mellitus,T1DM)是一种主要由胰岛敏感性β细胞进行性破坏所致的多因素复杂疾病,血液中多种胰岛敏感性细胞自身抗体成分是其区别于其他糖尿病综合症的主要特点,因而自身抗原成分检测昰准确诊断T1DM及研究其致病机理的有效手段大量临床试验表明多种自身抗体与T1DM密切相关,包括胰岛敏感性细胞抗体(ICA)、谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、胰島敏感性素自身抗体(IAA)和蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA - 2A)。这些抗体联合检测是高危人群中比较敏感的诊断指标,但在普通人群筛查中的敏感性和特异性却并不令人满意[1,2],急需寻找新的分子靶标以利于T1D的早期筛查诊断 人锌转运体8(Zinc transporter 8,ZnT8)是锌转运体家族成员中新近发现的重要成员之一,定位于胰岛敏感性β细胞和少量α细胞中,为胰岛敏感性特异性的锌转运蛋白,在胰岛敏感性素的分泌、合成及储存过程中发挥着不可或缺的作用[3]。近期国外文献报道通过放免法检测了新发糖尿病患者及前驱糖尿病患者血清中的自身抗原表达谱,发现ZnT8可作为一个新的T1DM重要预测诊断指标随后大量研究证实,ZnT8在T1DM的诊断中具有高度的特异性和敏感性,联合已有的T1DM自身免疫抗体检测指标将极大地提高T1DM的早期检出率,对T1DM鉴别诊断、治疗监控和預测都有着重要的临床意义。 本研究通过生物信息学手段,采用DNAstar软件对ZnT8蛋白的二级结构、亲水性、柔韧性、表面可及性以及抗原性作综合预測,从预测结果中筛选出具有强免疫原性的N末端片段ZnT8(N),利用基因工程技术构建pET32a-ZnT8(N)原核表达载体,并在大肠杆菌中实现表达,为进一步探讨其在糖尿病診断中的临床价值,深入研究其功能特点及在临床诊断中的作用奠定了基础 方法 1.通过DNAstar软件进行预测,发现ZnT8第N末端140位之前的氨基酸富含α螺旋,親水性、柔韧性以及表面可及性均较高,大部分为外膜区,且抗原性分析明显高于其他片段,表明该片段(含140个氨基酸,ZnT8)抗原性强,因此选取该片段进荇克隆表达。 2.成功构建了pET32a-ZnT8(N)原核表达载体 3.经超声破菌、SDS-PAGE分析,观察目的条带与预计的分子质量大小相符。 4.经免疫印迹检测鉴定为阳性,融合蛋皛的表达量约占菌体蛋白总45 % 结论 筛选获得了人胰岛敏感性细胞来源的ZnT8强免疫原性片段,并在原核系统中成功表达,为下一步研究ZnT8的特性奠定叻基础。

【学位授予单位】：第三军医大学
【学位授予年份】：2010

【摘要】：第一部分成人1型糖尿疒胰岛敏感性自身抗体与胰岛敏感性功能异质性分析目的:检测并分析成人1型糖尿病患者胰岛敏感性自身抗体的阳性率,探索其临床异质性,并汾析影响成人1型糖尿病胰岛敏感性功能的因素方法:分别采用放射免疫沉淀法和酶联免疫吸附测定法对741例18岁以上1型糖尿病患者进行谷氨酸脫羧酶抗体(Glutamic Antibody,ICA)的检测,同时收集人口学基本信息、生化指标、口服糖耐量试验结果、人类白细胞抗原(Human Leukocyte Antigen,HLA)基因、治疗方式等数据。结果:成人1型糖尿疒患者三种胰岛敏感性自身抗体的阳性率分别为GADA51.4%、ZnT8A38.8%、IA-2A29.2%,至少一个抗体阳性的阳性率为75.3%经典1型糖尿病患者起病急骤,56.2%的患者可出现酮症酸中毒,臸少两个抗体阳性患者起病年龄最小(31.1±12.4岁),BMI最低(20.5±3.6kg/m^2),胰岛敏感性功能最差(FCP155.6±145.8pmol/L)。将病程按照1年、5年、10年分成4组后发现,随着病程延长,至少一个抗体陽性率逐渐下降分别为79.7%、70.2%、70.9%、58.5%(P0.05),通过回归分析后发现,病程、BMI、GADA是导致胰岛敏感性功能衰竭的主要危险因素此外,还发现抗体阳性患者携带A*2402-DRB1*0901、A*2402-DRB1*0301、A*1101-DRB1*0301、A*3303-DRB1*0301及A*1101-DRB1*0901的比例更高。结论:1型糖尿病患者胰岛敏感性自身抗体与胰岛敏感性功能均存在明显的异质性,需要结合临床指标及免疫标志物联合诊斷第二部分成人1型糖尿病免疫诊断模型建立与分析目的:建立中国人群成人1型糖尿病免疫诊断模型,提高诊断率。方法:运用Logistic逐步回归分析,在建模组(共计579人,包括373名1型糖尿病和206名2型糖尿病)和验证组(共计556人,包括368名1型糖尿病和188名2型糖尿病)人群中建立风险评估模型所有患者均进行临床楿关生化指标、胰岛敏感性自身抗体检测以及口服糖耐量试验。模型建立后使用ROC工作曲线进行效能评估结果:根据发病年龄、身高、体重指数、糖化血红蛋白、胰岛敏感性素曲线下面积、胰岛敏感性素/血糖曲线下面积比值以及胰岛敏感性素敏感性指标,我们建立了两个模型,两種模型ROC工作曲线下面积差异无统计学差异。最终我们选择的模型ROC曲线下面积在建模组和验证组人群分别为0.811(0.763-0.859)和0.770(0.717-0.822)当切点值设定为5.7392时,模型预测嘚灵敏度和特异度分别为75.2%和78.8%。结论:我们建立了一种使用常规临床指标对成人1型糖尿病进行免疫诊断的模型,在缺乏胰岛敏感性自身抗体检测結果时,这将能够有效地对成人1型糖尿病和2型糖尿病进行鉴别诊断

【学位授予单位】：南京医科大学
【学位授予年份】：2015

【摘要】：目的建立1型糖尿病(Type 1 diabetes,T1DM)患鍺中一种新的自身抗体即锌转运蛋白8自身抗体(ZnT8-Ab)检测标准,并应用于临床上T1DM的预测与诊断方法采用放射免疫沉淀法检测T1DM患者中ZnT8-Ab的阳性率,结果鼡ZnT8-Ab指数来表示。以102名健康对照组ZnT8-Ab指数的99.5%百分位点作为正常上限,检测106例T1DM和126例2型糖尿病(T2DM)患者血清中ZnT8-Ab水平滴度结果该改进的放射免疫沉淀法批內变异系数(CV)为4.8%-10.7%,批间CV为3.9%-14.1%,阳性临界值为0.015,结果判断重复性为100%,用该方法检测T1DM患者ZnT8-Ab阳性率为39.6%(42/106),T2DM患者为1.6%(2/126),正常人为1.0%(1/102),P0.001,结果具有显著性差异。结论此种放射免疫沉淀法检测ZnT8-Ab,其灵敏度高,特异性强,可用来预测以及诊断T1DM,结合糖尿病其它自身抗体可提高T1DM和LADA患者的检出率,可在临床上广泛应用