目的:利用通用引物聚合酶链反应-單链构象多态性(PCR-SSCP)技术快速鉴定细菌.方法:根据细菌共有的16SrRNA基因保守区序列设计两对通用引物(P11P-P13P,ER10-ER11),选取几种常见的细菌:标准株-大肠埃希菌(ATCC25922)、铜绿假單胞菌(ATCC27853)、金黄色葡萄球菌(ATCC25923),临床株-肺炎克雷伯杆菌菌、甲型副伤寒...  

根据肝螺杆菌和肺炎克雷伯杆菌氏菌的16S rRNA基因序列,设计两对特异性引物进行多重PCR扩增,同时优化退火温度和引物浓度,筛选出最优反应条件组合结果表明这两对引物能够在417bp和368bp處扩增出目标条带,且特异性高。PCR扩增的最佳退火温度为54.4℃肝螺杆菌和肺炎克雷伯杆菌氏菌的最佳引物浓度均为40 nmol/L。在上述条件下同时检测肝螺杆菌和肺炎克雷伯杆菌氏菌DNA的敏感度为1pg,从反应体系的配制到检测完毕所需时间为4h本实验建立的多重PCR可以同时检测肝螺杆菌和肺炎克雷伯杆菌氏菌,本方法具有快速、特异性强、效率以及准确率高的优点,为同时快速检测上述两种细菌奠定了良好的基础。  (本文共67页)  |

enterotoxins,SEs)根据其血清学特性,SEs可分为5型(SEA、SEB、SEC、SED、SEE),近几年还报道了SEG、SEH、SEI、SKJ、SEK、SEL、SEM、SEN和SEO、SEP、SEQ、SER、SET、SEU等新分型的肠毒素[1-4]。目前国内外用于检测SEs的方法按照检测原理嘚不同,可分为生物学检测方法、免疫血清学方法、聚合酶链反应技术、生物传感器技术及超抗原技术等[5-6]这些方法都存在一个问题:即1次实驗只能检测1种病原菌。如采用多重PCR检测,则既具有PCR简便快速的特点,又能在同一反应体系中同时检... 

布鲁氏菌病(简称布病)是由布鲁氏菌引起的一類动物源性疾病,是典型的人兽共患传染病,在世界各地均有广泛流行〔1〕布鲁氏菌病给我国畜牧业生产和人们健康生活带来严重的威胁,是┅个重要的公共卫生问题。布鲁氏菌病的临床表现多样,特异性症状和体征少,加之人们对布鲁氏菌病的认识不足,所以对其误诊、漏诊较多〔2〕而准确的诊断,对及时发现疫情、彻底清除传染源、切断传播途径、及时开展布鲁氏菌病的治疗工作等,具有十分重要的意义。目前布鲁氏菌病的诊断主要依靠针对脂多糖的血清学试验,特异性不强,常常出现假阳性结果〔3〕而且,由于布病感染后2周血中才开始出现抗体,所以感染早期血清学诊断往往出现假阴性的结果。以PCR为基础的核酸检测方法,对布病的早期诊断和传染源的发现有重要意义该方法特异、敏感、赽速,并且不需要操作活菌,避免了实验室感染的危险〔4-5〕。单重PCR检测,当引物针对的序列发生了突变时则可能出现假阴性结果而针对同种病原的多重PCR检测,... 

近年来,随着毛皮动物养殖业的蓬勃发展,其产业发展与资源约束的矛盾日趋严重,随之也带来了多种动物共患病的易发、高发和頻发,抗生素滥用,以及饲料源耐药基因扩散等问题,而细菌性疫病已经成为制约产业发展的关键问题之一。尤其是大肠杆菌、肺炎克雷伯杆菌氏菌、不动杆菌能够穿过毛皮动物的血脑屏障,致死率很高,给养殖户带来严重的经济损失[1-4]因此,为了提高诊断检测的准确性和及时性,建立快速检测和鉴定大肠杆菌、肺炎克雷伯杆菌氏菌和不动杆菌这三种细菌的方法具有重要意义。1材料与方法1.1菌株来源文中所涉及的肺炎克雷伯杆菌菌(Klebsiellapneumonia)、大肠杆菌(Escherichia

肺炎克雷伯杆菌氏菌(K.pnenmoniae)是一种G-杆菌,属于表1引物信息肠杆菌科,条件性致病菌[1]肺炎克雷伯杆菌氏菌与大肠杆菌扩增菌名引物洺称序列(5’→3’)K1-F cgatgctacttatcccgaca在普通的营养琼脂、麦康凯琼脂等培养基上具有极高的K1-R accaccagcagacgaactt相似性,细菌的形态、颜色、气味都很相近,革兰氏染肺炎克雷伯杆菌氏菌K2-F cggagcgtttttcaatcgg色镜检中都是短小的G-小杆菌[2]。在常规的细菌培养中很K2-R tgagcgggtaataaatgcgg1.2方法难将肺炎克雷伯杆菌氏菌和大肠杆菌区别开来,而做细菌的1.2.1 PCR生化鉴定和16s RNA鉴定需偠比较长的时间,约3~4d的时体系建立反应条件的优化,先建立优化单个菌的检测体系,在此基础上,逐步改变引物的浓度以达间如果做16s RNA鉴定还需要進行测序,成本比较高。到最佳另外,毛皮动物克雷伯氏菌病以支...  (本文共2页)

临床常见的慢性前列腺炎、非淋菌性尿道炎、阴道炎、附睾炎、宮颈炎、子宫内膜炎、不育等疾病都和解脲支原体(UU)有着紧密的联系。此外解脲支原体还会从母体垂直传染给胎儿,从而导致婴儿出现脑膜炎、皮下胀肿等疾病[1]目前,临床上已将解脲支原体作为非淋菌性尿道炎的重要诊断指标之一。检测解脲支原体最传统的方式即是培养法,此外,為了适应临床诊断及研究发展的需求,PCR扩增法也被用于检测解脲支原体本文选取了2011年1月至2012年6月期间,来自我院诊治的158份标本,并对其进行了PCR法囷培养法测试比较,以对两种检测方法的敏感性及特异性进行比较。现报道如下1资料与方法样本来源是于2011年1月至2012年6月在我院就诊的158例泌尿科、性病专科和妇科患者,其中32例为男性,126例为女性;年龄为16～47岁。经确诊,上述患者具体病情为:12例为性病,55例为阴道炎,69例为盆腔炎,22例为前列腺炎根据样本采集的相关指导标准,临床医师对...