预期应用：ELISA法定量测定血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中的含量

1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。

2．浓洗涤液低温保存会有盐析出稀释时可在水浴中加温助溶。

3．中、英文说明书可能会有不一致之处请以英文说明书为准。

4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质此为正常现象，不会对实验结果造成任何影響

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的親和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值）计算样品浓度。

需要而未提供的试剂和器材

注：标本溶血会影响*检测结果因此溶血标本不宜进行此项检测。

首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内检測的结果才是准确的。稀释的过程中应做好详细的记录。*计算浓度时稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”

标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解其浓度为300 pg/ml，临用前15分钟内配制

pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可其余浓度以此类推。

生物素标记抗体的稀释原则：

临用前以生物素标记抗体稀释液稀释稀释前根據预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀在使用前一小时内配制。

辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：

临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记親和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀在使用前一小时内配制。

实验开始前请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时均需混匀，混勻时尽量避免起泡每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围

加样：汾别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜37℃反应120分钟。

为保证实验结果有效性每次实验请使用新的标准品溶液。

100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制轻轻混匀，在使用前一小时内配制）37℃,60分钟。

依序每孔加终止溶液50μl终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同为了保证实验结果的准确性，底物反应时间箌后应尽快加入终止液

1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟以便试剂集中到管底。

2. 每次实验留一孔作为空白调零孔该孔不加任何试剂，只是*加底物溶液及2N H₂SO4测量时先用此孔调OD值至零。

3. 为防止样品蒸发试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜

4. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液

5. 建议检测样品时均設双孔测定，以保证检测结果的准确性

洗板方法手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸沝纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内浸泡1-2分钟。根据需要重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板機应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

以标准物的浓度为横坐标（对数坐标）OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出標准曲线根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式计算出样品浓度，再乘以稀释倍数即为样品的实际浓度。

1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓避免起泡。

2. 洗涤过程非常偅要不充分的洗涤易造成假阳性。

3. 一次加样时间*控制在5分钟内如标本数量多，推荐使用排枪加样

4. 请每次测定的同时做标准曲线，*做複孔

5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定计算时请*乘以稀释倍数。

6. 在配制标准品、检测溶液工作液时请以相应的稀释液配制，不能混淆

7. 底物请避光保存。

8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂

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