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为何CTAB法提取的DNA总是断裂？
最近一直提取的植物总DNA总是断裂，使用的是自己配制的溶液，用改良的CTAB法，提取过程已经很小心了，没有剧烈震荡，可是总是提到断裂的DNA 是什么原因呢？下图是我提的DNA 跑的0.8%琼脂糖凝胶电泳！急希望各位虫虫帮忙解答！
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涓嶆槸锛わ籍锛℃柇瑁傦紝鏄噺涓嶅ぇ锛岋疾锛肌娌℃秷鍖栵紝澶浜嗐備笂闈㈡槸锛わ籍锛★紝涓嬮潰鍒嗗瓙閲忓皬鐨2-3鏉″甫鏄疾锛肌锛岀敤锛诧籍ase娑堝寲涓涓嬪氨涓嶄細鏈変簡銆傚彟澶栵紝锛わ籍锛℃矇娣鍚庯紝rpm绂诲績鍗冲彲銆 不是DNA断裂，是RNA没消化。上面的一条带是DNA，下面2-3条带是RNA，RNase消化一下就没有了。另外DNA沉淀后用rpm离心就可以了。 : Originally posted by shuishui007 at
不是DNA断裂，是RNA没消化。上面的一条带是DNA，下面2-3条带是RNA，RNase消化一下就没有了。另外DNA沉淀后用rpm离心就可以了。 谢谢，那我加RNA酶是一下！ 我感觉也有可能是你的组织有降解，因为你这个下面条带太亮了 : Originally posted by jl860822 at
我感觉也有可能是你的组织有降解，因为你这个下面条带太亮了 请问溶菌酶加多了会造成DNA断裂吗？我是提取革兰氏阳性菌，但是也跟楼主一样，最上面的条带暗，下面有两条很亮的条带。 : Originally posted by jl860822 at
我感觉也有可能是你的组织有降解，因为你这个下面条带太亮了 那怎么防止降解呢？我提了8,9次都差不多是这样的，我该怎么继续下去呢？ 楼主没见你带marker啊~好歹带个marker看看大概都是多大的片段啊~是不是你沉淀不够彻底哦，感觉大片段量挺少的~你加乙醇沉淀的时候有看到絮状沉淀么？
你提基因组DNA，不断裂是不可能的~不然你说几兆的片段跑出来是什么样子…只能说是断到某个程度比如几十K上百K而已。如果你觉得你的东西断得太厉害了，那有可能是你酚抽振摇的时候太厉害了，或者是SDS处理的时候弄太久了等等原因。一般溶菌酶那一步不大会有问题。 : Originally posted by weigh1111 at
楼主没见你带marker啊~好歹带个marker看看大概都是多大的片段啊~是不是你沉淀不够彻底哦，感觉大片段量挺少的~你加乙醇沉淀的时候有看到絮状沉淀么？
你提基因组DNA，不断裂是不可能的~不然你说几兆的片段跑出来是 ... 由于当时没有MARKER了，加乙醇的时候能见到絮状沉淀，可是提了两周左右一直都是这样啊！使用CTAB提的枇杷叶DNA，因为后续要做甲基化所以要纯的，但是一会提不好啊！所以帮忙看看啊! : Originally posted by 下雨的傍晚 at
那怎么防止降解呢？我提了8,9次都差不多是这样的，我该怎么继续下去呢？... 你的组织怎么保存的？-80比较好点 : Originally posted by 下雨的傍晚 at
由于当时没有MARKER了，加乙醇的时候能见到絮状沉淀，可是提了两周左右一直都是这样啊！使用CTAB提的枇杷叶DNA，因为后续要做甲基化所以要纯的，但是一会提不好啊！所以帮忙看看啊!... 加乙醇有絮状沉淀说明有DNA，不少，而且片段长度也不算短~
之后溶在水里面还是TE里面？-20还4度保存的？ : Originally posted by weigh1111 at
加乙醇有絮状沉淀说明有DNA，不少，而且片段长度也不算短~
之后溶在水里面还是TE里面？-20还4度保存的？... TE中溶解的，是4度保存，这是昨天提的结果更差！昨天是加大CTAB裂解液的量为5ml,之前是1ml !帮帮忙啊！
IMG_828.jpg : Originally posted by jl860822 at
