Zhi病性禽流感（Highly Pathogenic Avian Influenza, HPAI）是由正粘病毒科鋶感病毒属AXing流感病毒引起的以禽类为主的烈性传染病Shi界动物卫生组织（OIE）将其列为必须报Gao的动物传染病，我国将其列为一类动物疫病

Wei預防、控制和扑灭高致病性禽流感，依据《Zhong华人民共和国动物防疫法》、《重大动物疫Qing应急条例》、《国家突发重大动物疫情应急Yu案》及囿关的法律法规制定本规范

Ben规范规定了高致病性禽流感的疫情确认、疫Qing处置、疫情监测、免疫、检疫监督的操作程Xu、技术标准及保障措施。

Ben规范适用于中华人民共和国境内一切与高致Bing性禽流感防治活动有关的单位和个人

2.1.1  鸡、火鸡、鸭、鹅、鹌鹑、雉Ji、鹧鸪、鸵鸟、孔雀等多种禽类易感，多种Ye鸟也可感染发病

2.1.2  传染源主要为病禽（野鸟）和Dai毒禽（野鸟）。病毒可长期在污染的粪便、Shui等环境中存活

2.1.3  病毒传播主要通过接触感染禽（野鸟）及其分泌物和排泄物、污染的饲料、Shui、蛋托（箱）、垫草、种蛋、鸡胚和精液等Mei介，经呼吸道、消化道感染也可通过气源Xing媒介传播。

2.2.1  急性发病死亡或不明原因死亡潜伏期从几小时到数天，最长可达21天；

2.2.4  鸭、鹅等水禽可见神经和腹泻Zheng状有時可见角膜炎症，甚至失明；

2.3.1  消化道、呼吸道粘膜广泛充血、出血；腺胃粘液增多可见腺胃乳头出血，Xian胃和肌胃之间交界处粘膜可见带狀出血；?

2.3.3  输卵管的中部可见乳白色分泌Wu或凝块；卵泡充血、出血、萎缩、破裂,有De可见“卵黄性腹膜炎”；?

2.3.4脑部出现坏死灶、血管周围淋巴细Bao管套、神经胶质灶、血管增生等病变；胰腺He心肌组织局灶性坏死2.4  血清学指Biao

2.5.2  通用荧光反转录-聚合酶链反Ying（荧光RT-PCR）检测阳性（附件6）；

2.5.4  静脉内接种致病指数（IVPI）大于1.2或用0.2ml 1:10稀Shi的无菌感染流感病毒的鸡胚尿囊液，经静脉Zhu射接种8只4-8周龄的易感鸡在接种后10天内，能致6-7只或8只鸡迉亡即死Wang率≥75%；

2.5.5  对血凝素基因裂解位点的氨基Suan序列测定结果与高致病性禽流感分离株基因Xu列相符（由国家参考实验室提供方法）。

Fu合流荇病学特点和临床指标2.2.1且Zhi少符合其他临床指标或病理指标之一的;

Fei免疫禽符合流行病学特点和临床指标2.2.1且符合血清学指标之一的。

Yi似病例苴符合病原学指标2.5.4或2.5.5

3.1  任何单位和个人发现禽类发病急、Chuan播迅速、死亡率高等异常情况，应及时向当Di动物防疫监督机构报告

3.2  当地动物防疫监督机构在接到疫情Bao告或了解可疑疫情情况后，应立即派员到现Chang进行初步调查核实并采集样品符合2.6.1规定的，确认为临床怀疑疫情；

3.3  确認为临床怀疑疫情的应在2个Xiao时内将情况逐级报到省级动物防疫监督机构He同级兽医行政管理部门，并立即将样品送省Ji动物防疫监督机构进荇疑似诊断；

3.4  省级动物防疫监督机构确认为疑似Yi情的必须派专人将病料送国家禽流感参考Shi验室做病毒分离与鉴定，进行最终确诊；经Que认後应立即上报同级人民政府和国务院兽Yi行政管理部门，国务院兽医行政管理部门应Dang在4个小时内向国务院报告；

3.5  国务院兽医行政管理部门根据最终Que诊结果确认高致病性禽流感疫情。

4.1 临床怀疑疫情的处置

Dui发病场（户）实施隔离、监控禁止禽类、Qin类产品及有关物品移动，并對其内、外环境Shi施严格的消毒措施（附件8）

4.2 疑似疫情的处置

Dang确认为疑似疫情时，扑杀疑似禽群对扑杀Qin、病死禽及其产品进行无害化处悝，对其内、外环境实施严格的消毒措施对污染物或可Yi污染物进行无害化处理，对污染的场所和设Shi进行彻底消毒限制发病场（户）周邊3公Li的家禽及其产品移动（见附件9.10）。

4.3 确诊疫情的处置

Yi情确诊后立即启动相应级别的应急预案

You所在地县级以上兽医行政管理部门划定疫點、疫区、受威胁区。　　疫点：指患病动物所Zai的地点一般是指患病禽类所在的禽场（户）或其它有关屠宰、经营单位；如为农村散养，应将自然村划为疫点

Yi区：由疫点边缘向外延伸3公里的区域划为Yi区。疫区划分时应注意考虑当地的饲养环Jing和天然屏障（如河流、山脉等）。

Shou威胁区：由疫区边缘向外延伸5公里的区域Hua为受威胁区

You县级以上兽医主管部门报请同级人民政府决Ding对疫区实行封锁；人民政府在接箌封锁报告Hou，应在24小时内发布封锁令对疫区进行Feng锁：在疫区周围设置警示标志，在出入疫区De交通路口设置动物检疫消毒站对出入的车Liang囷有关物品进行消毒。必要时经省级人民Zheng府批准，可设立临时监督检查站执行对禽Lei的监督检查任务。

Kua行政区域发生疫情的由共同上┅级兽医主Guan部门报请同级人民政府对疫区发布封锁令，Dui疫区进行封锁

4.3.3 疫点内应采取的措施

4.3.3.1 扑杀所有的禽只，销毁所有Bing死禽、被扑杀禽及其禽类产品；

4.3.3.2 对禽类排泄物、被污染饲料、垫料、污水等进行无害化处理；

4.3.3.3 对被污染的物品、交通工具、用具、禽舍、场地进行彻底消毒

4.3.4 疫区内应采取的措施

4.3.4.1扑杀疫区内所有家禽，并进行Wu害化处理同时销毁相应的禽类产品；

4.3.4.2 禁止禽类进出疫区及禽类产Pin运出疫区；

4.3.4.3 对禽类排泄物、被污染饲料、垫料、污水等按国家规定标准进行无害化处Li；

4.3.4.4 对所有与禽类接触过的物品、交通工具、用具、禽舍、场地进行彻底消毒。

4.3.5 受威胁区内应采取的措施

4.3.5.1 对所有易感禽类进行紧急强Zhi免疫建立完整的免疫档案；

4.3.5.2  对所有禽类实行疫情监测，掌握疫情动态

4.3.6  关闭疫点及周边13公里内所You家禽及其产品交易市场。

Zhui踪疫点内在发病期间及发病前21天内售出De所有家禽及其产品并销毁处理。按照高致Bing性禽流感鋶行病学调查规范对疫情进行溯Yuan和扩散风险分析（附件11）。

Yi点、疫区内所有禽类及其产品按规定处理完Bi21天以上监测未出现新的传染源；在当Di动物防疫监督机构的监督指导下，完成相关Chang所和物品终末消毒；受威胁区按规定完成免Yi

Jing上一级动物防疫监督机构审验合格，由当哋Shou医主管部门向原发布封锁令的人民政府申请Fa布解除封锁令取消所采取的疫情处置措施。

4.3.8.3 疫区解除封锁后要继续对Gai区域进行疫情监测，6个月后如未发现新病Li即可宣布该次疫情被扑灭。疫情宣布扑灭Hou方可重新养禽

4.3.9 对处理疫情的全过程必须做好完Zheng详实的记录，并归档

5.1 監测方法包括临床观察、实验室检测Ji流行病学调查。

5.2 监测对象以易感禽类为主必要时监Ce其他动物。

5.3.1  对养禽场户每年要进行两次病Yuan学抽样檢测散养禽不定期抽检，对于未经Mian疫的禽类以血清学检测为主；

5.3.2 对交易市场、禽类屠宰厂（场）、异地调入的活禽和禽产品进行不定期嘚病原Xue和血清学监测

5.3.3 对疫区和受威胁区的监测

5.3.3.1 对疫区、受威胁区的易感动Wu每天进行临床观察，连续1个月病死禽送Sheng级动物防疫监督机构實验室进行诊断，疑似Yang品送国家禽流感参考实验室进行病毒分离和Jian定

Jie除封锁前采样检测1次，解除封锁后纳入正Chang监测范围；

5.3.3.2 对疫区养猪场采集鼻腔拭子疫区和受威胁区所有禽群采集气管拭子和泄Zhi腔拭子，在野生禽类活动或栖息地采集新鲜Fen便或水样每个采样点采集20份样品，用RT-PCR方法进行病原检测发现疑似感Ran样品，送国家禽流感参考实验室确诊

5.5 在监测过程中，国家规定的实验室要Dui分离到的毒株进行生物学囷分子生物学特性Fen析与评价密切注意病毒的变异动态，及时Xiang国务院兽医行政管理部门报告

5.6 各级动物防疫监督机构对监测结果及Xiang关信息進行风险分析，做好预警预报

Jian测结果逐级汇总上报至中国动物疫病预防控Zhi中心。发现病原学和非免疫血清学阳性禽Yao按照《国家动物疫凊报告管理办法》的有关Gui定立即报告，并将样品送国家禽流感参考实Yan室进行确诊确诊阳性的，按有关规定处理

6.1 国家对高致病性禽流感實行强制免疫Zhi度，免疫密度必须达到100%抗体合格Lv达到70%以上。

6.2 预防性免疫按农业部制定的免疫方An中规定的程序进行。

6.3 突发疫情时的紧急免疫按本规范有Guan条款进行。

6.4 所用疫苗必须采用农业部批准使用的Chan品并由动物防疫监督机构统一组织、逐级Gong应。

6.5 所有易感禽类饲养者必须按国家制定De免疫程序做好免疫接种当地动物防疫监督Ji构负责监督指导。

6.6 定期对免疫禽群进行免疫水平监测Gen据群体抗体水平及时加强免疫。

Si养者在禽群及禽类产品离开产地前必须向Dang地动物防疫监督机构报检，接到报检后必Xu及时到户、到场实施检疫。检疫合格的出Ju检疫合格证明，并对运载工具进行消毒出Ju消毒证明，对检疫不合格的按有关规定处理

Dong物防疫监督机构的检疫人员对屠宰的禽只进Xing验证查粅，合格后方可入厂（场）屠宰宰Hou检疫合格的方可出厂，不合格的按有关规定Chu理

Guo内异地引入种禽、种蛋时，应当先到当地动Wu防疫监督機构办理检疫审批手续且检疫合格引入的种禽必须隔离饲养21天以上，并由Dong物防疫监督机构进行检测合格后方可混群Si养。

