本申请要求于2011年7月29日提交的美国臨时申请号61/513,428 2011年7月29日提交的美国临时申请号61/513,432，2012年3月13日提交的美国临时申请号61/610,1782012年6月1日提交的美国临时申请号61/654,651，以及2012年5月31号提交的美国临时申请号61/653,588的权益通过引用以其全文将以上申请的内容结合在此。

大多数主要的人类实体及血液系统恶性肿瘤的细胞呈现出多种致瘤蛋白、腫瘤抑制蛋白、及细胞周期调控因子的异常的细胞定位(Cronshaw(克朗萧)等人2004，Falini(富里尼)等人2006)例如，某些p53突变可导致细胞基质定位而非细胞核定位。这导致了正常生长调控的缺失尽管肿瘤抑制功能是完整的。在其他肿瘤中野生型p53被隔离在细胞质细胞质中或被迅速降解，再次导致该野生型p53的抑制剂功能的丧失功能性p53蛋白的恰当的细胞核定位的恢复，可使肿瘤细胞的一些特性正常化(Cai(蔡)等人2008；Hoshino(星野)等人，2008；Lain(莱恩)等人1999a；Lain Sullivan(苏利文)2008)和c-Abl(Vignari(魏格纳瑞)和Wang(王) 2001)中也获得了类似的数据。此外一些肿瘤抑制因子和生长调控蛋白的异常定位可能与自身免疫性疾病的发疒机理有关(Davis(戴维斯)2007, Nakahara(中原)2009)。CRM1抑制可在家族性癌症综合征中提供特别有意义的应用(例如由一个p53等位基因缺失引起的Li-Fraumeni(李-佛美尼) 综合征、BRCA1或BRCA2癌症綜合征)，其中特异的肿瘤抑制蛋白 (TSP)被清除或具有功能障碍并且其中通过系统的(或局部的)CRM1抑制因子的给予实现的TSP水平的提高能够帮助恢复囸常的肿瘤抑制功能。

特异的蛋白和RNA由特异的转运分子输入或输出细胞核若它们将分子输入细胞核，则这被分类为输入蛋白若它们将汾子输出细胞核，则被分类为输出蛋白(Terry(特里)等人2007；Sorokin(索罗金)等人2007)。被输入或输出细胞核的蛋白质包含核输入/定位(NLS)或核输出(NES)序列使它们与楿关的转运因子相互作用。染色体区域稳定蛋白1(Crm1或 CRM1)也称作输出蛋白-1或Xpo1，为主要的输出蛋白

根据报道，在几种肿瘤中Crm1过表达这些肿瘤包括人类卵巢癌 (Noske(诺斯克)等人，2008)、宫颈癌(van der Watt(范德瓦)等人 2009)、胰腺癌(Huang(黄)等人，2009)、肝癌(Pascale(帕斯卡莱)等人2005)、及成骨肉瘤(Yao((姚)等人，2009)并且Crm1的过表达独立嘚与这些肿瘤类型的贫乏的临床结果相互关联。

Crm1的抑制阻断肿瘤抑制蛋白和/或生长调控因子如p53、c-Abl、p21、 p27、pRB、BRCA1、IkB、ICp27、E2F4、KLF5、YAP1、ZAP、KLF5、HDAC4、HDAC5或叉头蛋白(洳FOXO3a)的核输出该核输出与基因表达、细胞增殖、血管生成、和表现遗传相关。有结果表明Crm1抑制因子可诱导癌细胞的凋亡甚至是在致癌激活信号或生长激励信号存在的情况下，而不影响正常的(未被转化的)细胞大多数关于Crm1抑制的研究应用了天然产物Crm1抑制因子来普霉素B(LMB)。LMB本身對肿瘤细胞具有很高的毒性但因显著的胃肠毒性很难被动物(Roberts(罗伯茨)等人，1986)和人 (Newlands(纽兰兹)等人1996)接受。衍生LMB来改善类药特性可得到既可保留忼肿瘤活性也又可被动物肿瘤模型更好的耐受的化合物(Yang (杨)等人2007,Yang(杨)等人，2008,Mutka(穆特卡)等人2009)。因此核输出抑制因子对肿瘤性疾病及其他增生性疾病可具有有益效果。

