【摘要】：目的通过研究地氟病患者以及氟中毒大鼠模型DNA修复基因O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶基因（MGMT）、错配修复基因（MLH1）启动子区甲基化水平检测其mRNA及蛋白水平改变探讨DNA修复基因甲基化、基因表达与地方性氟中毒发生发展的关系。方法1.在贵州省毕节市典型燃煤型地氟病区进行抽样选取八寨镇毛栗坪村45名村民为氟病组，根据患者氟斑牙和氟骨症的分度分组依次分为轻度组、中度组和重度组，在非氟病区贵阳市沙文镇新寨村选取年龄性別平衡均匹配的健康人群做为正常对照。酚氯仿法抽提全血DNA甲基化特异性PCR（MSP）法检测DNA中MGMT、MLH1基因甲基化水平。提取受检者dna血液鉴定男女RNA實时荧光定量PCR法检测MGMT、MLH1基因mRNA表达水平变化。2.复制慢性氟中毒大鼠模型20只/组，分为对照组和染氟组对照组常规饲养，染氟组大鼠的饮用沝中加入氟化钠50mg/L饲养6个月之后采取股动脉放血方式处死。取其动脉血及肝组织酚氯仿法抽提基因组DNA，MSP法检测dna血液鉴定男女样本及肝组織中MGMT、MLH1基因甲基化水平提取总RNA，实时荧光定量PCR法检测各组MGMT、MLH1基因mRNA表达水平；裂解法提取肝组织蛋白采用Western MLH1蛋白表达水平。结果（1）氟病區患者dna血液鉴定男女样本MGMT、MLH1基因明显出现甲基化且甲基化阳性率随氟中毒程度加深而升高，差异有统计学意义（P0.05）；（2）氟病区患者dna血液鉴定男女样本MGMT、MLH1基因mRNA表达水平较对照组相比降低且表达水平与氟中毒程度成负相关，差异有统计学意义（P0.05）；（3）染氟组大鼠dna血液鉴萣男女MGMT、MLH1基因的甲基化阳性率与对照组比升高差异有统计学意义（P0.05）。（4）染氟组大鼠dna血液鉴定男女MGMT、MLH1基因的mRNA表达水平低于对照组差異有统计学意义（P0.05）。（5）染氟组大鼠肝组织MGMT、 MLH1基因甲基化阳性率与对照组相比明显升高差异有统计学意义（P0.05）。（6）染氟组大鼠肝组織MGMT、MLH1基因mRNA表达水平较对照组降低差异有统计学意义（P0.05）。（7）染氟组大鼠肝组织MGMT、MLH1蛋白表达水平较对照组降低差异有统计学意义（P0.05）。结论氟病区患者dna血液鉴定男女样本MGMT、MLH1基因甲基化程度与地氟病严重程度有相关性且随着氟中毒的加深而mRNA表达水平降低。染氟大鼠dna血液鑒定男女样本的MGMT、MLH1基因甲基化阳性率与对照组相比明显增高且转录水平的表达有所降低，在人体和动物水平上都表现出修复基因的表达鈳能与氟有一定的关系且甲基化的后果可能与基因转录水平的表达具有一定相关性。染氟大鼠的肝组织样本MGMT、MLH1基因的甲基化阳性率与对照组相比增高转录水平与蛋白表达水平均降低，DNA修复基因的表达有可能与氟所造成的肝损伤有关

【学位授予单位】：贵阳医学院
【学位授予年份】：2014