【摘要】:目的构建重组小鼠白細胞介素-4(rmIL-4)原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,纯化目的蛋白并鉴定方法将优化后的小鼠IL-4cDNA片段克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,获得重组质粒pET32/rmIL-4,转入BL21(DE3)中經IPTG诱导表达得到包涵体。经复性处理后,依次用阴离子交换柱和分子筛纯化蛋白对纯化得到的蛋白用Western blot检验免疫学特异性,用mIL-4生长依赖性细胞株CTLL-2增殖实验和动物实验测定其生物学活性。结果经酶切和测序证实重组质粒pET32/rmIL-4构建成功诱导得到的包涵体用3mol/L盐酸胍溶液洗涤后溶于加有β-巰基乙醇的7mol/L盐酸胍溶液中变性,在pH9.5的条件下梯度透析复性。纯化出的蛋白经Western blot鉴定,能与抗小鼠IL-4抗体特异性结合;经细胞和动物实验鉴定,rmIL-4蛋白具有苼物学活性,能刺激mIL-4生长依赖性细胞株CTLL-2增殖,使小鼠体内细胞因子发生从TH1到TH2的漂移结论成功制备了高纯度、具有生物学活性的小鼠IL-4,为进一步研究其生物学功能提供了条件。
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CTGF-整合素β1受体信号途径在PASMC增殖、遷移和细胞外基质沉积中的作用,细胞质基质,基质金属蛋白酶,g蛋白偶联受体,雌激素受体,基质效应,细胞外基质,肾上腺素能受体,toll样受体,受体阻滞劑
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