我现在在做克隆实验首先我提卻了RNA，然后RT-PCR得到目的基因我将我的目的基因直接与表达载体连接，可是连了三次转了三次，都得不到克隆我的表达载体是pIRES2-EGFP。有人用過这个质粒么克隆实验，一定要先把目的基因连在克隆载体上然后再连表达载体么？请大家指点！谢谢！Attached is the introduction of pIRES2-EGFP. Hope

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大家好请问pIRES2-EGFP这个质粒，为什么MCS里的HindIII位点不是单酶切位点在IRES这个片段里也有一处可以被hindIII酶切，同样的情况也发生在KpnI上还请帮忙解答，谢谢

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