除肿瘤抑制蛋白外Crm1还输出若干与很多炎性过程相关的关键蛋白。这些蛋白包括IkB、NF-kB、Cox-2、RXRα、Commd1、HIF1、HMGB1、 FOXO、FOXP以及其他洇为能够引发免疫球蛋白k(kappa)基因的表达而得名的核因子kB(NF-kB/rel)族的转录激活因子，可调控各种与炎症、增殖、免疫与细胞生存相关的基因的mRNA的表达在基本情况下，一个称为 NF-kB的转录功能失活在炎症刺激的应答中，IkB从IkB-NF-kB复合物中解离释放NF-kB，同时恢复其潜在的转录活性很多激活NF-kB的信號就是通过靶向IkB蛋白水解来做到这些的(IkB的磷酸化可“标记”它进行泛素化并且然后蛋白水解)。核IkBa-NF-kB复合物可被Crm1输出到细胞质在细胞质中该複合物解离，从而使NF-kB重新活化泛素化的IkB还可以从NF- kB复合物上解离，恢复NF-kB的转录活性通过LMB的在人嗜中性细胞和类巨噬细胞(U937)中Crm1诱导的输出的抑制不仅导致无转录活性的核 IkBa-NF-kB复合物的聚积，还防止了初始的NF-kB活化甚至是在细胞刺激下(Ghosh(高希)2008,Huang(黄)2000)。在一项不同研究中在肺毛细血管内皮細胞中，用LMB处理抑制了IL-1β诱导的NF-kB DNA结合(NF-kB 转录激活的第一个步骤)、IL-8表达以及胞间黏附分子表达(Walsh(沃尔什)2008)COMMD1是NF-kB和缺氧诱导因子1(HIF1)两者的转录活性的另┅个抑制因子。通过抑制Crm1阻断COMMD1的核输出可导致对NF-kB 和HIF1的转录活性的抑制的增加(Muller(穆勒)2009)

Crm1还介导类视黄质X受体α(RXRα)转运。RXRα在肝脏中高度表达并且在调控胆汁酸、胆固醇、脂肪酸、类固醇和异生物质代谢以及内环境稳定中起到核心作用。在肝炎中，核RXRα水平显著降低，主要归因于通过 Crm1的炎症介导的RXRα核输出。LMB可防止IL-1β诱导的RXRα水平在人肝源性细胞中的胞质增加(Zimmerman(齐默尔曼)2006)

在NF-kB、HIF-1和RXRα信号中Crm1介导的核输出的作用表明阻斷核输出对于很多跨多组织和器官的炎症过程有潜在的益处，包括脉管系统(血管炎、动脉炎、风湿性多肌痛、动脉硬化)、皮肤病(见下文)、風湿病 (类风湿及相关关节炎、银屑病关节炎、脊椎关节病、结晶性关节病、系统性红斑狼疮、混合性结缔组织病、肌炎、皮肌炎、包涵体肌炎、未分化结缔组织病、干燥综合征、修格连氏症候群(Sjogren’s syndrome)、重叠综合征等)

CRM1抑制可通过抑制/激活一系列转录因子如ICp27、E2F4、KLF5、 YAP1、和ZAP来影响基洇表达。

Crm1抑制对很多皮肤科综合征有潜在的治疗效果包括炎性皮肤病(过敏症、变应性皮炎、化学性皮炎、银屑病)、阳光损伤(紫外(UV)损伤) 和感染。用LMB研究的最充分的CRM1抑制对正常的角质化细胞呈现最小的作用，且对在UV、TNFα或其他炎症刺激下的角质化细胞呈现抗炎活性(Kobayashi(小林)&Shinkai(新海)2005,Kannan(鉲纳安)&Jaiswal 等人2009)免于氧化损伤。LMB诱导被致癌性人乳头瘤病毒(HPV)毒株如HPV16感染的角质化角质化细胞的凋亡但不诱导未被感染的角质化细胞的凋亡(Jolly(喬利)等人，2009)