你的组织怎么保存的？-80比较好点... 有时是新采的，有时是在-20度保持一天或两天的《不过一直都是用的成熟叶片，因为现在没有嫩叶！ CTAB适用于多数的植物。
枇杷叶的成分里是不是多糖之类的很多？你可以搜索比较下多糖多酚类的植物提取方法。一般来说DNA很容易提取的。
实在不行你用试剂盒试试。总的来说我觉得研磨样品是关键，要足够细，但是不能又不能降解。 : Originally posted by 西农种子 at
CTAB适用于多数的植物。
枇杷叶的成分里是不是多糖之类的很多？你可以搜索比较下多糖多酚类的植物提取方法。一般来说DNA很容易提取的。
实在不行你用试剂盒试试。总的来说我觉得研磨样品是关键，要足够细，但是不 ... 是的，含糖和酚较多，所以我把CTAB的量加到3%,4%，PVP2%，巯基乙醇2%，研磨这块我没有液氮只能在冰上磨，磨得挺细的了！试剂盒，没试过不过问过人家都说还是CTAB法比较好用。 : Originally posted by 下雨的傍晚 at
有时是新采的，有时是在-20度保持一天或两天的《不过一直都是用的成熟叶片，因为现在没有嫩叶！... 但是小片段挺多，你试试RNA酶消化一下 琵琶是比较难提取的。建议在提取的过程中利用酚氯仿多抽屉两次，最后溶解DNA的时候加RNA37度处理半个小时。 对了，你无水乙醇弄出絮状沉淀之后，用牙签或者枪头给挑出来到一管70%乙醇里面洗一下？这样可以排除掉很多非DNA的杂质~ : Originally posted by weigh1111 at
对了，你无水乙醇弄出絮状沉淀之后，用牙签或者枪头给挑出来到一管70%乙醇里面洗一下？这样可以排除掉很多非DNA的杂质~ 好的，试一下!谢谢！ : Originally posted by jl860822 at
但是小片段挺多，你试试RNA酶消化一下... 我的DNA药保存好久，后续操作还要摸索很久，样品多个，加RNA酶的话会影响DNA的稳定吗？植物叶片DNA提取失败的原因是什么,提了两次都没结果①取鲜叶、干叶分别加入0.03 gPVP于研钵中,用液氮将研钵预冷,将除去叶脉的叶片放入研钵中,加入液氮将叶片快速研磨至粉末状,迅速转移_百度作业帮
植物叶片DNA提取失败的原因是什么,提了两次都没结果①取鲜叶、干叶分别加入0.03 gPVP于研钵中,用液氮将研钵预冷,将除去叶脉的叶片放入研钵中,加入液氮将叶片快速研磨至粉末状,迅速转移
植物叶片DNA提取失败的原因是什么,提了两次都没结果①取鲜叶、干叶分别加入0.03 gPVP于研钵中,用液氮将研钵预冷,将除去叶脉的叶片放入研钵中,加入液氮将叶片快速研磨至粉末状,迅速转移至1.5ml离心管中,加入冰浴的CTAB缓冲液600ul,混匀,冰浴10min,在4℃、5000 r/min下离心10min,收集沉淀;③在沉淀中加入65℃预热CTAB裂解液600ul混匀,65℃水浴30~40 min,中间轻柔振荡3次;④在溶液中加入5 mol/L KAc 1 ml,混匀,冰浴20⑤加入600ul氯仿∶异戊醇=24∶1,轻柔颠倒混匀,乳化10min,于20℃、12 000 r/min下离心10 min,吸取上清液,转入新离心管中;⑥重复⑤1次.对以上方法所得溶液300ul分别加入60ul的3 mol/LNaAc及600ul-20℃预冷的无水乙醇,混匀,冰上沉淀30于室温12 000 r/min下离心10min,弃去上清液,将沉淀转入1.5ml离心管中;用75%乙醇漂洗5min,重复1次,再用无水乙醇漂洗5 min,沉淀置于室温下干燥至无酒精味;加入100μlTE溶解沉淀,进行DNA纯化或放入-20℃冰箱备用.
不知是什么植物的叶片,小量法用CATB提取显得繁琐了.看了操作步骤,觉得CATB用冰浴不太合适,因为CATB在温度低于15°C时会结晶析出；其次如果叶片中没有过多多糖,为什么要用醋酸钾.建议：小量法采用SDS法就可以,析出的DNA团,用tip头挑出或低端代沟细玻璃管勾出,就比较纯了,做酶切或分子标记,一般没有问题.还有个原因就是DNA降解,这是操作问题,需要注重操作细节.