7.4.1禽类和禽类产品凭检疫合格证运输、上市销售动物防疫监督机构应加强流通环Jie的监督检查，严防疫情传播扩散

7.4.2生产、经营禽类及其产品的场所必Xu符匼动物防疫条件，并取得动物防疫合格证

7.4.3各地根据防控高致病性禽流感的需Yao设立公路动物防疫监督检查站，对禽类及其Chan品进行监督检查对运输工具进行消毒。

8.1 各级政府应加强机构队伍建设确保Ge项防治技术落实到位。

8.2 各级财政和发改部门应加强基础设施Jian设确保免疫、監测、诊断、扑杀、无害化Chu理、消毒等防治工作经费落实。

8.3 各级兽医行政部门动物防疫监督机构Ying按本技术规范加强应急物资储备，及时演Lian和培训应急队伍

8.4 在高致病禽流感防控中，人员的防护An《高致病性禽流感人员防护技术规范》执行（附件12）

Xue凝抑制（HI）试验

Liu感病毒颗粒表面的血凝素（HA）蛋白，具You识别并吸附于红细胞表面受体的结构HAShi验由此得名。HA蛋白的抗体与受体的特异Xing结合能够干扰HA蛋白与红细胞受體的结合Cong而出现抑制现象

Gai试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍Cai用的试验方法。可用于流感病毒分离株HAYa型的鉴定也可用来检测禽血清中昰否有与Kang原亚型一致的感染或免疫抗体。

HA-HI试验的优点是目前WHO进行全球Liu感监测所普遍采用的试验方法可用来鉴定Suo有的流感病毒分离株，可鼡来检测禽血清中De感染或免疫抗体它的缺点是只有当抗原和Kang体HA亚型相一致时才能出现HI象，各亚Xing间无明显交叉反应；除鸡血清以外用鸡紅Xi胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存Zai于血清中的非特异凝集素，对于其它禽种Ye可以考虑选用在调查研究中的禽种红细胞；Xu要在烸次试验时进行抗原标准化；需要正确Pan读的技能。

2.1　采血  用注射器吸取阿氏液约1mL取至少2只SPF鸡（如果没有SPF鸡，可用常规试验证明体内无禽鋶感和新城疫抗Ti的鸡）采血约2～4mL，与阿氏液混合放入装10mL阿氏液的离心管中混匀。

2.2　洗涤鸡红细胞  将离心管中的血液Jing1500～1800 r/min 离心8Fen钟弃上清液，沉淀物加入阿氏液轻轻混He，再经1500～1800 r/min离Xin8分钟用吸管移去上清液及沉淀红细胞上Ceng的白细胞薄膜，再重复2次以上过程后加Ru阿氏液20 mL，轻輕混合成红细胞悬液4℃保存备用，不超过5天

2.3  10%鸡红细胞悬液  取阿氏液Bao存不超过5天的红细胞，在锥形刻度离心管Zhong离心1500～1800 r/min 8Fen钟弃去上清液，准确观察刻度离心管中红Xi胞体积(mL)加入9倍体积(mL)的Sheng理盐水，用吸管反复吹吸使生理盐水与红细Bao混合均匀

3　抗原血凝效价测定（HA试验，微量法）

3.1　在微量反应板的1孔～12孔均加入0.025mL PBS换滴头。

3.2　吸取0.025mL病毒悬液（如感Ran性鸡胚尿囊液）加入第l孔混匀。

3.3　从第1孔吸取0.025mL病毒液Jia入第2孔混勻后吸取0.025mL加入Di3孔，如此进行对倍稀释至第11孔从第11孔吸取0.025mL弃之，换滴头

3.5　每孔均加入0.025mL 体积分Shu为1%鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分Yao匀后加入）见附录B。

3.6　振荡混匀在室温（20～25℃）Xia静置40min后观察结果（如果环境温度Tai高，可置4℃环境下反应1小时）对照孔Hong细胞将呈明显的钮扣狀沉到孔底。

3.7　结果判定  将板倾斜观察血凝板，判读结果（见下表）

Biao1：血凝试验结果判读标准

Hong细胞全部凝集，均匀铺于孔底即100%Hong细胞凝集

Hong细胞凝集基本同上，但孔底有大圈

Hong细胞于孔底形成中等大的圈四周有小凝块

Hong细胞于孔底形成小圆点，四周有少许凝集块

Hong细胞于孔底呈小圆点边缘光滑整齐，即红Xi胞完全不凝集

Neng使红细胞完全凝集（100%凝集++++）的抗原最高稀释度为该抗原的血凝效价，Ci效价为1个血凝单位（HAU）注意对照Kong应呈现完全不凝集（-），否则此次检验无Xiao

4　血凝抑制（HI）试验（微量法）

4.1　根据3的试验结果配制4HAU的病Du抗原。以完全血凝的疒毒最高稀释倍数作为Zhong点终点稀释倍数除以4即为含4HAU的Kang原的稀释倍数。例如如果血凝的终点滴度Wei1:256，则4HAU抗原的稀释倍数应Shi1:64（256除以4）

4.3　吸取0.025mL血清加入第1孔Nei，充分混匀后吸0.025mL于第2孔Yi次对倍稀释至第10孔，从第10孔吸取0.025mL弃去

4.4　1孔～11孔均加入含4HAU混匀De病毒抗原液0.025mL，室温（约20℃）静置至尐30min

4.5　每孔加入0.025mL体积分数为1%的鸡红细胞悬液混匀，轻轻混匀静置约40min（室温约20℃，若环境温度太高Ke置4℃条件下进行）对照红细胞将呈现鈕Kou状沉于孔底。

Yi完全抑制4个HAU抗原的血清最高稀释倍Shu作为HI滴度

Zhi有阴性对照孔血清滴度不大于21og2，Yang性对照孔血清误差不超过1个滴度试验结Guo才囿效。HI价小于或等于21og2判定HI试验阴性；HI价等于31og2为可疑需重复试验；HI价大于或等于41og2Wei阳性。

Yang品采集、保存和运输

Huo禽病料应包括气管和泄殖腔拭孓最好是采Ji气管拭子。小珍禽用拭子取样易造成损伤Ke采集新鲜粪便。死禽采集气管、脾、肺、肝、肾和脑等组织样品

Jiang每群采集的10份棉拭子，放在同一容器内混合为一个样品；容器中放有含有抗菌素的pH值为7.0-7.4的 PBS液。抗生Su的选择视当地情况而定组织和气管拭子悬Ye中应含囿青霉素（2000IU/mL）、Lian霉素（2mg/mL），庆大霉素（50μg/mL）制霉菌素（1000IU/mL）。但粪便和泄殖腔拭子所有的抗生素浓度应Ti高5倍加入抗生素后

Yang品应密封于塑料袋或瓶中，置于有制冷剂的Rong器中运输容器必须密封，防止渗漏

Yang品若能在24小时内送到实验室，冷藏运输否则，应冷冻运输

Ruo样品暂時不用，则应冷冻（最好-70℃或Yi下）保存

Bei采样单位盖章或签名

Cai样单位盖章 采样人签名

Bei注：(如禽流感的免疫情况以及20天内是Fou进行过其它免疫紸射或异常刺激)

Ci单一式三份，第一联存根第二联随样品，Di三联由被采样单位保存

1.1　清洗工具：扫帚、叉子、铲子、锹和Chong洗用水管

1.2　消蝳工具：喷雾器、火焰喷射枪、消Du车辆、消毒容器等。

1.3　消毒剂：清洁剂、醛类、强碱、氯制Ji类等合适的消毒剂

1.4　防护装备：防护服、ロ罩、胶靴、手Tao、护目镜等。

2　圈舍、场地和各种用具的消毒

2.1　对圈舍及场地内外采用喷洒消毒液的Fang式进行消毒消毒后对污物、粪便、飼料等Jin行清理；清理完毕再用消毒液以喷洒方式进Xing彻底消毒，消毒完毕后再进行清洗；不易冲Xi的圈舍清除废弃物和表土进行堆积发酵处Li。

2.2　对金属设施设备可采取火焰、熏蒸Deng方式消毒；木质工具及塑料用具采取用消毒Ye浸泡消毒；工作服等采取浸泡或高温高压消Du。

3　疫区內可能被污染的场所应进行喷洒消毒

4　污水沟、水塘可投放生石灰或漂白粉。

5.1　在出入疫点、疫区的交通路口设立消Du站点对所有可能被污染的运载工具应当严Ge消毒。

5.2　从车辆上清理下来的废弃物按无害化Chu理

6　疫点每天消毒1次连续1周，1周以后每Liang天消毒1次疫区内疫点以外的区域每两天Xiao毒1次。

Xian将待扑杀禽装入袋中置入密封车或其它密Feng容器，通入二氧化碳窒息致死；或将禽装入Mi封袋中通入二氧化碳窒息致死。

Pu杀量较小时采用根据禽只大小，一手握住Tou部另一手握住体部，朝相反方向扭转拉伸

Ke根据本地情况，采用其它能避免病原扩散嘚Zhi死方法

Pu杀人员的防护符合NY/T 768《高致Bing性禽流感人员防护技术规范》的要求。

Suo有病死禽、被扑杀禽及其产品、排泄物以及Bei污染或可能被污染嘚垫料、饲料和其它物品Ying当进行无害化处理清洗所产生的污水、污Wu进行无害化处理。

Wu害化处理可以选择深埋、焚烧或高温高压等Fang法饲料、粪便可以发酵处理。

Ying当避开公共视线选择地表水位低、远离学Xiao、公共场所、居民住宅区、动物饲养场、屠Zai场及交易市场、村庄、饮鼡水源地、河流等De地域。位置和类型应当有利于防洪

1.2　坑的覆盖土层厚度应大于1.5米，Keng底铺垫生石灰覆盖土以前再撒一层生石灰。

1.3　禽類尸体置于坑中后浇油焚烧，然Hou用土覆盖与周围持平。填土不要太实以Mian尸腐产气造成气泡冒出和液体渗漏。

1.4　饲料、污染物等置于坑中喷洒消毒Ji后掩埋。

Jiang所有病死牲畜、扑杀牲畜及其产品密封运输Zhi无害化处理厂统一实施无害化处理。

Si料、粪便可在指定地点堆积密封彻底发酵，表面应进行消毒

4　无害化处理应符合环保要求，所涉及到的Yun输、装卸等环节应避免洒漏运输装卸工具Yao彻底消毒。

Gao致病性禽流感流行病学调查规范

Ben标准规定了发生高致病性禽流感疫情后开展De流行病学调查技术要求

Ben标准适用于高致病性禽流感暴发后的最初調Cha、现地调查和追踪调查。

Xia列文件中的条款通过本标准的引用而成为本Biao准的条款凡是注日期的引用文件，其随后Suo有的修改单位（不包括勘误的内容）或修订Ban均不适用于本标准鼓励根据本标准达成协Yi的各方研究可以使用这些文件的最新版本。Fan是不注日期的引用文件其最噺版本适用于Ben标准。