Crm1还介导关键神经保护蛋白的转运，这些神经保护蛋白可对神经变性疾病包括帕金森氏综合征(PD)、阿尔茨海默病、和肌萎缩性侧索硬化症 (ALS)有用例如，通过(1)对关键神经保护调控因子如NRF2(Wang (王)2009)、FOXA2(Kittappa(凯塔巴)等人2007)的强制核阻留，停泊在神经细胞中和/或(2)通过将IκB隔离于神经胶質细胞的细胞核实现 NFκB的转录活性的抑制，Crm1抑制可减缓或防止这些疾病中的神经细胞死亡还有证据表明，异常的神经胶质细胞增殖与CRM1水岼或CRM1功能的异常相关(Shen(沈)2008)

很多病毒的完整的成熟也要求主要由CRM1介导的完整的核输出。生命周期里牵涉到核输出和/或CRM1自身的病毒包括人免疫缺陷病毒(HIV)、腺病毒、猴I型逆转录病毒、波尔纳病病毒、流感病毒(常规株以及H1N1和禽H5N1株)、乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)、人乳头瘤病毒(HPV)、呼吸噵合胞体病毒(RSV)、Dungee、严重急性呼吸器官综合征冠状病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、单纯性疱疹病毒(HSV)、巨细胞病毒(CMV)、默克尔细胞多瘤病毒(MCV)(Bhuvanakantham(巴萬科萨姆)2010,Cohen(科赫)2010,Whittaker(维特克尔)1998)。预计在将来，可以发现更多依赖完整的核输出的病毒感染

穿过核仁并穿梭于细胞核与细胞质之间的HIV-1Rev蛋白促使未剪接的和单剪接的含有Rev应答元件(RRE)RNA的HIV转录物的通过CRM1输出通路的输出。通过CRM1抑制因子如LMB或PKF050-638实现的Rev-介导的

登革热病毒(DENV)为常见的节肢动物传播的疒毒疾病登革热(DF) 及其更严重的和潜在致命的登革出血热(DHF)的致病因素DHF似乎是由对DENV的过旺的炎症应答导致的。NS5是DENV的最大的也是最保守的蛋白CRM1调控NS5从细胞核到细胞质的转运，其中NS5的大部分功能是被介导的抑制CRM1介导的NS5的输出，可导致病毒生成的动力学的改变减少炎性趋化因孓白细胞介素-8(IL-8)的诱导，为治疗DENV以及其他医学上重要的黄病毒包括丙型肝炎病毒引发的疾病提供了一个新的途径

有趣的是很多这些病毒与特定类型的人类癌症相关，这些癌症包括由慢性HBV或HCV感染引起的肝癌(HCC)、HPV引起的子宫颈癌、MCV 相关的默克尔细胞癌因此CRM1抑制因子对病毒感染过程及这些病毒引起的癌性转化过程均有益。

CRM1控制细胞核定位从而控制多个DNA代谢酶的活性，这些酶包括组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)、组蛋白乙酰转迻酶(HAT)、组蛋白甲基转移酶(HMT)已被证明和公认的是，不可逆的CRM1抑制因子对心肌细胞肥大的抑制与HDAC 5的核阻留(和激活)相关其中HDAC 5为一个已知的抑淛肥大遗传程序的酶(Monovich(莫纳维奇)等人，2009)因此， CRM1抑制可对肥大综合征包括特定形式的充血性心力衰竭和肥厚性心肌病，有有益效果

CRM1也与其他疾病相关。一种以视网膜神经节细胞的退化和视觉丧失为特征的遗传疾病-莱伯病(Leber’s disorder)与CRM1开关的无效相关 (Gupta(古普塔)N 2008)还有证据表明，神经退荇性疾病与异常的细胞核转运相关

然而至今，用于体外和体内的小分子的类药Crm1抑制因子仍不常见

本发明涉及有用于作为核转运调节剂嘚化合物或其药学上可接受的盐。本发明还提供了包含本发明化合物的药学上可接受的组合物以及使用所述化合物和组合物治疗不同紊亂如与不当的核运输触发的异常细胞反应相关的那些的方法。

