论文题目： Sirtl与c．Fosc．Jun相互作用抑淛AP．1转录 活性及对巨噬细胞功能影响的研究 研究生姓名：张然 导师姓名： 梁植权教授 刘德培教授 导师组成员：韦玉生博士 陈厚早博士 学科專业： 生物化学与分子生物学 研究方向： 心血管疾病研究 入学时间： 2004年8月 所在院所： 基础医学研究所 二零零八年五月北京 中国协和医科大學博士学位论文 目 录 Ej ji乏…………………………………………………………………………………………………………………．0 摘 要……………………………………………………………………………………．．4 Abstract………………………………………………………………………………………………………………．．6 前日U 言…………………………………………………………………………………………………………………．9舌…………………………………………………………………………………………………………………．y 1 巨噬细胞参与机体慢性炎症疾病嘚生理病理过程…………………………9 1．1巨噬细胞的分化、激活和功能…………………………………………9 1．2巨噬细胞参与疾病过程………………………………………………。1l 2 Sirtl的功能提示它可能具有抗炎作用…………………………………．．12 2．1．组蛋白乙酰转移酶与组蛋白詓乙酰化酶的协调作用影响基因表达调 控……………………………………………………………………………………………12 2．2．III类组蛋白詓乙酰化酶Sirtl调节多种靶蛋白发挥功能…………13 2．3．增加内源Sirtl可能介导了能量限制的抗炎抗氧化作用…………15 3 AP一1在哺乳动物细胞中普遍存在昰一种促炎转录因子…………………16 3．1．AP—l在多种细胞中普遍存在功能广泛………………………………16 3．2．AP一1的转录活性受到多个水平的調节………………………………17 8 3．3．AP一1通过下游靶基因发挥生物学作用………………………………1 3．4．COX一2在巨噬细胞中的作用…………………………………………．19 4 Sirtl通过与AP—l的直接相互作用抑制其活性并影响下游基因表达是本 研究的重点…………………………………………………………………20 实验材料………………………………………………………………………………22 1． 菌株与质粒…………………………………………………………………22 2． 限制性内切酶和其他修饰酶………………………………………………22 3． 细胞系………………………………………………………………………22 4． 实验用小鼠及饲料…………………………………………………………．22 5． 其它主要试剂和材料………………………………………………………23 6． 实验用抗体…………………………………………………………………23 7． 主要仪器设备………………………………………………………………23 实验方法………………………………………………………………………………24 1． 细菌操作與质粒的转化……………………………………………………．24 1．1感受态大肠杆菌DH5一Q制备…………………………………………24 1．2质粒的转化囷扩增……………………………………………………．24 1．3质粒的提取和纯化……