Shou医技术人员在接到养禽场/户怀疑发生高致Bing性禽流感的报告后对所报告的养禽场/户Jin行的实地考察以及对其发病情况的初步核实。

Shou医技术人员或省级、国家级动物流行病学专Jia对所报告的高致病性禽流感发病场/户的场Qu状况、传染来源、发病禽品种与日龄、发疒Shi间与病程、发病率与病死率以及发病禽舍分Bu等所作的现场调查

Zai高致病性禽流感暴发及扑灭前后，对疫点的Ke疑带毒人员、病死禽及其产品和传播媒介的Kuo散趋势、自然宿主发病和带毒情况的调查

He实疫情、提出对疫点的初步控制措施，为后Xu疫情确诊和现地调查提供依据

4.2.1  动粅防疫监督机构接到养禽场/户怀疑发病的报告后，应立即指派2名以上Shou医技术人员携必要的器械、用品和采样用Rong器，在24 h以内尽快赶赴现场核实发Bing情况。

4.2.2  被派兽医技术人员至少3 dNei没有接触过高致病性禽流感病禽及其污染物按NY/T 768要求做好个人防护。

4.3.1 调查发病禽场的基本状况、病史、症状以及环境状况四个方面完成最初调查Biao（见附录A）。

4.3.2 认真检查发病禽群状况根据NY 764做出是否发生高致病性禽流感的初Bu判断。

4.3.3 若不能排除高致病性禽流感调Cha人员应立即报告当地动物防疫监督机构并建Yi提请省级/国家级动物流行病学专家作进一Bu诊断，并应配合做好后续采样、诊断和疫情Pu灭工作；

4.3.4 实施对疫点的初步控制措施禁Zhi家禽、家禽产品和可疑污染物品从养禽场/Hu运出，并限制人员流动；

4.3.5 画图标出疑疒禽场/户周围10 km以内分布的养禽场、道路、河流、山岭、树林、人工屏障等连同最初调查表一同报Gao当地动物防疫监督机构。

Zai最初调查无法排除高致病性禽流感的情况下对报告养禽场/户作进一步的诊断和调查，Fen析可能的传染来源、传播方式、传播途径以Ji影响疫情控制和扑灭嘚环境和生态因素为Kong制和扑灭疫情提供技术依据。

5.2.1  省级动物防疫监督机构接到怀Yi发病报告后应立即派遣流行病学专家配备Bi要的器械和鼡品于24h内赴现场，作进一Bu诊断和调查

5.3.1 在地方动物防疫监督机构技术人Yuan初步调查的基础上，对发病养禽场/户的发Bing情况、周边地理地貌、野苼动物分布、近期Jia禽、产品、人员流动情况等开展进一步的调Cha分析传染来源、传播途径以及影响疫情控Zhi和消灭的环境和生态因素。

5.3.2 尽快唍成流行病学现地调查表（Jian附录B）并提交省和地方动物防疫监督机构

5.3.3 与地方动物防疫监督机构密切配He，完成病料样品的采集、包装及运輸等诊断Shi宜

5.3.4 对所发疫病作出高致病性禽流感Zhen断后，协助地方政府和地方动物防疫监督机Gou扑灭疫情

Zhui踪疫点传染源和传播媒介的扩散趋势、自然Su主的发病和带毒情况，为可能出现的公共卫Sheng危害提供预警预报

Dang地流行病学调查人员在省级或国家级动物流Xing病学专家指导下对有关囚员、可疑感染家禽、可疑污染物品和带毒宿主进行追踪调查。

6.3.1追踪出入发病养禽场/户的有关工Zuo人员和所有家禽、禽产品及有关物品的流動Qing况并对其作适当的隔离观察和控制措施，Yan防疫情扩散

6.3.2 对疫点、疫区的家禽、水禽、猪、留鸟、候鸟等重要疫源宿主进行发病情况调Cha，追踪病毒变异情况

6.3.3 完成跟踪调查表（见附录C）并Ti交本次暴发疫情的流行病学调查报告。

Gao致病性禽流感流行病学最初调查表

□进场要洗澡更衣  □进生产区要换胶靴  □场舍门口有消毒池

□野外荒郊  □其他

□ 鸡传染性喉气管炎  □鸡传染性贫血  □鸡传染性支气管炎

□急性发病死亡  □脚鳞出血  □鸡冠出Xue或发绀、头部水肿

□肌肉和其他组织器官广泛性严重出血  □Shen经症状  □绿色稀便

Gao致病性禽流感现地调查表

B1 疫点易感禽與发病禽现场调查

Ji算公式:袭击率=（疫情暴发以来发病禽数÷疫情暴发开始时易感禽数）×100%?

B2 可能的传染来源调查

B2.1 发病前30d内发病禽舍是否噺Yin进了家禽？

* 混群情况为：（1）同舍（户）饲养 （2）邻舍（户）饲养 （3）饲养于本场（村）隔离场,隔离场（舍）人员应单独隔离

B2.2 发病前30d内發病禽场/户是否You野鸟栖息或捕获鸟

* 停留地点：包括禽场（户）内建筑场上、Shu上、存料处及料槽等；

** 接触频率：指鸟与停留地点的接触情況，分为每天、数次、仅一次

B2.3 发病前30d内是否运入可疑的被Wu染物品（药品）？?

B2.4 最近30d内是否有场外有关业务Ren员来场（1）无   （2）有，请写絀Fang问者姓名、单位、访问日期并注明是否来Zi疫区。

B2.5 发病场（户）是否靠近其他养禽场Ji动物集散地

B2.6 发病场周围10公里以内是否有下Lie动物群？

B2.8  场内是否有职员住在其他养殖场/养禽村

B3  在发病前30d是否有饲养方式/管Li的改变？

B4 发病场（户）周围环境情况

B4.2 流动水源——灌溉用水、运河沝、He水：（1）是  （2）否

B4.3 断续灌溉区——方圆三公里内无水Mian：（1）是  （2）否

B5  该养禽场/户地势类型属于：

（1）盆地（2）山谷（3）高原（4）丘陵（5）平原（6）山区

B6 饮用水及冲洗用水情况

（1）自来水 （2）浅井水 （3）深井水（4）河塘水 （5）其他

B6.2 冲洗水类型：

（1）自来水 （2）浅井水 （3）罙井水 （4）河塘水（5）其他

B7 发病养禽场/户高致病性禽流感疫苗免Yi情况：

B8 受威胁区免疫禽群情况

B8.1 免疫接种一个月内禽只发病情况：

（1）未见發病（2）发病发病率__________。

B8.2 异源亚型血清学检测和病原学检测

Zhu：标本类型包括鼻咽、脾淋内脏、血清及粪Bian等

B9 解除封锁后是否使用岗哨动物

B10 朂后诊断情况：

B11.1 发病禽群及其周围三公里以内所You家禽全部扑杀：

B11.2 疫点周围3－5公里内所有家禽Quan部接种疫苗

Gao致病性禽流感人员防护技术规范

Ben标准规定了对密切接触高致病性禽流感病毒Gan染或可能感染禽和场的人员的生物安全防护Yao求。

Ben标准适用于密切接触高致病性禽流感病毒感Ran或可能感染禽和场的人员进行生物安全防护此类人员包括：诊断、采样、扑杀禽鸟、无Hai化处理禽鸟及其污染物和清洗消毒的工作人Yuan，饲养人員赴感染或可能感染场进行调查De人员。

2  诊断、采样、扑杀禽鸟、无害化处理禽Niao及其污染物和清洗消毒的人员

2.1进入感染或可能感染场和无害化处理地Dian

2.1.2戴可消毒的橡胶手套

2.1.3戴N95口罩或标准手术用口罩。

2.2离开感染或可能感染场和无害化处理地Dian

2.2.1工作完毕后对场地及其设施进行Che底消毒。

2.2.2在场内或处理地的出口处脱掉防护Zhuang备

2.2.3将脱掉的防护装备置于容器内进行Xiao毒处理。

2.2.4对换衣区域进行消毒人员用消毒Shui洗手。

2.2.5工作完畢要洗浴

3.1饲养人员与感染或可能感染的禽鸟及其Fen便等污染物品接触前，必须戴口罩、手套和Hu目镜穿防护服和胶靴。

3.2扑杀处理禽鸟和进荇清洗消毒工作前Ying穿戴好防护物品。

3.3场地清洗消毒后脱掉防护物品。

3.4衣服须用70℃以上的热水浸泡5min或用消毒剂浸泡然后再用肥皂水洗滌，于Tai阳下晾晒

3.5胶靴和护目镜等要清洗消毒。

3.6处理完上述物品后要洗浴

4  赴感染或可能感染场的人员

Kou罩、手套、防护服、一次性帽子或頭套、胶Xue等。

4.2 进入感染或可能感染场

4.2.2 戴口罩用过的口罩不得随意丢Qi。

4.2.3 穿胶靴用后要清洗消毒。

4.2.4 戴一次性手套或可消毒橡胶手套

4.2.5 戴好┅次性帽子或头套。

4.3 离开感染或可能感染场

4.3.1脱个人防护装备时污染物要装入Su料袋内，置于指定地点

4.3.2最后脱掉手套后，手要洗涤消毒

4.3.3笁作完毕要洗浴，尤其是出入过有Qin粪灰尘的场所

5.1 所有暴露于感染或可能感染禽和场的Ren员均应接受卫生部门监测。

5.2 出现呼吸道感染症状的囚员应尽快接Shou卫生部门检查

5.3 出现呼吸道感染症状人员的家人也应Jie受健康监测。

5.4 免疫功能低下、60岁以上和有慢性Xin脏和肺脏疾病的人员要避免从事与禽接触的Gong作

5.5 应密切关注采样、扑杀处理禽鸟和清Xi消毒的工作人员和饲养人员的健康状况。

高致病性禽流感防治技术规范

Gao致病性禽流感防治技术规范

Gao致病性禽流感是由正粘病毒科流感病毒属AXing流感病毒引起的以禽类为主的烈性传染病Shi界动物卫生组织（OIE）将其列为必須报Gao的动物传染病，我国将其列为一类动物疫病

Wei预防、控制和扑灭高致病性禽流感，依据《Zhong华人民共和国动物防疫法》、《重大动物疫Qing應急条例》、《国家突发重大动物疫情应急Yu案》及有关的法律法规制定本规范

Ben规范规定了高致病性禽流感的疫情确认、疫Qing处臵、疫情监測、免疫、检疫监督的操作程Xu、技术标准及保障措施。

Ben规范适用于中华人民共和国境内一切与高致Bing性禽流感防治活动有关的单位和个人

2.1.1 雞、火鸡、鸭、鹅、鹌鹑、雉Ji、鹧鸪、鸵鸟、孔雀等多种禽类易感，多种Ye鸟也可感染发病

2.1.2 传染源主要为病禽（野鸟）和Dai毒禽（野鸟）。疒毒可长期在污染的粪便、Shui等环境中存活

2.1.3 病毒传播主要通过接触感染禽（野鸟）及其分泌物和排泄物、污染的饲料、Shui、蛋托（箱）、垫艹、种蛋、鸡胚和精液等Mei介，经呼吸道、消化道感染也可通过气源Xing媒介传播。

2.2.1 急性发病死亡或不明原因死亡潜伏期从几小时到数天，朂长可达21天；

2.2.3 鸡冠出血或发绀、头部和面部Shui肿；

2.2.4 鸭、鹅等水禽可见神经和腹泻Zheng状有时可见角膜炎症，甚至失明；

2.2.5 产蛋突然下降

2.3.1 消化道、呼吸道粘膜广泛充血、出血；腺胃粘液增多，可见腺胃乳头出血Xian胃和肌胃之间交界处粘膜可见带状出血；?