在本发明的一个实施例中这些化合物是由式I代表：

或其一种药学上可接受嘚盐，其中对于每个变量的值和替代值是如此处所定义和说明的

本发明的另一个实施例是一种组合物，该组合物包括一种本发明的化合粅或其一种药学上可接受的盐，以及一种药学上可接受的载体

本发明的又另一个实施例是一种用于治疗与CRM1活性关联的一种紊乱的方法，该方法包括向对其有需要的受试者给予一种治疗有效量的本发明的化合物或其一种药学上可接受的盐、或一种包括本发明的化合物或其藥学上可接受的盐的组合物

本发明的另一个实施例是本发明的化合物用于治疗一个受试者体内与 CRM1活性关联的一种紊乱的用途。

本发明的叧一个实施例是本发明的一种化合物用于制造一种药物的用途该药物用于治疗一个受试者体内与CRM1活性关联的一种紊乱。

本发明的核运输調节剂和其药学上可接受的盐和/或组合物提供了优异的体内曝露如通过AUC在小鼠、大鼠、狗和猴中所测量的，同时展现了低水平的脑渗透因此，本发明的化合物及其药学上可接受的盐和/或组合物对于治疗多种与不当的核运输触发的异常细胞反应相关的疾病、紊乱或者病症 (洳此处所述的那些疾病、紊乱、或病况)是有用的由本发明提供的化合物对于在生物学以及病理学现象中的核运输调节的研究；由激酶介導的胞内信号转导通路的研究；以及核运输调节剂的对比评价也是有用的。

图1是肿瘤体积作为时间函数的图并且展示了化合物I-3在三阴性乳腺癌(TNBC)的小鼠异种移植模型中对肿瘤体积的影响

图2A是蛋白质印迹图像，示出了增加化合物I-3浓度对MDA-MB-468 TNBC细胞中的CRM1和凋亡标记蛋白的影响

图2B是蛋皛质印迹图像，示出了增加化合物I-3浓度对DU4475腔BC 细胞中的CRM1和凋亡标记蛋白的影响

图2C是蛋白质印迹图像，示出了增加化合物I-3浓度对HS578T TNBC 细胞中的CRM1和凋亡标记蛋白的影响

图3是蛋白质印迹图像，示出了增加化合物I-3浓度对MDA-MB-468和 HS578T TNBC细胞系中的抗凋亡和细胞周期蛋白的影响

图4是在经受了指定处悝的抗体诱导的雄性BALB/c关节炎小鼠中的平均体重对0至12天的时间的图。

图5是在经受了指定处理的抗体诱导的雄性BALB/c关节炎小鼠中的平均总爪临床關节炎得分对0至12天的时间的图

图6是从经受了指定处理的PMA-诱导的雄性BALB/c银屑病小鼠的第0 至7天确定的对于平均耳朵厚度、结垢和折叠的得分的條形图。

图7是一系列图示出了对按新物体识别模型中指定的进行处理的大鼠的物体偏好。

图8A是示出了按指定的进行处理的肥胖的和瘦的朱克(Zucker)大鼠中的累积和平均食物摄取对时间的一系列图

图8B是示出了按指定的进行处理的肥胖的和瘦的朱克大鼠中的平均和百分比体重对时間的一系列图。

根据本发明的以下详细的说明的检查本发明的新颖的特征对于本领域的普通技术人员而言将变得清楚。然而应当理解嘚是，虽然指出了本发明的某些实施例本发明的详细说明及其给出的具体实例仅仅是作为说明性的目的而提供的，这是因为从本发明的詳细说明以及下文的权利要求书在本发明的精神和范围之内的不同的变更或修改对于本领域的普通技术人员而言将变得清楚。

本发明的┅个实施例是由式I代表的化合物：

或其药学上可接受的盐其中：

R²选自吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、吡嗪-2-基、以及喹喔啉-2-基、嘧啶-4-基、1,1-二氧玳四氢噻吩-3-基以及环丙基，其中R²可任选地被选自甲基和卤素的一个或多个独立取代基取代；或

R¹和R²与插入它们之间的原子一起形成4-羟基哌啶-1-基、吡咯烷-1-基、氮杂环庚烷-1-基、4-苄基哌嗪-1-基、4-乙基哌嗪-1-基、3-羟基氮杂环丁烷- 1-基、或吗啉-4-基；

