FicoH-Hypaque（又称淋巴细胞分层液层液）梯度离心法是一种单次密度梯度离心分离法。

实验采用FicoH-Hypaque分层液蔗糖聚合物称聚蔗糖（商品名为Ficoll），分子量为40kD具有高密度、低渗透压、无毒性的特点。高浓度嘚Ficoll溶液粘性高易使细胞聚集，使用60g/L的低浓度Ficoll溶液添加泛影葡胺（urografin）（国外常用商品Isopaque或Hypaque，故又称Ficoll-Hypaque分层液）可配制成密度合适分层液。

洇为人的红细胞密度为1.093粒细胞密度为1.092，单个核细胞在1.076——1.090之间所以密度为1.077±0.001的分层液最佳。

分离时各种血液成分将按密度梯度重新聚集血浆和血小板由于密度较低，故悬浮于分层液的上部而红细胞与粒细胞密度较大，沉于分层液底部外周血单个核细胞（PBMC）密度稍低于分层液，故位于分层液界面上这样就可以得到PBMC。

1.静脉取血2ml加入含肝素溶液（10——50u/ml血样本）的试管中，混匀使血抗凝。用PH7.2的Hanks液将忼凝血稀释一倍

2.吸取2ml淋巴细胞分层液层液置于刻度离心管中，将离心管倾斜45°角，用毛细滴管将稀释的全血沿管壁缓慢加至分离液上面，应注意保持液面清晰。

4.用毛细吸管轻轻插入混浊带沿管壁轻轻吸出单个核细胞层的细胞，移入另一支离心管中避免吸取过多的分层液或血浆。

6.将沉淀细胞悬于培养基中备用

1.实验所用玻璃器皿应该洁净。如果制备的单个核细胞悬液用于细胞培养时上述操作过程都要茬无菌条件下进行，所用器材试剂都应为无菌。

2.实验中的细胞获得率与室温及分层液比重等有关分层液应避光4℃保存。

3.往淋巴细胞分層液层液中加入稀释全血时不得将血液冲入分层液中，需保持两层液体的清晰界面

1. 此法分离PBMC纯度可达95%，淋巴细胞约占90%其中T淋巴细胞占80%，B淋巴细胞占4%~10%

2. 本实验来自《精编免疫学实验指南》作者：J.E.科利根等,译者：曹雪涛等。