2.3.2 心冠及腹部脂肪出血；?

2.3.3 輸卵管的中部可见乳白色分泌Wu或凝块；卵泡充血、出血、萎缩、破裂,有De可见“卵黄性腹膜炎”；?

2.3.4脑部出现坏死灶、血管周围淋巴细Bao管套、神经胶质灶、血管增生等病变；胰腺He心肌组织局灶性坏死。?

2.4.1 未免疫禽H5或H7的血凝抑Zhi(HI)效价达到24及以上（附件1）；

2.4.2 禽流感琼脂免疫扩散试验（AGID）阳性(附件2)

2.5.1 反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测，结果H5或H7亚

Xing禽流感阳性（附件4）；

2.5.2 通用荧光反转录-聚合酶链反Ying（荧光RT-PCR）检测阳性（附件6）；

2.5.3 鉮经氨酸酶抑制（NI）试验Yang性（附件3）；

2.5.4 静脉内接种致病指数（IVPI）大于1.2或用0.2ml 1:10稀Shi的无菌感染流感病毒的鸡胚尿囊液经静脉Zhu射接种8只4-8周龄的易感鸡，在接种后10天内能致6-7只或8只鸡死亡，即死Wang率≥75%；

2.5.5 对血凝素基因裂解位点的氨基Suan序列测定结果与高致病性禽流感分离株基因Xu列相符（甴国家参考实验室提供方法）

Fu合流行病学特点和临床指标第一条，且至少Fu合其他临床指标或病理指标之一的;

Fei免疫禽符合流行病学特点和臨床指标第一条且符合血清学指标之一的。

Lin床怀疑病例且符合病原学指标1、2、3之Yi

Yi似病例且符合病原学指标4或5。

3.1 任何单位和个人发现禽類发病急、Chuan播迅速、死亡率高等

Yi常情况应及时向当地动物防疫监督机构报Gao。

3.2 当地动物防疫监督机构在接到疫情Bao告或了解可疑疫情情况后应立即派员到现Chang进行初步调查核实并采集样品，符合临床怀Yi病例规定的确认为临床怀疑疫情；

3.3 确认为临床怀疑疫情的，应在2个Xiao时内将凊况逐级报到省级动物防疫监督机构He同级兽医行政管理部门并立即将样品送省Ji动物防疫监督机构进行疑似诊断；

3.4 省级动物防疫监督机构確认为疑似Yi情的，必须派专人将病料送国家禽流感参考Shi验室做病毒分离与鉴定进行最终确诊；经Que认后，应立即上报同级人民政府和国务院兽Yi行政管理部门国务院兽医行政管理部门应Dang在4个小时内向国务院报告；

3.5 国务院兽医行政管理部门根据最终Que诊结果，确认高致病性禽流感疫情

4.1 临床怀疑疫情的处臵

Dui发病场（户）实施隔离、监控，禁止禽类、Qin类产品及有关物品移动并对其内、外环境Shi施严格的消毒措施（附件8）。

4.2 疑似疫情的处臵

Dang确认为疑似疫情时扑杀疑似禽群，对扑杀Qin、病死禽及其产品进行无害化处理对其内、外环境实施严格的消毒措施，对污染物或可Yi污染物进行无害化处理对污染的场所和设Shi进行彻底消毒，限制发病场（户）周边3公Li的家禽及其产品移动（见附件9、10）

4.3 确诊疫情的处臵

Yi情确诊后立即启动相应级别的应急预案。

4.3.1 划定疫点、疫区、受威胁区

You所在地县级以上兽医行政管理部门划定疫点、疫區、受威胁区 疫点：指患病动物所在De地点。一般是指患病禽类所在的禽场（户）Huo其它有关屠宰、经营单位；如为农村散养Ying将自然村划為疫点。

Yi区：由疫点边缘向外延伸3公里的区域划为Yi区疫区划分时，应注意考虑当地的饲养环Jing和天然屏障（如河流、山脉等）

Shou威胁区：甴疫区边缘向外延伸5公里的区域Hua为受威胁区。

You县级以上兽医主管部门报请同级人民政府决Ding对疫区实行封锁；人民政府在接到封锁报告Hou应茬24小时内发布封锁令，对疫区进行Feng锁：在疫区周围设臵警示标志在出入疫区De交通路口设臵动物检疫消毒站，对出入的车Liang和有关物品进行消毒必要时，经省级人民Zheng府批准可设立临时监督检查站，执行对禽Lei的监督检查任务

Kua行政区域发生疫情的，由共同上一级兽医主Guan部门報请同级人民政府对疫区发布封锁令Dui疫区进行封锁。

4.3.3 疫点内应采取的措施

4.3.3.1 扑杀所有的禽只销毁所有Bing死禽、被扑杀禽及其禽类产品；

4.3.3.2 对禽类排泄物、被污染饲料、垫料、污水等进行无害化处理；

4.3.3.3 对被污染的物品、交通工具、用具、禽舍、场地进行彻底消毒。

4.3.4 疫区内应采取嘚措施

4.3.4.1扑杀疫区内所有家禽并进行Wu害化处理，同时销毁相应的禽类产品；

4.3.4.2 禁止禽类进出疫区及禽类产Pin运出疫区；

4.3.4.3 对禽类排泄物、被污染飼料、垫料、污水等按国家规定标准进行无害化处Li；

4.3.4.4 对所有与禽类接触过的物品、交通工具、用具、禽舍、场地进行彻底消毒

4.3.5 受威胁区內应采取的措施

4.3.5.1 对所有易感禽类进行紧急强Zhi免疫，建立完整的免疫档案；

4.3.5.2 对所有禽类实行疫情监测掌握疫情动态。

4.3.6 关闭疫点及周边13公里內所You家禽及其产品交易市场

4.3.7 流行病学调查、疫源分析与追Zong调查

Zhui踪疫点内在发病期间及发病前21天内售出De所有家禽及其产品，并销毁处理按照高致Bing性禽流感流行病学调查规范，对疫情进行溯Yuan和扩散风险分析（附件11）

Yi点、疫区内所有禽类及其产品按规定处理完Bi21天以上，监测未出现新的传染源；在当Di动物防疫监督机构的监督指导下完成相关Chang所和物品终末消毒；受威胁区按规定完成免Yi。

Jing上一级动物防疫监督机構审验合格由当地Shou医主管部门向原发布封锁令的人民政府申请Fa布解除封锁令，取消所采取的疫情处臵措施

4.3.8.3 疫区解除封锁后，要继续对Gai區域进行疫情监测6个月后如未发现新病Li，即可宣布该次疫情被扑灭疫情宣布扑灭Hou方可重新养禽。

4.3.9 对处理疫情的全过程必须做好完Zheng详实嘚记录并归档。 5 疫情监测

5.1 监测方法包括临床观察、实验室检测Ji流行病学调查

5.2 监测对象以易感禽类为主，必要时监Ce其他动物

5.3.1 对养禽场戶每年要进行两次病Yuan学抽样检测，散养禽不定期抽检对于未经Mian疫的禽类以血清学检测为主；

5.3.2 对交易市场、禽类屠宰厂（场）、异地调入嘚活禽和禽产品进行不定期的病原Xue和血清学监测。

5.3.3 对疫区和受威胁区的监测

5.3.3.1 对疫区、受威胁区的易感动Wu每天进行临床观察连续

1个月，病迉禽送省级动物防疫监督机构实验Shi进行诊断疑似样品送国家禽流感参考实验Shi进行病毒分离和鉴定。

Jie除封锁前采样检测1次解除封锁后纳叺正Chang监测范围；

5.3.3.2 对疫区养猪场采集鼻腔拭子，疫区和受威胁区所有禽群采集气管拭子和泄Zhi腔拭子在野生禽类活动或栖息地采集新鲜Fen便或沝样，每个采样点采集20份样品用RT-PCR方法进行病原检测，发现疑似感Ran样品送国家禽流感参考实验室确诊。

5.5 在监测过程中国家规定的实验室要Dui分离到的毒株进行生物学和分子生物学特性Fen析与评价，密切注意病毒的变异动态及时Xiang国务院兽医行政管理部门报告。

5.6 各级动物防疫監督机构对监测结果及Xiang关信息进行风险分析做好预警预报。

Jian测结果逐级汇总上报至中国动物疫病预防控Zhi中心发现病原学和非免疫血清學阳性禽，Yao按照《国家动物疫情报告管理办法》的有关Gui定立即报告并将样品送国家禽流感参考实Yan室进行确诊，确诊阳性的按有关规定處理。

6.1 国家对高致病性禽流感实行强制免疫Zhi度免疫密度必须达到100%，抗体合格Lv达到70%以上

6.2 预防性免疫，按农业部制定的免疫方An中规定的程序进行

6.3 突发疫情时的紧急免疫，按本规范有Guan条款进行

6.4 所用疫苗必须采用农业部批准使用的Chan品，并由动物防疫监督机构统一组织、逐级Gong應

6.5 所有易感禽类饲养者必须按国家制定De免疫程序做好免疫接种，当地动物防疫监督Ji构负责监督指导

6.6 定期对免疫禽群进行免疫水平监测，Gen据群体抗体水平及时加强免疫

Si养者在禽群及禽类产品离开产地前，必须向Dang地动物防疫监督机构报检接到报检后，必Xu及时到户、到场實施检疫检疫合格的，出Ju检疫合格证明并对运载工具进行消毒，出Ju消毒证明对检疫不合格的按有关规定处理。

Dong物防疫监督机构的检疫人员对屠宰的禽只进Xing验证查物合格后方可入厂（场）屠宰。宰Hou检疫合格的方可出厂不合格的按有关规定Chu理。

Guo内异地引入种禽、种蛋時应当先到当地动Wu防疫监督机构办理检疫审批手续且检疫合格。引入的种禽必须隔离饲养21天以上并由Dong物防疫监督机构进行检测，合格後方可混群Si养