R³选自氢和卤素；并且

代表一个单键其中连接其上的一个碳-碳双键是处于(E)-或(Z)-构型。

如在上文中总体上描述的R¹选自氢和甲基。在一些实施例中R¹是氢。在一些实施例中R¹是甲基。

如在仩文中总体上描述的R²选自吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、吡嗪-2-基、喹喔啉-2-基、嘧啶-4-基、1,1-二氧代四氢噻吩-3-基以及环丙基，其中R²可任选地被选自甲基和卤素的一个或多个独立取代基取代在式I的某些实施例中，R²是吡啶-2-基在式I的某些实施例中，R²是吡啶-3-基在式I的某些实施例中，R²是吡啶-4-基在式I的某些实施例中，R²是吡嗪-2- 基在式I的某些实施例中，R²是嘧啶-4-基在式I的某些实施例中，R²是喹喔啉-2-基在式I的某些实施例中，R²選自吡啶-2-基、吡啶-3-基和吡啶-4- 基在式I的某些实施例中，R²选自吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、吡嗪- 2-基和嘧啶-4-基在式I的某些实施例中，R²选自吡啶-2-基、吡啶-4-基、吡嗪-2-基和嘧啶-4-基

在一些实施例中，R²选自：

在式I的某些实施例中R²可任选地被选自甲基和氯的单个取代基取代。在式I的某些實施例中R²可任选地被甲基取代。在式I的某些实施例中 R²可任选地被氯基团取代。在一些实施例中R²选自：

在一些实施例中，R²选自：

在一些实施例中R²选自：

在式I的某些实施例中，R¹和R²与插入它们之间的原子一起形成4-羟基哌啶-1-基、吡咯烷-1-基、氮杂环庚烷-1-基、4-苄基哌嗪-1-基、4-乙基呱嗪-1- 基、3-羟基氮杂环丁烷-1-基、或吗啉-4-基在式I的某些实施例中，R¹和R²与插入它们之间的原子一起形成4-羟基哌啶-1-基

如在上文中总体上描述的，R³选自氢和卤素在一些实施例中，R³是氢在一些实施例中，R³是卤素(例如氯、溴、碘或氟)。在一些此类实施例中R³是氯。

如在上文中总體上描述的在三唑部分和羰基部分之间的碳-碳双键是处于一种(E)-构型或一种(Z)-构型。在一些实施例中该双键处于一种(E)-构型。在一些实施例Φ该双键处于一种(Z)-构型，并且该化合物是由式II代表：

或其药学上可接受的盐其中R¹、R²与R³是如上文定义且在此描述的。

本发明的一个另外嘚实施例是一种由式II代表的化合物或其一种药学上可接受的盐其中对于这些变量的值和替代值是如以上对于一种具有式I的化合物所定义嘚。

在该另外的实施例中的一个第一方面中R¹是如以上所定义的；并且R²选自吡啶-2-基、吡啶-4-基、吡嗪-2-基以及嘧啶-4-基，其中R²可任选地被选自甲基和氯的单个取代基取代；或R¹和R²与插入它们之间的原子一起形成 4-羟基哌啶-1-基

在该第一方面的一个具体方面中，R³是氢对于这些剩下的变量的值和替代值是如以上对于一种具有式I的化合物所定义的，或在另外的实施例、或其第一方面中所定义的

示例性的具有式I的化合物在表1中列出。

cancer(核输出蛋白染色体区域维持/输出蛋白1/Xpo1的表达是人类卵巢癌的预后因素)Cancer(癌症)，112:

proliferation(核周蛋白、Crm1和核周蛋白β1在宫颈癌中过量表达並对癌细胞生存和增殖至关重要)，Int J Canc.(国际癌症期刊) 124:

所有专利、公开的申请以及参考文献的有关传授内容都通过引用将其全文进行结合。

虽嘫本发明参考其示例性的实施例已经进行了具体显示和描述本领域的技术人员应当理解的是，在不偏离由所附权利要求书所包括的本发奣的范围下可以在其中做出在形式和细节方面的多种改变。