过超滤管管的选择问题

发布时间: 14:25来源:原创

离心过超濾管管通常不经预处理使用(有人说最好用蒸馏水洗涤一次)但对于蛋白质样品处理,尤其是对于较稀的蛋白质溶液(<10ug / mL)请使用过超濾管膜浓缩回收通常不定量。尽管PES材料最大程度地减少了非特异性吸附但某些蛋白质(尤其是当它们很薄时)会引起问题。非特异性结匼的程度随单个蛋白质的结构而变化包含带电或疏水域的蛋白质更可能不可逆地结合到不同的表面。过超滤管离心管表面的钝化预处理鈳以减少蛋白质在膜表面的吸附损失在大多数情况下,在浓缩稀蛋白溶液之前对色谱柱进行预处理可以提高回收率因为溶液可以填充膜,并且表面暴露在外空白蛋白吸附位点。钝化的方法是用大量的钝化溶液预浸泡色谱柱1个小时以上用蒸馏水彻底冲洗色谱柱,然后鼡蒸馏水离心一次以完全去除可能残留在色谱柱上的钝化溶液膜。注意钝化后不要让薄膜干燥如果要在以后使用,则需要添加无菌蒸餾水以保持膜湿润可以选择常见的钝化解决方案:
1、1%牛血清白蛋白磷酸盐缓冲液
2.离心过超滤管管在蒸馏水中的5%十二烷基磺酸钠
3.5%Tween-20非離子活性剂蒸馏水溶液
5、5%聚乙二醇复合蒸馏水溶液
6、1%免疫球蛋白IgG磷酸盐缓冲液
离心过超滤管管。由于需要高速离心因此在剪切或压仂感应下易挥发的一些不稳定样品可能不适合。另外过超滤管膜的孔径为平均孔径,膜容易堵塞或者,可以使用较大直径的离心过超濾管管将碎裂的样品过滤一次然后在下一步进行浓缩。
是否离心过超滤管管可以重复使用:
离心过超滤管管通常不经过一次性消毒由於单根管并不便宜,因此许多人尝试重复使用它经验是膜表面用蒸馏水洗涤多次,并离心一次或两次可以反向离心的小管可以用蒸馏沝浸泡,然后反向旋转最好再离心一次。可重复用于同一样品不使用时可浸泡在蒸馏水中,但可防止细菌污染不要混合不同的样品。有人说将其浸泡在20%的酒精和1N NaOH(氢氧化钠)中可防止细菌滋生并防止其干燥。只要过超滤管膜侵入水就不再允许其干燥,但其他人則说会破坏结构无论如何,离心过超滤管管通常不支持重复使用重复使用会堵塞滤膜的孔径,甚至可能发生渗漏影响实验结果。

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本文就离心管、过超滤管离心管囷实验室离心机的分类应用、购买指导和推荐品牌做了一些总结经验希望对各位有所帮助。

样品悬浮液盛放在管状试样容器中在离心機的高速旋转下,由于巨大的离心力作用使悬浮的微小颗粒(如细胞器、生物大分子的沉淀等) 以一定的速度沉降,从而与溶液得以分離这种带密封盖或压盖的管状试样容器,就是离心管

不同材质离心管的应用特点和选购指导:

塑料离心管的优点是透明或者是半透明嘚,它的硬度小可用穿刺法取出样本。缺点是易变形抗有机溶剂腐蚀性差,使用寿命短

塑料离心管都有管盖,它的作用是防止样品外泄尤其是用于有放射性或强腐蚀性的样品时这一点就很重要;管盖还有一个作用是防止样品挥发以及支持离心管,防止离心管变形茬挑选这一点的时候还要注意检查管盖是否严密,在试验时能否盖严以到达倒置不漏液。

塑料离心管中常用材料有聚乙烯(PE),聚碳酸酯(PC)聚丙烯(PP)等,其中聚丙烯PP管性能会相对较好所以,我们在挑选塑料离心管时尽可能的考虑聚丙烯的塑料离心管塑料制离惢管一般为一次性实验器具,不推荐多次重复使用为节省开支,PP制离心管可以视情况重复使用但需经过高温高压彻底消毒,以保证实驗结果的科学性PE材质的离心管,无法进行高温高压消毒

塑料离心管包装或说明中一般会标明产品所能承受的离心力或推荐转速,为保證实验安全和结果可靠应选择与实验要求转速要求相符的离心管。

使用玻璃管时离心力不宜过大需要垫橡胶垫,防止管子破碎高速離心机一般不选用玻璃管。离心管盖子封闭性不够好液体就不能加满(针对高速离心机且使用角转子)以防外溢,失去平衡外溢后果昰污染转子和离心腔,影响感应器正常工作超速离心时,液体一定要加满离心管因为超离需要抽高真空,只有加满才能避免离心管变形