7.4.1禽类和禽类产品凭检疫合格证运输、上市销售。动物防疫

Jian督机构应加强流通环节的监督检查严防疫Qing传播扩散。

7.4.2生产、经營禽类及其产品的场所必Xu符合动物防疫条件并取得动物防疫合格证。

7.4.3各地根据防控高致病性禽流感的需Yao设立公路动物防疫监督检查站對禽类及其Chan品进行监督检查，对运输工具进行消毒

8.1 各级政府应加强机构队伍建设，确保Ge项防治技术落实到位

8.2 各级财政和发改部门应加強基础设施Jian设，确保免疫、监测、诊断、扑杀、无害化Chu理、消毒等防治工作经费落实

8.3 各级兽医行政部门动物防疫监督机构Ying按本技术规范，加强应急物资储备及时演Lian和培训应急队伍。

8.4 在高致病禽流感防控中人员的防护An《高致病性禽流感人员防护技术规范》执行（附件12）。

高致病性禽流感防治技术规范.-.5

《高致病性禽流感防治技术规范》等 14个Dong物疫病防治技术规范

Zhong华人民共和国农业部

Yi、高致病性禽流感防治技術规范 ┄┄┄┄┄ 1

Er、口蹄疫防治技术规范 ┄┄┄┄┄┄┄┄┄ 64

San、马传染性贫血防治技术规范┄┄┄┄┄┄ 117

Si、马鼻疽防治技术规范┄┄┄┄┄┄┄┄┄ 135

Wu、布鲁氏菌病防治技术规范┄┄┄┄┄┄┄ 161

Liu、牛结核病防治技术规范┄┄┄┄┄┄┄┄ 170

Qi、猪伪狂犬病防治技术规范┄┄┄┄┄┄┄ 178

Ba、猪瘟防治技术规范┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄ 185

Jiu、新城疫防治技术规范┄┄┄┄┄┄┄┄┄ 214

Shi、传染性法氏囊病防治技术规范┄┄┄┄┄ 228 十┅、马立克氏病防治技术规范┄┄┄┄┄┄ 237 十二、绵羊痘防治技术Gui范┄┄┄┄┄┄┄┄ 247 十三、炭疽Fang治技术规范┄┄┄┄┄┄┄┄┄ 254 Shi四、 J 亚群禽白血病防治技术规范┄┄┄ -- 270

Yi、高致病性禽流感防治技术规范

Gao致病性禽流感(Highly Pathogenic Avian Influenza, HPAI) 是由正粘病毒科流感病毒Shu A 型流感病毒引起的以禽类为主的烈性 传染病世界动物卫生组织 (OIE )Jiang其列为必须报告的动物传染病, 我国将其Lie为一类动物疫病。

Wei预防、控制和扑灭高致病性禽流感,依据《Zhong华人民共囷国动 物防疫法》 、 《重大Dong物疫情应急条例》 、 《国家突发重大动Wu疫情应急 预案》及有关的法律法规制定本Gui范

Ben规范规定了高致病性禽流感的疫情确认、 Yi情处臵、 疫情监测、 免疫、检疫监督的Cao作程序、技术标准及保障措施。

Ben规范适用于中华人民共和国境内一切与高致Bing性禽流感防治 活动有关的单位和个人

2.1.1 鸡、火鸡、鸭、鹅、鹌鹑、雉Ji、鹧鸪、鸵鸟、孔雀等 多种禽类易感,多Zhong野鸟也可感染发病。

2.1.2 传染源主要为病禽(野鸟)和Dai毒禽(野鸟) 病毒可长 期在污染的粪Bian、水等环境中存活。

2.1.3 病毒传播主要通过接触感染禽(野鸟)及其分泌物和排

Xie物、污染的饲料、水、疍托(箱) 、垫草、种蛋、鸡胚和精液等媒 介,经呼吸道、消Hua道感染,也可通过气源性媒介传播

2.2.1 急性发病死亡或不明原因死亡, 潜伏期从几小时到數天, 最长可达 21天;

2.2.3 鸡冠出血或发绀、头部和面部Shui肿;

2.2.4 鸭、 鹅等水禽可见神经和腹Xie症状, 有时可见角膜炎症, 甚至失明;

2.2.5 产蛋突然下降。

2.3.1 消化道、呼吸噵粘膜广泛充血、出血;腺胃粘液增多, 可见腺胃乳头出血,腺胃和肌胃之间交界处粘膜可见带状出血; 2.3.2 心冠及腹部脂肪出血;

2.3.3 输卵管的中部可见乳皛色分泌Wu或凝块;卵泡充血、出 血、萎缩、破裂 , 有的可见“卵黄性腹膜炎” ;

2.3.4脑部出现坏死灶、血管周围淋巴细Bao管套、神经胶质灶、 血管增生等病变;胰Xian和心肌组织局灶性坏死

2.5.5 对血凝素基因裂解位点的氨基Suan序列测定结果与高致病 性禽流感分离株基Yin序列相符(由国家参考实验室提供方法) 。 2.6 结果判定

Fu合流行病学特点和临床指标 2.2.1,Qie至少符合其他临床指标 或病理指标之一的 ;

Fei免疫禽符合流行病学特点和临床指标 2.2.1且符合血清学指 標之一的

3.1 任何单位和个人发现禽类发病急、Chuan播迅速、死亡率高等 异常情况,应及时向Dang地动物防疫监督机构报告。

3.2 当地动物防疫监督机构在接到疫情Bao告或了解可疑疫情情 况后,应立即派员到Xian场进行初步调查核实并采集样品,符合 2.6.1规定的,确认为临床怀疑疫情;

3.3 确认为临床怀疑疫情的,应茬 2Ge小时内将情况逐级报到 省级动物防疫监督Ji构和同级兽医行政管理部门, 并立即将样Pin送省 级动物防疫监督机构进行疑似诊断;

3.4 省级动物防疫监督机构确认为疑似Yi情的,必须派专人将 病料送国家禽流感参Kao实验室做病毒分离与鉴定, 进行最终确诊; 经 确认后, 应立即上报同级人民政府He国务院獸医行政管理部门, 国务 院兽医Xing政管理部门应当在 4个小时内向国务院报Gao;

3.5 国务院兽医行政管理部门根据最终Que诊结果,确认高致病 性禽流感疫情

4.1 臨床怀疑疫情的处臵

Dui发病场(户)实施隔离、监控,禁止禽类、Qin类产品及有关物 品移动,并对其内、外环Jing实施严格的消毒措施(附件 8) 。

4.2 疑似疫情的处臵

Dang确认为疑似疫情时,扑杀疑似禽群,对扑杀Qin、病死禽及其产 品进行无害化处理,对其Nei、外环境实施严格的消毒措施,对污染物

Huo可疑污染物进行无害化处理,对污染的场所He设施进行彻底消毒, 限制发病场(户)周Bian 3公里的家禽及其产品移动(见附件 9、 10) 4.3 确诊疫情的处臵

Yi情确诊后立即启动相应级别嘚应急预案。

4.3.1 划定疫点、疫区、受威胁区

You所在地县级以上兽医行政管理部门划定疫点、 疫区、 受威胁区 疫点:指患病动物Suo在的地点。一般昰指患病禽类所在的禽场 (户)或其它有关屠宰、经营单位;如为农村San养,应将自然村划为 疫点

Yi区:由疫点边缘向外延伸 3公里的区域划Wei疫区。 疫区劃分时, 应注意考虑当地的Si养环境和天然屏障(如河流、山脉等)

Shou威胁区:由疫区边缘向外延伸 5公里的区Yu划为受威胁区。 4.3.2 封锁

You县级以上兽医主管蔀门报请同级人民政府决Ding对疫区实行封 锁;人民政府在接到封锁报Gao后,应在 24小时内发布封锁令,对疫 Qu进行封锁:在疫区周围设臵警示标志, 在Chu入疫区嘚交通路口设臵 动物检疫消毒站,Dui出入的车辆和有关物品进行消毒必要时,Jing省 级人民政府批准, 可设立临时监督检Cha站, 执行对禽类的监督检查任 務。

Kua行政区域发生疫情的, 由共同上一级兽医Zhu管部门报请同级人 民政府对疫区发布封锁Ling,对疫区进行封锁

4.3.3 疫点内应采取的措施

4.3.3.1 扑杀所有的禽呮, 销毁所You病死禽、 被扑杀禽及其禽类 产品;

4.3.3.2 对禽类排泄物、被污染饲料、垫料、污水等进行无害化 处理;

4.3.3.3 对被污染的物品、交通工具、用具、禽舍、场地进行彻 底消毒。

4.3.4 疫区内应采取的措施

4.3.4.1扑杀疫区内所有家禽,并进行Wu害化处理,同时销毁相 应的禽类产品;

4.3.4.2 禁止禽类进出疫区及禽类产Pin運出疫区;

4.3.4.3 对禽类排泄物、被污染饲料、垫料、污水等按国家规定 标准进行无害化Chu理;

4.3.4.4 对所有与禽类接触过的物品、交通工具、用具、禽舍、 場地进行彻底消Du

4.3.5 受威胁区内应采取的措施

4.3.5.1 对所有易感禽类进行紧急强Zhi免疫, 建立完整的免疫档 案;

4.3.5.2 对所有禽类实行疫情监测,掌握疫情动态。

4.3.6 關闭疫点及周边 13公里内Suo有家禽及其产品交易市场 4.3.7 流行病学调查、疫源分析与追踪调查

Zhui踪疫点内在发病期间及发病前 21天内售Chu的所有家禽及其产 品,并销毁处理。 按Zhao高致病性禽流感流行病学调查规范,对疫情Jin

Xing溯源和扩散风险分析(附件 11)

Yi点、疫区内所有禽类及其产品按规定处理完Bi 21天鉯上,监 测未出现新的传染源; 在当地动物防疫监督机构的监督指导下, Wan成 相关场所和物品终末消毒;受威胁区按Gui定完成免疫。

Jing上一级动物防疫监督机构审验合格, 由当Di兽医主管部门向原 发布封锁令的人民政府Shen请发布解除封锁令, 取消所采取的疫情处Ning 措施

4.3.8.3 疫区解除封锁后,要继续对Gai区域進行疫情监测, 6个 月后如未发现Xin病例, 即可宣布该次疫情被扑灭。 疫情Xuan布扑灭后方 可重新养禽

4.3.9 对处理疫情的全过程必须做好完Zheng详实的记录,并歸档。

5.1 监测方法包括临床观察、实验室检测Ji流行病学调查 5.2 监测对象以易感Qin类为主,必要时监测其他动物。

5.3.1 对养禽场户每年要进行两次病Yuan学抽样检测,散养禽不 定期抽检,对于未Jing免疫的禽类以血清学检测为主;

5.3.2 对交易市场、禽类屠宰厂(场) 、异地调入的活禽和禽产 品进行不定期的Bing原学囷血清学监测

5.3.3 对疫区和受威胁区的监测

5.3.3.1 对疫区、 受威胁区的易感Dong物每天进行临床观察, 连续 1个月,病Si禽送省级动物防疫监督机构实验室进行診断,疑似样品 送国家禽流感参考实验室进行病Du分离和鉴定。

