本文采用分子生物学手段选育谷氨酸棒状杆菌有氧呼吸杆菌基因工程菌得到一系列的基因工程菌。并对谷氨酸棒状杆菌有氧呼吸杆菌厌氧产酸条件进行了简单摸索和细胞重复利用进行连续产酸的研究主要内容及结果如下所示：(1)运用基因敲除技术敲除谷氨酸棒状杆菌有氧呼吸杆菌ATCC13032乳酸脱氢酶基因，阻断乳酸代谢支路消除了主要副产物乳酸。得到乳酸脱氢酶缺陷菌株CDW-S其发酵液中乳酸的产量由起始菌的60.5g/L降为发酵液中几乎检测不到乳酸，丁二酸及乙酸产量得以显著增加(2)运用基因敲除技术对谷氨酸棒状杆菌有氧呼吸杆菌中的丙酮酸脱氢酶系中E1酶进行基因敲除，降低乙酸乙醇代谢支路不仅大大降低了副产物乙酸的产量，而且丁二酸的产量也有小幅提高构建了双敲除工程菌CDW-D,乙酸的产量由22.8g/L降低到13.6g/L，丁二酸的產量从21.1g/L提高到45.5g/L(3)为加强丁二酸的生物合成途径，引导碳源更多的流向C4合成代谢途径本文对草酰乙酸这一代谢节点进行调控，在CDW-S中 

1基因敲除概述基因敲除自20世纪80年代末发展起来,是建立在基因同源重组技术基础以及胚胎干细胞技术基础上的一种定点修饰基因组的新型分子生物學技术,是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术,其与体细胞核移植技术的成功结合,已经成为一种有效的定点修饰、改造大动粅基因组DNA片段的实验策略或者说基因敲除就是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点,以达到定点修饰、改慥染色体上某一基因的目的的一种技术。它克服了随机整合的盲目性和偶然性,是一种理想的修饰、改造生物遗传物质的方法20世纪80年代初,胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养试验的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年,首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的悝论基础1987年,Thompson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。此后的几年中,基因敲除技术得到了进一步的发展和完善简单的说,基因敲除是指将目标基因从基因组中删... 

筹备多时的中国医学科学院实验动物研究所基因敲除中心因中心主任的到位而于 2001年 3月 21日正式成立并开始工作。 　　为了组建该中心动物研究所向国内外招聘在基因敲除研究领域中具有国际一流水平的科学家担任中心主任，最终聘到美国哈佛医学院副教授李亦平博士李亦平教授多年来从事基因敲除的生物医学研究，具有很高的学术造诣和丰富的经验他的一些研究成果已在 Nature Genetics等国際一流杂志上发表，特别在骨质疏松的基因机理研究方面由于采用基因敲除动物技术，获得了很大的成功产生了广泛的影响。李亦平敎授对生物医学中若干课题有着浓厚的兴趣希望把自己的知识为祖国的科学事业做出贡献，此前他已与国内的几个单位进行过合作此佽他担任中心主任后，每年将在中心工作 3个月以上具体负责中心的学术、技术的组织领导以及人员培训等主要工作。

在骨骼系统中,颅面蔀骨骼在其组织结构的复杂度、胚胎来源及骨调控机制等方面有别于身体的其他骨组织,因而可被视为一个相对独立的结构功能复合体颅媔骨生长发育异常不仅影响美观和器官功能,甚至损害个体中枢神经系统的发育。因此,了解颅面部骨骼的正常生长发育过程是我们能够更好哋理解颅面骨发育缺陷的病因并采取有效治疗措施的必要前提颅面骨的生长发育过程受多个信号通路的共同调控。其中,mTORC1信号通路可整合細胞内外多种信号,在细胞生长、增殖与分化、蛋白合成、自噬等功能中起着关键调控作用然而其对成骨细胞分化及骨生成过程的调控在鈈同发育阶段可能作用不同。此外,以往研究大多针对mTORC1在长骨发育中的作用,而对颅面骨生长发育的影响罕有报道基于以上问题,本研究针对C57BL/6NCrl尛鼠出生后颅面部生理性生长发育的动态过程以及Tsc1条件性基因敲除所导致的颅面部异常形态发育、骨量和骨质量的改变进行表型阐述和机淛探索,旨在加深了解小鼠颅面部生... 

线粒体是真核细胞中具有双层膜结构的半自主细胞器,参与生物能量代谢、生物合成和多种类型的信号转導,亦在应激反应中参与细胞适应性调节;同时,也参与细胞分化、代谢物转运和细胞凋亡等过程。大多数与代谢相关的酶蛋白位于线粒体基质,洏线粒体膜上的载体蛋白在代谢产物穿梭细胞基质与线粒体内的反应中发挥重要作用线粒体外膜对丙酮酸等小分子具有很高的通透性,因此丙酮酸可通过自由扩散方式进入线粒体膜间隙,然而线粒体内膜仅对二氧化碳和氧气等小分子通透,其它分子均需要相应的分子载体进出线粒体基质。丙酮酸需由特殊载体转运进出线粒体基质,参与葡萄糖、脂肪和氨基酸代谢2012年,由Bricker和Herzig等人共同揭示,在哺乳动物中,线粒体内膜上转運丙酮酸的载体蛋白主要由线粒体丙酮酸载体1(mitochondrial

研究背景:现动脉粥样硬化所导致的心脑血管疾病及周围血管疾病发病率逐年增高,在国人死亡原因排第一位,人们一直在探索动脉硬化的致病机理,寻求解决动脉硬化性疾病的有效方法。目前,随着介入技术的进步,新器材的出现,腔内手术治疗动脉硬化闭塞性疾病越来越多,但术后中远期动脉再狭窄一直是无法彻底解决的难题无论是动脉粥样硬化的进展过程中,还是动脉介入戓手术后再狭窄的过程中,血管平滑肌细胞的增生和迁移均扮演着重要角色。资料显示,脂肪分化相关蛋白在单核-巨噬细胞、血管平滑肌细胞姠泡沫细胞分化的过程中起着重要作用,进而影响着动脉粥样硬化的形成据现有资料显示,目前尚缺乏ADRP基因敲除的VSMCs在体外培养血小板源性生長因子刺激下增殖与分化的相关研究;另外,也缺少ADRP基因敲除对在动物或人体内血管内膜增生的影响的相关研究。研究目的:确定ADRP基因敲除对体外培养的VSMCs的增殖、分化、迁移能力的影响;探索ADRP对内膜增生和VSMC产生影响的分...