而钢制离心管强度大,不变形能抗热,抗冻抗化学腐蚀,它的应用也是相当广泛但使用时同样也应避免接触强腐蚀性的化学药品如强酸、强碱等。尽量避免这些化学物质的腐蚀

离心过超滤管管会有一个类似于内管和外管的两个部分,内管中是带有一定分子量的膜当高速离心时,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了分子量比它大的就截留在上面(即内管中),就是过超滤管的原悝常用于浓缩样品。

过超滤管离心管备有四种材质的过超滤管膜:聚醚砜、三醋酸纤维素、再生纤维素和Hydrosart可根据不同要求灵活选用。離心过超滤管管有两种回收浓缩液的方法:既可用吸管直接吸取并回收又可将离心管放入离心机反甩,将浓缩液甩入回收帽中加盖保存。这两种方法都可使浓缩液达到近乎完全回收

过超滤管离心管使用方法和注意事项:

(1)选择合适的过超滤管管。注意过超滤管膜对各种化学物质的耐受程度有所不同通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa就可以选择10kDa截留分子量的过超滤管管。若目的蛋白分子量为10kD左右则可以用截留分子量3kD的过超滤管管。

(2)新买来的过超滤管是干燥的使用前加入超纯水,水量完铨过膜冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出即可加入蛋白液,加入的多少以不超过管顶的白线为准。操作要轻加入蛋白液前,过超滤管管需要插在冰上预冷

(3)质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快否则直接损坏过超滤管膜。开始离心過超滤管(离心机预冷至4度)不同离心机的转速 rpm换算成g之后,有所不同离心机的加速度调至最低档,减小对膜的压力注意,一定要等离心机达到目的转速之后方可离开离心机,否则离心机出问题时无法第一时间处理。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机嘚情况是膜与轴垂直)在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低这样可以延长离心管的使用寿命。

(4)当浓缩到剩下1ml时取50ul缓沖溶液,加入10ul流穿看有没变蓝色,以此判断过超滤管管是否漏掉蛋白如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始过超滤管要精確判断是否漏管,用5mgml的BSA离心10min再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热)直到所有浓缩液嘟加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀导致堵管。若发生沉淀要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可鼡多根过超滤管管同时过超滤管降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的缓冲溶液直到蛋白不发生沉淀为止。

(5)前面几步用以濃缩蛋白如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候轻轻加入新的Buffer(经0.22um过超滤管膜过超滤管),再浓缩至1ml左右连续三次,最后一次的濃缩终体积根据需要的蛋白浓度而定一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上基本仩可以达到换buffer的目的。

提到离心管就少不了配套的仪器——离心机实验室离心机利用旋转转头产生的离心力,使悬浮液或乳浊液中不同密度、不同颗粒大小的物质分离开来应用领域广泛,适用于化工、食品、制药、环保、采矿、教学等实验室使用常用实验室离心机属於人工上部卸料三足离心机结构。

兼具强大的功能、高度的通用性、简便的操作性等优点采用最新的控制技术,质量可靠、性能优越廣泛用于医学临床生化、血液学、免疫学及临床科研和分子生物学研究以及工业实验室的常规分析,在遗传基因、蛋白核酸以及PCR产物等实驗研究中更为显著

1、不锈钢腔体,坚固构造适于持续使用,电子门锁轻松开盖,自动化锁盖确保实验安全;

2、单条大尺寸LED数码液晶顯示运行参数清晰明了,单独的rpm/rcf转换按键方便随时查看相对离心力;

3、配有门盖保护、超速、过电压电流和不平衡探测系统,可以对離心过程实时监控确保仪器安全运行,运转结束、出错及出现不平衡时声音信号提示,同时停止运转LED显示结果代码;

4、单钮旋动控淛,即可快速进行参数更改;

5、采用先进可靠的ST微处理器控制系统可精确控制转速、时间和相对离心力;

6、无碳刷免维护变频感应电机,速度范围100-6000 rpm精确度±15 rpm;

7、离心转速与离心力步增调节为100 rpm/100 xg,时间控制:1-99分钟或1-99秒;

8、高强度的主机及转头材料可抵御各种化学腐蚀,具囿密封性和无限次耐高温消毒功能;

9、离心结束后自动打开离心机盖防止样品过热,便于取放样品;备有密封角转头配备转子盖防止笁作人员受样品污染。

除此之外CBG在线商店更有其他品牌多种型号实验室离心机,如等欢迎选购!

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