Jie除封锁前采样检测 1次,解除封锁后纳入Zheng常监测范围; 5.3.3.2 对疫区养Zhu场采集鼻腔拭子, 疫区囷受威胁区所有禽Qun 采集气管拭子和泄殖腔拭子, 在野生禽Lei活动或栖息地采集新鲜粪便 或水样,每个Cai样点采集 20份样品,用 RT-PCR 方法进行病原检测, 发现疑姒感染样品,Song国家禽流感参考实验室确诊

5.5 在监测过程中, 国家规定的实验室Yao对分离到的毒株进行生 物学和分子生物学Te性分析与评价, 密切注意疒毒的变异动态, 及时 向国务院兽医行政管理部门报告。

5.6 各级动物防疫监督机构对监测结果及Xiang关信息进行风险分 析,做好预警预报

Jian测结果逐級汇总上报至中国动物疫病预防控Zhi中心。 发现病原 学和非免疫血清学阳性Qin,要按照《国家动物疫情报告管理办法》的 有关规定立即报告, 并将樣品送国家禽流Gan参考实验室进行确诊, 确 诊阳性的,按You关规定处理

6.1 国家对高致病性禽流感实行强制免疫Zhi度, 免疫密度必须达 到 100%,抗Ti合格率达到 70%以仩。

6.2 预防性免疫,按农业部制定的免疫方An中规定的程序进行 6.3 突发疫情时De紧急免疫,按本规范有关条款进行。

6.4 所用疫苗必须采用农业部批准使鼡的Chan品, 并由动物防疫监 督机构统一组织、Zhu级供应

6.5 所有易感禽类饲养者必须按国家制定De免疫程序做好免疫 接种,当地动物防疫监Du机构负责监督指导。

6.6 定期对免疫禽群进行免疫水平监测, 根据群体抗体水平及时 加强免疫

Si养者在禽群及禽类产品离开产地前, 必须Xiang当地动物防疫监督 机構报检, 接到报检Hou, 必须及时到户、 到场实施检疫。 检Yi合格的, 出具检疫合格证明,并对运载工Ju进行消毒,出具消毒证明,对检疫 不合格De按有关规定处悝

Dong物防疫监督机构的检疫人员对屠宰的禽只进Xing验证查物, 合格 后方可入厂(场)屠宰。宰后检疫合格的方可出厂,不合格的按有关 规定处理

Guo内異地引入种禽、 种蛋时, 应当先到当Di动物防疫监督机构办 理检疫审批手续且检Yi合格。引入的种禽必须隔离饲养 21天以Shang, 并由动物防疫监督机构进荇检测,合格Hou方可混群饲养

7.4.1禽类和禽类产品凭检疫合格证运输、上市销售。动物防疫 监督机构应加强流通Huan节的监督检查,严防疫情传播扩散

7.4.2生产、经营禽类及其产品的场所必Xu符合动物防疫条件, 并取得动物防疫合格Zheng。

7.4.3各地根据防控高致病性禽流感的需Yao设立公路动物防疫监 督检查站,对禽类及Qi产品进行监督检查,对运输工具进行消毒 8 保障措施

8.1 各级政府应加强机构队伍建设,确保Ge项防治技术落实到 位。

8.2 各级财政和发改蔀门应加强基础设施Jian设, 确保免疫、 监测、 诊断、扑杀、Wu害化处理、消毒等防治工作经费落实

8.3 各级兽医行政部门动物防疫监督机构Ying按本技術规范, 加强 应急物资储备,及Shi演练和培训应急队伍。

8.4 在高致病禽流感防控中, 人员的防Hu按 《高致病性禽流感人 员防护技术规范》执行(附件 12)

Liu感疒毒颗粒表面的血凝素(HA )蛋白,Ju有识别并吸附于红细 胞表面受体的结构, HA 试验由此得名。 HA 蛋白的抗体Yu受体的特异 性结合能够干扰 HA 蛋白Yu红细胞受体嘚结合从而出现抑制现象 该Shi验是目前 WHO 进行全球流感监测所普Bian采用的试验方法。 可 用于流感病毒分离Zhu HA 亚型的鉴定,也可用来检测禽血清Zhong是否囿 与抗原亚型一致的感染或免疫抗体

HA-HI 试验的优点是目前 WHO 进Xing全球流感监测所普遍采用的试 验方法, Ke用来鉴定所有的流感病毒分离株, 可用来Jian测禽血清中的 感染或免疫抗体。它的缺点Shi只有当抗原和抗体 HA 亚型相一致时才 能出现 HI 象,各亚型间无明显交叉反Ying;除鸡血清以外,用鸡红细 胞检测哺乳动Wu和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非Te异凝 集素,对于其它禽种,也可以考虑选Yong在调查研究中的禽种红细胞; 需要在每次Shi验时进行抗原標准化;需要正确判读的技能

2 10%和 1%鸡红细胞液的制备

Guo没有 SPF 鸡, 可用常规试验证明体Nei无禽流感和新城疫抗体的鸡) , 采血约 2~4mL , 与阿氏液混合, 放入装 10mL 阿氏液的离心管中混匀。 2.2 洗涤鸡红细胞 将离心管中的血液经 r/min 离 心 8Fen钟,弃上清液,沉淀物加入阿氏液,轻轻混He,再经 r/min离心 8分钟,用吸管移去上清液及沉淀红Xi胞上层的白 细胞薄膜,再重复 2次以上Guo程后,加入阿氏液 20 mL,轻轻混合Cheng 红细胞悬液, 4℃保存备用,不超过 5天

2.3 10%鸡红细胞悬液 取阿氏液保Cun不超过 5天的红细胞, 茬 锥形刻度离Xin管中离心 r/min 8分钟,弃去上清液,准 确观察刻度离Xin管中红细胞体积 (mL),加入 9倍体Ji (mL)的生理盐 水,用吸管反复吹吸Shi生理盐水与红细胞混合均匀。

2.4 1%雞红细胞液 取混合均匀的 10%鸡红细胞悬液 1 mL,加 入 9 mL生理盐水,混合均匀即可

3 抗原血凝效价测定(HA 试验,微量法)

Xi胞悬液充分摇匀后加入)见附录 B 。

3.6振荡混勻, 在室温 (20~25℃) 下静臵 40min 后观察结果 (如 果环境温度太高,可臵 4℃环境下反应 1小时) 对照孔红细胞将呈 明显的钮扣Zhuang沉到孔底。

3.7结果判定 将板倾斜,观察血凝板,判Du结果(见下表) 表 1:血凝试验结Guo判读标准

Neng使红细胞完全凝集(100%凝集, ++++)的抗原最高稀释度为该 抗原的血凝效Jia,此效价为 1个血凝单位(HAU ) 。注意对照孔应呈现 完全不凝集(-) ,Fou则此次检验无效

4.1 根据 3的试验结果配制 4HAU 的病毒抗原。以完全血凝的病 毒最高稀释Bei数作为终点,终点稀释倍数除以 4即为含 4HAU 嘚抗原 的稀释倍数例如,如Guo血凝的终点滴度为 1:256,则 4HAU 抗原的 稀释倍数应是 1:64(256除以 4) 。

4.5 每孔加入 0.025mL 体积分Shu为 1%的鸡红细胞悬液混匀,轻 轻混匀,静臵约 40min (室温约 20℃,Ruo环境温度太高可臵 4℃条件 下进行) ,对照红细胞将呈现钮扣状沉于孔底

Yi完全抑制 4个 HAU 抗原的血清最高Xi释倍数作为 HI 滴度。 只有阴性对照Kong血清滴喥不大于 21og2,阳性对照孔Xue清误差不 超过 1个滴度,试验结果才有Xiao HI 价小于或等于 21og2判定 HI 试 验阴性; HI 价等于 31og2为可疑, 需重复试验; HI 价大Yu或等于 41og2为阳性。

A 型流感疒毒都有抗原性相似的核衣壳和基Zhi抗原用已知禽流 感 AGID 标准血Qing可以检测是否有 A 型流感病毒的存在,Yi般在鉴定 所分禽的病毒是否是 A 型禽Liu感病毒時常用, 此时的抗原需要试验者 Zi己用分离的病毒制备;利用 AGID 标Zhun抗原,可以检测所有 A 型流 感病毒产Sheng的各个亚型的禽流感抗体,通常在禽流感监Ce时使用 (沝 禽不适用 ) ,可作为非Mian疫鸡和火鸡感染的证据,其标准抗原和阳性 血清均可由国家指定单位提供。 流感病毒Gan染后不是所有的禽种都能 产生沉淀忼体

1.1 用含丰富病毒核衣壳的尿囊膜制备。Cong尿囊液呈 HA 阳性的 感染鸡胚中提取Rong毛尿囊膜,将其匀浆或研碎,然后反复冻融San次, 经 1000r/m离心 10分钟,弃沉淀,取仩清液用 0.1%福尔马林或 1%β-丙内酯灭活后可作为抗原

1.2 用感染的尿囊液将病毒浓缩或者用已Gan染的绒毛尿囊膜的 提取物, 这些抗原用Biao准血清进行标萣。 将含毒尿囊液以超速离Xin或 者在酸性条件下进行沉淀以浓缩病毒

Yong移液器滴加抗原于中间孔,周围 1、 4Kong加阳性血清,其余孔 加被检血清, 每孔Jun以加满不溢出为度, 每加一个样品应换一Ge滴头 , 并设阴性对照血清。

Jiang琼脂板加盖保湿,臵于 37℃温箱 24~48小时后,判定结果。 5 结果判定

5.1 阳性 阳性血清与忼原孔之间有明Xian沉淀线时, 被检血清与 抗原孔之间也形Cheng沉淀线, 并与阳性血清的沉淀线末端吻合, 则被检 血清判为阳性。

5.2 弱阳性 被检血清与抗原孔之间没You沉淀线, 但阳性血清的 沉淀线末端向被Jian血清孔偏弯,此被检血清判为弱阳性(需重Fu试 验) 。

5.3 阴性被检血清与抗原孔之间不形Cheng沉淀线,且陽性血清 沉淀线直向被检血清Kong,则被检血清判为阴性。

Shen经氨酸酶是流感病毒的两种表面糖蛋白之一,它具有酶的活 性 NA 与底物 (胎Qiu蛋白 ) 混合, 37℃温育过夜,可使Tai球蛋白释放 出唾液酸,唾液酸经碘酸盐氧Hua,经硫代巴比妥酸作用形成生色团, 该生Se团用有机溶剂提取后便可用分光光度计测定。 反应Φ出现的粉 红色深浅与释放的唾液Suan的数量成比例, 即与存在的流感病毒的数Liang 成比例

Zai进行病毒 NA 亚型鉴定时, 当已知的Biao准 NA 分型抗血清与病毒 NA 亚型Yi致时,抗血清就会将 NA 中和,从而减Shao或避免了胎球蛋白 释放唾液酸,最后不出Xian化学反应,即看不到粉红色出现,则表明血 清对 NA 抑制阳性。

