基因敲除后的回补实验，如何确定基因的上游和下游的调节区？ - 实验交流 - 生物秀
标题: 基因敲除后的回补实验，如何确定基因的上游和下游的调节区？
摘要: [基因敲除后的回补实验，如何确定基因的上游和下游的调节区？] 最近做了一个基因的敲除，可是在做回补的时候，不知道如何确定基因的上下游调节序列？看别人的文献，有的留2000bp，有的留1000bp，有哪位虫友做过相似的实验，请给我一些指点，非常感谢。基因序列，包括上下游在http:
ishare iask sina com cn f
htm 关键词:[基因 基因序列 序列 基因敲除 终止密码子]……
最近做了一个基因的敲除，可是在做回补的时候，不知道如何确定基因的上下游调节序列？看别人的文献，有的留2000bp，有的留1000bp，有哪位朋友做过相似的实验，请给我一些指点，非常感谢。
基因序列，包括上下游在http://ishare..cn/f/.html回复启动密码子和终止密码子上下游1kb就可以。回复不知道，高科技啊回复通常1K左右就够了，当然多点通常也没啥坏处，不过要是取太多，不小心把上下游的其它ORF也取进来了就不好了。回复不是很理解回补是什么意思，请教了。正在做干扰了，不过还没转化出来转化子了，暂时还检测不到。
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【求助】细菌的基因敲除怎么做？
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这个帖子发布于9年零28天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近想研究一个细菌的蛋白功能。看文献经常有基因敲除的菌株。不知道细菌的基因敲除怎么做？需要哪些质粒？请各位给些讲解或资料。谢谢。
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你应该到核酸技术中查查看。
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好的。谢谢。
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用自杀载体,通过同源重组, 把自杀载体插入你的目的基因,使该基因失活, 或者通过二次重组, 使目的基因的部分序列或者整个目的基因去掉. 如果需要相关资料,我可以介绍一些给你.
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细菌的基因敲除就是对目标基因的缺失.常应同源重组技术构建,最好从相关文献中查找.
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通过同源重组使特定靶基因失活，以研究该基因的功能，称为基因敲除(gene knock-out)基因敲除的技术路线如下：（1）构建重组基因载体﹔（2）用电穿孔等方法把重组DNA转入受体细胞内﹔（3）用选择培养基筛选已击中的细胞﹔（4）分子生物学检测。据俺所知目前有RecA重组系统、Red重组系统1、RecA重组系统由RecA和RecBCD组成，必须以环形的质粒状态存在。2、Red同源重组系统由λ噬菌体exo、bet、gam三个基因组成,线性载体即可。目前用这种方法敲除大肠杆菌的已经非常成熟了。也有很多人用基因沉默来研究细菌（例如antisense RNA）
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xuju2008 用自杀载体,通过同源重组, 把自杀载体插入你的目的基因,使该基因失活, 或者通过二次重组, 使目的基因的部分序列或者整个目的基因去掉. 如果需要相关资料,我可以介绍一些给你.您好，可否给予关于这方面的资料？万分感激~
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还有人做这块的人吗？我最近也想做。
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现在比较流行red重组
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xxll2006 现在比较流行red重组red只适合大肠杆菌吧？好像沙门也行，效率要低一些~~~其他的菌好像效率就非常低了吧？
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blowapc red只适合大肠杆菌吧？好像沙门也行，效率要低一些~~~其他的菌好像效率就非常低了吧？不止这两个
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xxll2006 不止这两个以前一个哥们不知道从哪个实验室顺了一套red的质粒，于是我想用red做弧菌，可能是我水平太差，做的一塌糊涂......现在重新开始用sacB 自杀质粒做了，虽然效率低，但是还是能做出来的。
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blowapc 以前一个哥们不知道从哪个实验室顺了一套red的质粒，于是我想用red做弧菌，可能是我水平太差，做的一 ...质粒是不是很麻烦？
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xxll2006 质粒是不是很麻烦？好久以前搞的，当时怎么做的几乎都忘了.......反正是没搞定~~~~Red现在又有新的进步了？
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blowapc 好久以前搞的，当时怎么做的几乎都忘了.......反正是没搞定~~~~Red现在又有新的进步了？我知道很多人用，不限于大肠，很多菌都有人做
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xxll2006 我知道很多人用，不限于大肠，很多菌都有人做筛选效率怎么样啊？用蔗糖自杀质粒，蔗糖的杀灭效率最多只有90%，最后筛选时太费劲了
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blowapc 筛选效率怎么样啊？用蔗糖自杀质粒，蔗糖的杀灭效率最多只有90%，最后筛选时太费劲了呵呵，不清楚
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xxll2006 呵呵，不清楚谢谢哈！我去查查相关文献再了解一下~~
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有人用cre/loxp系统敲除吗？
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我可以说我正在做吗？RecA重组系统和red系统都有用。。呵呵，不过没做出来还。
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我现在用的是cre-loxp系统的敲除，我想问一下各位如果敲的是它的必需基因，怎么办啊？设置对照？还是怎么的，不然没结果呢！
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zt滔滔江水 我可以说我正在做吗？RecA重组系统和red系统都有用。。呵呵，不过没做出来还。 red 怎么筛选重组质粒呀？
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用Kan把目的基因敲除了，该怎么把基因组上的Kan去除掉？
为了敲除目的基因，所以用长引物法把目的基因替换了，替换为kan,那么现在我该怎么样把KAn去除掉？？能否做到无痕呢？？有该方面的文献的请告诉我，谢谢大家:rol::rol::rol:
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