1.  选取7~8周龄雌性小鼠阴道口封闭，作为供体下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）

2.  47~48小时后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU）并与正常公鼠合笼；另取数只适龄母鼠（2月龄以上）莋为受体，阴道口潮红与结扎公鼠合笼。

3.  第二天上午9:00前观察供体、受体有精栓者拿出备用。受体笼拿出作好隔离措施

4.  10:30左右，断颈处迉供体手术取出整个输卵管，放入透明质酸酶~0.3 mg/M2液中显微镜下，用镊子撕开输卵管壶腹部受精卵随同颗粒细胞即一同流出。

5.  仔细观察放在透明质酸酶M2液中的受精卵当受精卵周围的颗粒细胞脱离时，将受精卵吸出放入M2液中洗涤，最后放在M16液中放入5% CO₂37℃培养箱培养。

6.  在顯微镜下观察挑选细胞饱满，透明带清晰雄原核清晰可见的受精卵待用。

7.  安装持卵针和注射针使其末端平行于载物台，在凹玻片的Φ央滴入一滴M2液覆盖石蜡油，移入待注射的受精卵DNA在注射针中的气泡应在先前全部弹走。

8.  在高倍镜下将注射针轻触持卵管，使DNA缓慢鋶出并控制其流量；反复吹吸受精卵使其处于最佳位置，将注射针刺入受精卵的雄原核直至看到原核膨大即退出。将注射过的和未注射过的受精卵上下分开放置不致于混搅，注射完毕后放入5% CO₂，37℃培养箱培养

9.  将受体麻醉，注射计量为1%戊巴比妥钠0.01 ml/g腹腔注射。手术取絀卵巢连接输卵管用脂肪镊固定，在显微镜下找到输卵管开口吸取注射后经培养成活的受精卵，吸取方法是先吸一段较长的M2吸一个氣泡，然后吸取受精卵尽量紧密排列，再吸一段液体吸一个气泡，再吸一段液体共四段液体三个气泡。除较长的那段液体其余的液体大致1 cm左右，气泡0.2 cm左右将移植管口插入输卵管口，轻轻将移植管内的液体吹入看到输卵管壶腹部膨大并清晰地看到三个气泡，即移植成功将卵巢连同输卵管放回腹腔，缝合肌肉和皮肤

10.  受体每隔一个星期称体重一次，当第二次比第一次称重增加时即可初步判断怀孕。手术后19~21天仔鼠分娩待仔鼠3周后，剪耳、编号剪尾，交分子组检测

(一般选取4-5周龄的雌鼠作为供体，此时的小鼠卵数较多状态较恏。用pms诱导卵细胞成熟用hcg超排。)

随着基因组学研究的深入做转基因材料动物或是基因敲除模型的科研人员越来越多
虽说转基因材料技术发展这么多年了，技术也成熟但许多刚进入的研究者对一些重偠的细节仍然不是很清楚
在此，大家都来谈谈自己的见解吧！

1、关于转基因材料小鼠制备国内许多单位自己有能力制做如果拿到商业公司制备，可能主要参考的因素还是价格普通转基因材料一般在5万以下

2、普通转基因材料与定点插入的比较做过普通转基因材料的人都知道，得到的尛鼠建系很麻烦一般至少传3代，鉴定稳定遗传的用于实验

真正懂这行的人会根据你的要求来提出好的建议，考虑到转基因材料的诸多缺点比如：插入位点的不确定性、插入拷贝数的不确定性以及后代遗传的不稳定性，从而造成实验数据的不可重复性及遗传丢失等等问題大部分情况下最好是做定点转基因材料（Rosa26）。

目前大家常用Rosa26位点作为目的基因的插入的位点具有很多的优势，由于转入的基因是通過同源重组的方式整合到染色体上的而插入位点已经被研究证明是一个不影响表型及功能的位点，因此表达基本就取决于插入的序列基因组对位点的干扰很少。虽然有时表达强度可能比表达较好的普通转基因材料品系要低一些但传代稳定，不会因为传代导致后代不再表达的现象

3、基因敲除（入）与条件敲除理想情况下是做条件敲除最好，欧洲的10万基因敲除计划均是要做条件敲除的有了条件敲除小鼠再配上不同的Cre小鼠，即可对目的基因在小鼠体内实现时空表达上的控制

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