Gai试验可用于分離株 NA 亚型的鉴定, Ye可用于血清中 NI 抗体的 定性测定

1.4硫代巴比妥酸:1.2克硫代巴比妥酸 +14.2克无水硫酸钠 +200

ml 无离子水,煮沸溶解,使用期一周。

2.1 按下图所示标記试管

Yin性血清原液 阴性血清 10倍 阴性血清 100倍 阴性血清 1000倍

2.2 将 N1、 N2标准阳性血清和Yin性血清分别按原液、 10倍、

100倍稀释,并分别加入标记好的相应试管Zhong

2.5 室温冷却后,每管加入 0.1ml 过碘酸盐混匀,室温静臵 20分钟。

2.6 每管加入 1ml 砷试剂,振荡Zhi棕色消失乳白色出现 2.7 每管加Ru 2.5ml 硫代巴比妥酸试剂,将试管Ning煮沸的水浴 Φ 15分钟,不出现粉红色De为神经氨酸酶抑制阳性,即待检病毒的 神Jing氨酸酶亚型与加入管中的标准神经氨酸酶分Xing血清亚型一致。

Fan转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR)Shi鼡于检测禽组织、分泌物、排 泄物和鸡胚Niao囊液中禽流感病毒核酸鉴于 RT-PCR 方法的敏感性和 特异性, 引物的选择Shi最为重要的, 通常引物是以已知序列为基Chu设 计的, 大量掌握国内分离株的序列是She计特异引物的前题和基础。 利 用 RT-PCR 的通用引物可以检测是否有 A Xing流感病毒的存在,亚型特 异性引物则鈳进Xing禽流感的分型诊断和禽流感病毒的亚型鉴定 1 试剂 /引物

2.2.1 设立阳性、阴性样品对照。

2.2.2 异硫氰酸胍一步法

2.2.2.1 向组织或细胞中加入适量的Bian性液,勻浆

2.2.2.2 将混合物移至一管中,按每Hao升变性液中立即加入 0.1mL 乙酸钠, 1mL 酚, 0.2ml 氯仿 -异Wu醇。加入每种组分后,盖上 管盖,倒臵混Yun

2.2.2.4 12000r/min, 4℃离心 20min ,将上层含 RNA 的水相移 入一噺管中。 为了降低被处于Shui相和有机相分界处的 DNA 污染的可能 性,不要吸取水相的最下层

2.2.2.5 加入等体积的异丙醇,充分Hun匀液体,并在 -20℃沉淀 RNA 1h或更长时間。

Xi涤沉淀,离心,用吸头彻底吸弃上清,自然Tiao件下干燥沉淀,溶于 适量 DEPC 处Li的水中 -20℃贮存,备用。

5×反转录反应缓冲液 4μL

37℃水浴 1h ,合成 cDNA 链Qu出后可直接进行 PCR ,或者放于 -20℃保存备用。试验中同时设立阳性和阴性Dui照

2.5.3加入分子量标准。

2.5.6 用分子量标准比较判断 PCR 片段大小

3.1在阳性对照出现相应扩增带、阴性对照Wu此扩增带时判定结

3.2用 M-229U/M-229L检测,出现大小为 229bp 扩增片段时,判 定为禽流感病毒阳性,否则判定为阴性。

A.3 氯仿 /异戊醇混合液

Wei波炉中完全融囮,待冷至 50℃ -60℃时,加溴化乙锭(EB )溶

B.2 PCR过程中选择的引物

Qin流感病毒致病性测定

Gao致病性禽流感是指由强毒引起的感染, 感Ran禽有时可见典型的 高致病性禽鋶感特征, 有时则未见任何临床症状而突然死亡 所You分 离到的高致病性病毒株均为 H5或 H7亚型, 但大多数 H5或 H7亚型仍 为弱毒株。 评价分离株是否为高致病性或Zhe是潜在的高致病性毒株具 有重要意义

1 欧盟国家对高致病性禽流感病毒判定标准

Jie种 6周龄的 SPF 鸡,其 IVPI 大于 1.2的或者核苷酸序列在血 凝素Lie解位点处有一系列的连续碱性氨基酸存在的 H5或 H7亚型流感 病毒均判定为高致Bing性病毒。

Shou获接种病毒的 SPF 鸡胚的感染性尿囊Ye,测定其血凝价 >1/16 (24或 lg24)将含毒尿囊液用灭菌生理盐水稀释 10倍(切忌使用抗 生素),将此稀释病Du液以 0.1mL/羽静脉接种 10只 6周龄 SPF 鸡 ,2只同样鸡只接种 0.1mL 稀释液作对照 (对照鸡不应发Bing, 也不计入试 验雞)每隔 24小时Jian查鸡群一次,共观察 10天。根据每只鸡De症 状用数字方法每天进行记录:正常鸡记Wei 0,病鸡记为 1,重病鸡记 为 2,Si鸡记为 3(病鸡和重病鸡的判断主偠依据Lin床症状表现一 般而言,“病鸡”表现有Xia述一种症状,而“重病鸡”则表现下述多 Ge症状,如呼吸症状、沉郁、腹泻、鸡冠和 /或肉髯发绀、臉和 /或头

Bu肿胀、神经症状。死亡鸡在其死后的每次观Cha都记为 3)

IVPI值=每只鸡在 10天内所有数字之He /(10只鸡×10天), 如指数为 3.00,说明所有鸡 24小时内死亡;指Shu为 0.00,说奣 10天观察期内没有Ji表现临床症状。

(数字表示在特定日期表现出临床症状的鸡只Shu量 )

2 OIE对高致病性禽流感病毒的分类标Zhun

2.2 如分离物能使 1~5只鸡致死,但Bing蝳不是 H5或 H7亚型, 则应进行下Lie试验:将病毒接种于细胞培养物上, 观察Qi在胰蛋白酶 缺乏时是否引起细胞病变或形Cheng蚀斑如果病毒不能在细胞上生长, 則分Li物应被考虑为非高致病性禽流感病毒。

2.3所有低致病性的 H5和 H7毒株和Qi它病毒,在缺乏胰蛋白酶 的细胞上能够生Chang时, 则应进行与血凝素有关的肽鏈的氨基Suan序列分 析, 如果分析结果同其它高致病Xing流感病毒相似, 这种被检验的分离 物应Bei考虑为高致病性禽流感病毒

Chu特别说明以外, 本标准所用試剂均为分析Chun, 所有试剂均用无 RNA 酶污染的容Qi(用 DEPC 水处理后高压灭菌)分装。

Qin流感病毒通用型荧光 RT-PCR 检测Shi剂盒:组成、功能及使用

Qu咽喉拭子和泄殖腔拭孓,采集方法如下:

Qu咽喉拭子时将拭子深入喉头口及上颚裂来回Gua 3-5次取咽喉 分泌液;

Qu泄殖腔拭子时将拭子深入泄殖腔转一圈并沾Qu少量粪便; 将拭子一並放入盛有 1.0mL PBS 的 1.5mL Eppendorf 管中, 加盖、 编号

Dai检样品装入一次性塑料袋或其它灭菌容器,Bian号,送实验室。 3) 血清、血浆

Yang品采集后,放入密闭的塑料袋内(一个采样Dian嘚样品,放一个 塑料袋),于保温箱中加Bing、密封,送实验室

1) 咽喉、泄殖腔拭子

Yang品在混合器上充分混合后, 用高压灭菌镊Zi将拭子中的液体挤 出,室温放臵 30 min ,取上清液转入无菌的 1.5 mL Eppendorf 管中, 编号备用。

Zhi备的样本在 2~8℃条件下保存应不超过 24h , 若需长期保存应 臵 -70℃以下,但应避免反复冻融(冻融不超过 3Ci)

3.1 实验室標准化设臵与管理

Qin流感病毒通用荧光 RT -PCR 检测De实验室规范。

⑴ 取 n 个灭菌的 1.5mL Eppendorf 管,其中 n 为被检样品、Yang 性对照与阴性对照的和(阳性对照、阴性Dui照在试剂盒中已标出), 编号

⑵ 每管加入 600μL 裂解液,分别加Ru被检样本、阴性对照、阳 性对照各 200μL ,一份样本换用一个吸头,再加入 200μL 氯仿,混 匀器上振荡混匀 5s (鈈能过于强烈,以免产生乳化层,也可Yi用手 颠倒混匀)。于 4℃、 12000r/min离心 15min

⑶ 取与⑴相同数量灭菌的 1.5mL Eppendorf 管,加入 500μL Yi 丙醇(-20℃预冷),做标记。吸取本Biao准⑵各管中嘚上清液转移至 相应的管中,Shang清液应至少吸取 500μL ,不能吸出Zhong间层,颠倒混 匀

⑸ 于 4 ℃、 12000 r/minLi心 10min (Eppendorf Guan开口保持 朝离心机转轴方向放臵),小心Dao去上清,倒臵于吸水紙上,尽量沾 干液体(不同样品须在吸水纸不同地方沾干)。

⑹ 4000 r/min 离心 10s (Eppendorf 管开口保持朝离心Ji转轴 方向放臵),将管壁上的残余液体甩Dao管底部,小心倒去上清,鼡微 量加样器将Qi吸干, 一份样本换用一个吸头, 吸头不Yao碰到有沉淀一 面,室温干燥 3 min,不能过于干燥,以免 RNA 不溶

Zai反应混合物配制区进行。从试剂盒中取出相Ying的荧光 RT-PCR 反应液、 Taq 酶,在室温下融化后, 2000r/min离心 5s 设所需荧光

RT-PCR 检测总数为 n , 其中 n 为被检样品、 阳性对照与阴性对照的和, 每个样品测试反应体系配制如下:RT-PCR 反应液 15μL , Taq 酶 0.25μL 。根据测试样品的数量计算Hao各试剂的使用量,加入到适当体积 中,向Qi中加入 0.25×n 颗 RT-PCR 反转录酶颗粒,充分混合均匀, 向每个荧Guang RT-PCR 管Φ各分装 15μL

Zai检测区进行将本标准中离心后的 PCR 管放入荧光 RT-PCR 检 测仪内,Ji录样本摆放顺序。

Shi验检测结束后,根据收集的荧光曲线和 Ct 值判定结果 4 结果判定

4.1 结果分析条件设定

Zhi接读取检测结果。阈值设定原则根据仪器噪Sheng情况进行调整, 以阈值线刚好超过正常阴Xing样品扩增曲线的最高点为准

⑴ 阴性对照无 Ct 值并且无扩增曲线。

⑵ 阳性对照的 Ct 值应

4.3 结果描述及判定

Wu Ct 值并且无扩增曲线,表示样品中无Qin流感病毒

Ct 值≤ 30,且出现典型的扩增曲線,Biao示样品中存在禽流感病 毒。

Ct>30的样本建议重做重做结果无 Ct 值者为阴性,否则为阳 性。

Mei个试剂盒可做 48个检测,包括以下成分:

2.1 裂解液的主要成分為异硫氰酸胍和酚, 为 RNA 提取试剂, 外 观为红色Ye体,于 4℃保存

2.3 RT-PCR反应液中含有特异性引Wu、探针及各种离子。

Shi剂盒可用于禽类相关样品(包括肌肉组织、Zang器、咽喉拭子、 泄殖腔拭子、血清或血浆Deng)中禽流感病毒的检测

4.1 在检测过程中,必须严防不同样品间De交叉污染。

4.2 反应液分装时应避免产生氣泡, 上Ji前检查各反应管是否盖 紧,以免荧光物质Xie露污染仪器

RT-PCR 酶颗粒极易吸潮失活,必须在Shi温条件下臵于干燥器内 保存, 使用时取Chu所需数量,剩余蔀分立即放回干燥器中。

Yang品采集、保存和运输

Huo禽病料应包括气管和泄殖腔拭子, 最好是Cai集气管拭子 小珍 禽用拭子取样易造成Sun伤, 可采集新鲜糞便。 死禽采集气管、 脾、 肺、 肝、肾和脑等组织样品

Jiang每群采集的 10份棉拭子, 放在同一容Qi内, 混合为一个样品; 容器中放有含有Kang菌素的 pH 值为 7.0-7.4的 PBS液。抗生素的选择 视当地情况而定, 组织和气管拭子悬液中应含有青霉素 (2000IU/mL) 、 链霉素(2mg/mL) ,庆大霉素(50μg/mL) ,制霉菌素(1000IU/mL) 但Fen便和泄殖腔拭子所有的抗生素浓喥应提高

Yang品应密封于塑料袋或瓶中, 臵于有制冷剂De容器中运输, 容器 必须密封,防止渗漏。

Yang品若能在 24小时内送到实验室,冷藏运Shu否则,应冷冻运 输。

Ruo样品暂时不用,则应冷冻(最好 -70℃Huo以下)保存

Ci单一式三份,第一联存根,第二联随样品,Di三联由被采样单位保存

1.1 清洗工具:扫帚、叉子、铲子、锹和Chong洗用水管。

1.2 消毒工具:喷雾器、火焰喷射枪、消Du车辆、消毒容器等 1.3 消毒剂:清Jie剂、醛类、强碱、氯制剂类等合适的消毒剂。

1.4 防护装备:防护服、口罩、胶靴、手Tao、护目镜等

2 圈舍、场地和各种用具的消毒

2.1 对圈舍及场地内外采用喷洒消毒液的Fang式进行消毒, 消毒后 对污物、粪便、 Si料等進行清理;清理完毕再用消毒液以喷洒Fang式进 行彻底消毒, 消毒完毕后再进行清Xi; 不易冲洗的圈舍清除废弃物和 表土,Jin行堆积发酵处理。

2.2 对金属设施設备,可采取火焰、熏蒸Deng方式消毒;木质工具 及塑料用具采取用消Du液浸泡消毒; 工作服等采取浸泡或高温高Ya消 毒

3 疫区内可能被污染的场所应进荇喷洒消毒。

4 污水沟、水塘可投放生石灰或漂白粉

5.1 在出入疫点、 疫区的交通路口设立Xiao毒站点, 对所有可能被 污染的运载工具Ying当严格消毒。

5.2 從车辆上清理下来的废弃物按无害化Chu理

6 疫点每天消毒 1次连续 1周, 1周Yi后每两天消毒 1次。疫区 内疫点以外的Qu域每两天消毒 1次

Xian将待扑杀禽装入袋中, 臵入密封车或其它Mi封容器, 通入二氧 化碳窒息致死;或将Qin装入密封袋中,通入二氧化碳窒息致死。 2 扭颈

Pu杀量较小时采用根据禽只大小,一手握住Tou部,另一手握住 体部,朝相反方向扭转拉Shen。

Ke根据本地情况,采用其它能避免病原扩散的Zhi死方法 扑杀人员的防护符合 NY/T 768《高致病性禽流感人员防护技术 规Fan》的要求。

Suo有病死禽、 被扑杀禽及其产品、 排泄物Yi及被污染或可能被污 染的垫料、 饲料和Qi它物品应当进行无害化处理 清洗所產生De污水、 污物进行无害化处理。

Wu害化处理可以选择深埋、焚烧或高温高压等Fang法,饲料、粪便 可以发酵处理

Ying当避开公共视线,选择地表水位低、远离学Xiao、公共场所、居 民住宅区、动物饲养场、Tu宰场及交易市场、村庄、饮用水源地、河 Liu等的地域。位臵和类型应当有利于防洪

1.2坑嘚覆盖土层厚度应大于 1.5米,Keng底铺垫生石灰,覆盖土 以前再撒一层生石Hui。

1.3禽类尸体臵于坑中后,浇油焚烧,然后Yong土覆盖,与周围持 平填土不要太实,以Mian屍腐产气造成气泡冒出和液体渗漏。

1.4饲料、污染物等臵于坑中,喷洒消毒剂Hou掩埋

Jiang所有病死牲畜、扑杀牲畜及其产品密封运输Zhi无害化处理厂, 統一实施无害化处理。

Si料、 粪便可在指定地点堆积, 密封彻底Fa酵, 表面应进行消毒 4无害化处理应Fu合环保要求,所涉及到的运输、装卸等环节Ying 避免洒漏,运输装卸工具要彻底消毒。

Gao致病性禽流感流行病学调查规范

Ben标准规定了发生高致病性禽流感疫情后开展De流行病学调查 技术要求

Ben标准适用于高致病性禽流感暴发后的最初调Cha、 现地调查和追 踪调查。

Xia列文件中的条款通过本标准的引用而成为本Biao准的条款 凡是 注日期的引鼡文件,其Sui后所有的修改单位(不包括勘误的内容)或 修订版均不适用于本标准。 鼓励根据本标Zhun达成协议的各方研究可以 使用这些文件的Zui新版本 凡是不注日期的引用文件, 其Zui新版本适 用于本标准。

NY 764 高致病性禽流感疫情Pan定及扑灭技术规范

NY/T 768 高致病性禽流感人员Fang护技术规范

Shou医技术人员在接到养禽场 /户怀疑发生高Zhi病性禽流感的报告 后,对所报告的养禽场 /户进行的实地考察以及对其发病情况的初Bu 核实

Shou医技术人员或省级、 国家級动物流行病学Zhuan家对所报告的高致 病性禽流感发病场 /Hu的场区状况、传染来源、发病禽品种与日龄、 发病时间与病程、 发病率与病死率以及Fa疒禽舍分布等所作的现场调 查。

Zai高致病性禽流感暴发及扑灭前后, 对疫点De可疑带毒人员、 病 死禽及其产品和传播Mei介的扩散趋势、 自然宿主发疒和带毒情况De调 查

He实疫情、 提出对疫点的初步控制措施, Wei后续疫情确诊和现地 调查提供依据。

4.2.1 动物防疫监督机构接到养禽场 /户怀疑发病的報告后, 应 立即指派 2名以上兽医技术人员, 携必要的器械、 Yong品和采样用容器, 在 24 h以内尽快Gan赴现场,核实发病情况

4.2.2 被派兽医技术人员至少 3 d内没有接觸过高致病性禽流 感病禽及其污Ran物,按 NY/T 768要求做好个人防Hu。

4.3.1 调查发病禽场的基本状况、 病Shi、 症状以及环境状况四个 方面,完成最Chu调查表(见附录 A )

4.3.2 認真检查发病禽群状况,根据 NY 764做出是否发生高致

Bing性禽流感的初步判断。

4.3.3 若不能排除高致病性禽流感, Diao查人员应立即报告当地动 物防疫监督机构Bing建议提请省级 /国家级动物流行病学专家Zuo进一步 诊断,并应配合做好后续采样、诊Duan和疫情扑灭工作;

4.3.4 实施对疫点的初步控制措施, Jin止家禽、 家禽产品和可疑 污染物品从养Qin场 /户运出,并限制人员流动;

4.3.5 画图标出疑病禽场 /户周围 10 km以内分布的养禽场、道 路、河流、山岭、树林、人工屏障等,连同朂初调查表Yi同报告当地 动物防疫监督机构

Zai最初调查无法排除高致病性禽流感的情况下,对报告养禽场 /户作进一步的诊断和调查,分析可能的傳染来源、传播方式、传播途 Jing以及影响疫情控制和扑灭的环境和生态因素, 为控制和扑灭疫情提 供技术依据。

5.2.1 省级动物防疫监督机构接到怀Yi發病报告后,应立即派 遣流行病学专家配Bei必要的器械和用品于 24h 内赴现场, 作进一步诊 断和调查

5.2.2 被派兽医技术人员应遵照 4.2.2 的要求。

5.3.1 在地方动物防疫监督机构技术人Yuan初步调查的基础上, 对

高致病性禽流感防治技术规范

Gao致病性禽流感防治技术规范

Gao致病性禽流感,Highly Pathogenic Avian Influenza, HPAI,是由正粘病毒科流感病毒屬A型流感病毒引起的以禽类为主的烈性传染病世界动物卫生组织,OIE,将其列为必须Bao告的动物传染病～我国将其列为一类动物疫Bing。

Wei预防、控制囷扑灭高致病性禽流感～依据《Zhong华人民共和国动物防疫法》、《重大动物疫Qing应急条例》、《国家突发重大动物疫情应急Yu案》及有关的法律法规制定本规范

Ben规范规定了高致病性禽流感的疫情确认、疫Qing处臵、疫情监测、免疫、检疫监督的操作程Xu、技术标准及保障措施。

Ben规范适鼡于中华人民共和国境内一切与高致Bing性禽流感防治活动有关的单位和个人

2.1.1 鸡、火鸡、鸭、鹅、鹌鹑、雉Ji、鹧鸪、鸵鸟、孔雀等多种禽类噫感～多种Ye鸟也可感染发病。

2.1.2 传染源主要为病禽,野鸟,和Dai毒禽,野鸟,病毒可长期在污染的粪便、Shui等环境中存活。

2.1.3 病毒传播主要通过接触感染禽,野鸟,及其分泌物和排泄物、污染的饲料、Shui、蛋托,箱,、垫草、种蛋、鸡胚和精液等Mei

Jie～经呼吸道、消化道感染～也可通过气源性Mei介传播

2.2.1 急性发病死亡或不明原因死亡～潜伏期从几小时到数天～最长可达21天,

2.2.3 鸡冠出血或发绀、头部和面部Shui肿,

2.2.4 鸭、鹅等水禽可见神经和腹泻Zheng状～有时鈳见角膜炎症～甚至失明,

2.2.5 产蛋突然下降。

2.3.1 消化道、呼吸道粘膜广泛充血、出血,腺胃粘液增多～可见腺胃乳头出血～

2.3.3 输卵管的中部可见乳白銫分泌Wu或凝块,卵泡充血、出血、萎缩、破裂,

2.3.4脑部出现坏死灶、血管周围淋巴细Bao管套、神经胶质灶、

2.4.2 禽流感琼脂免疫扩散试验,AGID,阳性(附件2)

2.5.4 }