冰浴的是缓冲液，里面没有CTAB，提取的是草本科植物，因为富含多糖等杂志，醋酸甲是想沉淀蛋白质跟多糖的，操作问题应该不大，裂解液才有家CTAB的，我想问下，加入裂解液和缓冲液的时候，震荡时间会不会影响很大，还有氯仿/异戊醇不按等体积加，就是试管只有1.5毫升，所以少加了一百微升左右，影响大不大？
震荡时间不会有太大影响，即使剧烈震荡或震荡时间过长，也会有主带和弥散带，不至于什么也没有，氯仿/异戊醇加入量少可能会有影响。既然是多糖植物，CTAB/KAC/PVP配合使用应该没有问题，但我总觉的KAC浓度有点高，而且酶清除不彻底，要不你换个10mL管子提，样品和提取液用量相应放大，第四步，加入KAC后，终浓度为1mol/L，室温轻轻混匀，不要冰浴，接着加入等体积酚仿，离心取上清后，加入氯仿∶异戊醇再提一次。后面的步骤没看出有什么问题。
谢谢啦，可以试一下>>焦点事件
植物DNA提取试剂盒，说明书
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CAT#:RSCAT#:RS&植物DNA提取试剂盒植物DNAoutPlant&DNAout& &使用手册&&&&植物DNA提取试剂盒&&&&&&产品及特点& &植物DNAout&是根据经典的方法改良得到的专门用于提取新鲜或冷冻植物组织基因组DNA(包括叶绿体DNA和线粒体DNA)的试剂盒。1.&操作快速，&整个过程在30分钟内即可完成。2.&纯度高，A260/A280在1.9左右，&可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。提取得到的DNA大小在30-50Kb之间。3.&产率高，高于大多数同类产品(尤其是基于离心柱的提取产品)。4.&安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。& &规格及成分& & 成&&&份100次包装250次包装溶液A80&mL200ml溶液B40&mL100mlRNase&A溶液(10mg/mL)&1.5&mL3.75ml使用手册1份1份&& &运输及保存& &常温运输及保存，RNase&A溶液4℃保存，有效期一年。& &自备试剂& &氯仿、异丙醇、75%乙醇、TE& &&植物DNA提取试剂盒使用方法& &注意：溶液A和溶液B容易产生沉淀，溶液B比较粘稠，用前均需要放置在65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分摇匀。1.&65℃预热溶液A，待其沉淀溶化后，充分混匀，取0.75&mL加入到10-15&mL塑料离心管（常用于培养细菌用）中并放置于65℃待用。2.&称取植物组织0.1-0.3g左右，剪成微小的碎片，转移到装有溶液A的离心管中短暂匀浆。匀浆过程中将产生大量泡沫，属于正常现象。也可以液氮研磨后将粉末加入到预热的溶液A中(建议不要在陶器或玻璃研钵中破碎细胞，因为其中的主要成分二氧化硅会非特异地吸附DNA，降低DNA回收量。但可以在塑料研钵中研磨)。3.&将匀浆液(包括植物碎片)全部转移到新的1.5mL塑料离心管中。注意：匀浆液较为粘稠，可将1&mL枪头剪去一截后用于转移匀浆液，不能吸取的植物碎片可倒入。4.&在匀浆液中加入0.5倍体积&65℃预热的溶液B，颠倒数次混匀。由于溶液B比较粘稠，可以将1&mL&枪头剪去一截再吸取。5.&加入15&μL的RNase&A溶液（10&mg/mL）。6.&65℃放置3-5分钟。如果室温放置，DNA产量会降低10-20%。7.&加入200&μL自备氯仿，震荡器上充分震荡混匀30秒。8.&&g室温离心2分钟，此时两相交界面将有白色膜状物，小心转移上清液到一个新的1.5&mL塑料离心管中，避免触及中间层的白膜。9.&加入1倍体积(约750&μL)的自备的异丙醇到上清液中，盖紧盖子后用手上下颠倒30秒混匀。此时一般将有絮状DNA沉淀出现。10.&&g室温离心3分钟。此时管底将有微小DNA沉淀，小心弃上清，注意不要G弃DNA沉淀。11.&在离心管中加1&mL&75%乙醇，短暂震荡，&g室温离心3分钟，弃上清。12.&重复上述操作一次。13.&短暂离心，小心吸弃残留的液体（此步不要省略，否则残留的液体含乙醇将会影响DNA电泳、酶切和PCR等反应），室温晾干。14.&加入50-100&μL自备的TE缓冲液充分溶解DNA沉淀。直接取5-10&μL电泳检测DNA，其余放冰箱备用。& &
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京ICP备号-2考点：DNA的粗提取和鉴定
分析：1、DNA粗提取和鉴定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精；DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性．（2）DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色．2、DNA粗提取和鉴定的过程：（1）实验材料的选取：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大．（2）破碎细胞，获取含DNA的滤液：动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可．如果实验材料是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细胞膜．