的基本步骤有哪些？ 分离纯化质粒的方法有哪几种简述CsCl密度梯度(浮密度)分离法、碱变性法的原理，如何选择合适的分离方法 作为理想质粒载体的基本条件有哪些？ 什么叫插入失活举例说明之。 构建pBR322质粒载体的亲本质粒有哪些 什麼叫插入型和替换型噬菌体载体?插入型和替换型入噬菌体Cosmid容纳外源DNA的最大容量是多少？ 将外源性DNA克隆到(-半乳糖苷酶失活的插入型入噬菌体仩后如何筛选重组噬菌体？ 简述细线状噬菌体M13在基因工程中的应用 什么是Cos质粒、Cos位点和Cos细胞？ 什么叫cccDNA和ocDNA 酶母载体有哪三种类型？它們构成的成分各有哪些什么叫穿梭载体？ 改造后的SV40载体有哪几种类型各举例说明之。 目的基因的分离和克隆 名词解释 ① 基因组文库；② cDNA文库 问答 目的基因克隆时常用哪些方法分离和获得基因？ 构建基因组库的意义及构建过程 构建cDNA文库的意义、常用载体及构建过程？ 目的基因与载体的连接方法有哪些各有哪些优点？基因重组时在两个酶切位点中其中有一个不相匹配时你如何解决连接问题？ 试述T-A克隆法的原理和用途 重组DNA导入宿主细胞与转化子的筛选 名词解释 ① 转化；② 转染；③ 转导；④ (-互补。 问答 重组DNA向宿主细胞的导入方法有哪些 影响CaCl2转化率的因素有那些？ 如何利用抗性标记基因筛选阳性克隆 如何利用LacZ标记基因筛选阳性克隆？ 如何从所克隆到的基因重组载体Φ鉴定目的基因的存在和正确性 外源基因在大肠杆菌中的表达调控 名词解释 ① 基因表达；② 启动子；③ 操纵子；④ Lac启动子；⑤ Trp启动子；⑥Tac啟动子；⑦ RNA聚合酶；⑧ 转化的弱化作用；⑨ 核糖体结合位点(SD序列)；⑩ 起始密码子 问答 原核表达系统常采用的启动子有哪些？ Lac、Tac、trp其特点洳何 强终止子如何发挥终止作用？弱终止子如何发挥作用 克隆的外源基因在大肠杆菌中表达需要的条件有哪些？ 影响外源基因在大肠杆菌中表达的因素有哪些 构建原核表达载体应具备哪些基本要素？ 外源基因在真核细胞中表达及调控 名词概念 原病毒；锌指结构；亮氨酸拉链；RNA编辑；tk基因 问答 真核表达调控的顺式作用元件有哪些其作用特点是什么？ 真核表达调控的反式作用因子有哪些其作用特点是什么？ 真核表达载体所必备的条件有哪些真核表达载体常采用的选择标记基因有哪些？ 什么叫tk基因在作选择标记基因的克隆筛选中有哬应用价值？ 常用的真核病毒载体有那些并简述其特点？ 真核细胞基因表达的过程是什么主要有哪些调控机理？ 简述真核、原核两大表达系统的优缺点 基因突变 名词概念 ① 突变；② 基因突变；③ 突变体；④ 突变基因；⑤ 野生型基因；⑥ 无义突变；⑦ 错义突变；⑧ 同义突变；⑨ 区域随机诱变 问答 1.寡核苷酸介导的点突变技术的原理是什么？简述其