为什么DNA为什么用无水乙醇沉淀dna不下来

这次酶切后的质粒,乙醇沉淀加了1u 20mg/ml的糖原,结果得率只有10%

以前用同样的方法,不加糖原得率在70%以上。为什么这次不行了呢

autoclave后没有改善,反而是没有autoclave的产量高一點结论:NaAc变质了。离心后白色沉淀量,1是2和3的大概两到三倍但是,所有的都能看到白色沉淀而前一次,glycogen是加了2和酒精-80度过夜然後离心,再加glycogen再离心,看不到白色沉淀莫非DNA和糖原结合后,既可以抵抗DNA酶也可以抵抗糖原酶?这次是-20度过夜的用2接种了一个plate,一忝后无菌落生长

同时把上一次得率只有10%的所有DNA PCI抽提,重新用1酒精沉淀。结果原来的总量是130X25,现在居然变成了660X15增加了两倍!最可能嘚解释是当时DNA浓度测定不对。为什么呢很可能是加了水之后室温下溶解的时间不够。以前好像是用60度十分钟效果不错,或者室温下30分鍾今后就用60度十分钟吧。

失败的关键:1. 过期试剂是不是因为没有autoclave才变质了呢?


2. 加水溶解时间不够

60度十分钟,或者室温下30分钟才行

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酚氯仿抽提DNA后,会使溶液分层,上层为水相,含有DNA;中间为蛋白(有时看不到);下层为有机相.原因是酚氯仿可以使蛋白质变性,从而从溶液中析出,但是疍白密度会小于酚氯仿,所以离心后它分布在中间;而DNA溶于水而不溶...

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