例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液．（3）去除滤液中的杂质：方案一的原理是DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA；方案三的原理是蛋白质和DNA的变性温度不同．方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离．（4）DNA的析出与鉴定：①将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等、冷却的酒精溶液，静置2～3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA．用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分．②取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解．然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂．混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝．
解：A、向溶解DNA的NaCl溶液中加蒸馏水的目的是析出DNA，A错误；B、DNA和杂质分子在95%的冷酒精中溶解度存在差异，DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精，B正确；C、提取植物细胞DNA时需在研钵中加入洗涤剂和氯化钠等试剂，其中洗涤剂可能瓦解细胞膜，氯化钠可溶解DNA，C正确；D、提取动物细胞DNA时可用鸡血细胞与蒸馏水混合后用玻璃棒搅拌，使细胞破裂释放DNA分子，D正确．故选：A．
点评：本题考查DNA的粗提取和鉴定，对于此类试题，需要考生注意的细节较多，如要求考生识记DNA粗提取和鉴定的原理、实验步骤及各步骤中的细节、实验采用的试剂及试剂的作用等，需要考生在平时的学习过程中注意积累．
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科目：高中生物
叶绿体是植物进行光合作用的场所．下列关于叶绿体结构与功能的叙述，正确的是（　　）
A、CO2的固定过程发生在基质中B、叶绿体内膜向内折叠增大膜面积C、只有叶绿素能吸收光能D、叶绿体中的色素主要分布在类囊体腔内
科目：高中生物
如图为不同生物或生物不同器官（细胞）的DNA分子中的比值情况，据图回答问题：（1）猪的不同组织细胞的DNA分子碱基比例大致相同，原因是． （2）上述三种生物中的DNA分子，热稳定性最强的是 ．（3）假设小麦DNA分子中A=1.2，那么=．（4）假如猪的某一DNA分子中有腺嘌呤30%，则该分子一条链上鸟嘌呤含量的最大值可占此链碱基总数的 ．
科目：高中生物
下列关于人体稳态调节的叙述中，错误的是（　　）
A、下丘脑对人体水的平衡、体温的相对恒定、血糖稳定都有调节作用B、T细胞在体液免疫和细胞免疫中都能识别抗原、分裂分化为效应细胞和记忆细胞C、内环境的渗透压升高会刺激下丘脑分泌的抗利尿激素增加D、受抗原刺激后的B淋巴细胞，细胞周期变短，核糖体活动加强
科目：高中生物
NaCl的物质的两浓度为多少时，DNA的溶解度最低（　　）
A、0.12mol/LB、0.13mol/LC、0.14mol/LD、0.15mol/L
科目：高中生物
某生态学家对某池塘生态系统的营养结构和能量流动情况进行了调查，图甲表示含有大量藻类、底层水草及挺水植物（芦蒿、香莲）的新型池塘生态系统模式图．图乙中a～d表示藻类和鲢鱼能量流动过程中不同去向能量的相对值．（1）根据图甲回答①②两个问题．①与香莲竞争最激烈的生物是；人占有个营养级．②在人工影响下，池塘的物种逐渐丰富，其群落演替类型是；如果鱼类大量死亡，分解者的数量变化情况是．（2）若图乙中c1=a2+b2+c2+d2，则从藻类到鲢鱼的能量传递效率为（用字母表示）．（3）某科研小组为探究植物光合作用速率的变化情况，设计了由透明的玻璃罩构成的小室（如图A示）①将该装置放在自然环境下，测定夏季一昼夜小室内植物氧气释放速率的变化，得到如图B所示曲线，那么影响小室内植物光合作用速率变化的主要环境因素是；装置刻度管中液滴移到最右点是在一天中的点．②在实验过程中某段光照时间内，记录液滴的移动，获得以下数据：每隔20分钟记录一次刻度数据…24293234…该组实验数据是在B曲线的段获得的．③如果要测定该植物真正光合作用的速率，该如何设置对照实验？如何处理实验数据？对照实验：．数据处理：．
科目：高中生物
在下列物质中，属于人体内环境组成成分的是（　　）①血红蛋白&②葡萄糖&③二氧化碳&④钠离子&⑤血浆蛋白&⑥呼吸酶&⑦消化酶．
A、①②③④⑤B、①④⑤⑥⑦C、②③④⑤D、②③④⑤⑥
科目：高中生物
下列有关线粒体和叶绿体的叙述，错误的是（　　）
A、线粒体和叶绿体都含有遗传物质B、线粒体和叶绿体为双层膜结构，其内膜中酶的种类相同C、线粒体内膜向内折叠形成嵴，叶绿体类囊体堆叠形成基粒D、蓝藻没有叶绿体不能进行光合作用
科目：高中生物
在正常生理状态下，下列物质中不属于人体内环境成分的是（　　）
A、葡萄糖B、有氧呼吸酶C、血红蛋白D、血浆蛋白植物总DNA的提取_图文_百度文库
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植物总DNA的提取
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