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······β-Actin抗体是Western Blot很好的内参指数,是啥意思?β-Actin在整个Western Blot的作用是什么?而且能不能详细介绍下Western Blot的抗体了?本人刚学这个,不懂,望高人指导,不胜感激._百度作业帮
β-Actin抗体是Western Blot很好的内参指数,是啥意思?β-Actin在整个Western Blot的作用是什么?而且能不能详细介绍下Western Blot的抗体了?本人刚学这个,不懂,望高人指导,不胜感激.
β-Actin抗体是Western Blot很好的内参指数,是啥意思?β-Actin在整个Western Blot的作用是什么?而且能不能详细介绍下Western Blot的抗体了?本人刚学这个,不懂,望高人指导,不胜感激.
描述有问题.抗体检测的是抗原,所以你检测的是β-Actin做western很重要的一点就是要有一个参照,比如你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达,甚至它的变化（比如对某个细胞因子的反应）,这时β-Actin起到几个作用：1、如果目的蛋白检测不到而且β-Actin也检测不到,那么你的体系有问题,因为β-Actin是看家基因编码的,理论上是100％检测到的；2、如果目的蛋白检测不到但β-Actin检测到,说明目的蛋白没有表达或者量很低；3、作为看家基因,β-Actin被认为表达水平不受其它因素影响,是比较稳定的.当细胞接受细胞因子刺激后,目的蛋白的量在参考β-Actin的量后可能发生变化,这时β-Actin还起到一个半定量的作用.所谓内参就是内部参照的意思.－－Western的抗体通常分为一抗和二抗,一抗结合目的蛋白,这是Western变化最多的地方；二抗则比较通用,商品很成熟,二抗带有荧光或者酶标记,它是结合一抗的,但却是得到结果的重要试剂.这种方法属于间接标记.Western很少有直接标记的方法.
β-Actin是管家基因，在不同细胞中均有表达。用其作为内参，是指在western实验中通过内参的含量的多少来调整样品之间的上样量，相当于作为标准曲线的作用，只有调整样品的上样量使得内参的含量一致才能比较不同蛋白间表达量的差别。western使用的抗体视个人所需不同，可以是兔抗、羊抗、鼠抗，做之前要先查阅相关资料...月度关注热点
【求助】western blot 中跑胶考染后发现条带弥散?
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western blot 中跑胶考染后发现条带弥散?
是加样量太大了或每个孔道都加样了靠的太近了?
可后来我大大减少了加样量跑出的条带还是弥散的厉害,跟边上的孔道条带连在一块了
是不是胶的问题呢?要不要增大分离胶的浓度呢?原因呢?
不吝赐教!!!查看完整版本请点击这里：
iii_ii ( 13:47:51)
是马上取出来的 然后就染的
zhenxin ( 13:48:08)
这种情况我们实验室遇见过，是因为胶凝的不充分不均匀导致蛋白弥散。胶要充分的凝固，我们是放在恒温37度至少半小时；再想一想AP的配置时间是否过期了，引起胶凝固的不充分；加样后是否立即加电压跑电用，如果加样时间长而没有跑电泳，也会出现蛋白弥散。个人见解！祝好运！！！
8princess8 ( 13:48:26)
我觉得：1、凝胶凝固的不够充分（可能时间不够或者，如果室温较低需要更长时间，还有看看配胶的试剂是不是时间太长了）；2、电极缓冲液是否使用次数过多，一般使用两次就需要，如必要一次一换最好
8princess8 ( 13:48:44)
还有如果可以，先固定一下看看
iii_ii ( 13:49:00)
真是谢谢大家!!!
再请问,AP代指什么呢
u234 ( 13:49:23)
western blot 中跑胶考染后发现条带弥散?
是加样量太大了或每个孔道都加样了靠的太近了?
可后来我大大减少了加样量跑出的条带还是弥散的厉害,跟边上的孔道条带连在一块了
是不是胶的问题呢?要不要增大分离胶的浓度呢?原因呢?
不吝赐教!!!
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不知你说的弥散在纵向上是否也存在。
楼上的战友推测可能是胶凝固的不充分。也
可能是其中的一个原因吧。
我做的经验是，配5ml的分离胶，加TEMED
5ul,AP 50ul,2ml的浓缩胶，TEMED 2ul,AP 20ml.分离胶
凝固时间为8-10分钟，浓缩胶5分钟。电泳结果无影响。
针对你的弥散情况，试试延长蛋白煮沸后的离心时间。
再有就是稍微加大一下凝胶的浓度。可能会有所改善。
8princess8 ( 13:49:45)
AP应该说的是过硫酸胺吧（APP）
INK ( 13:50:34)
是不是样品的pH有问题吧，如果偏酸的话，可能会有这样的情况产生。
胶一定要凝结充分，分离胶缓冲液重新配过试试看。
kuaizige ( 13:50:50)
1 可能是你的PH有问题，检测一下；
2 你Loading Buffer里和电泳缓冲液里放的SDS足量吗？如果忘记放或者量不够也会出现这个问题；
3 也可能是你胶凝固的问题，多凝固点时间，上样后马上加电压跑电泳（上样后不马上跑也会扩散）。
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western blot 出现的结果中条带怎样分析
提问者采纳
利用样本目的蛋白的光密度比内参照基因条带的光密度，比较不同样本的相对表达率。
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其他2条回答
用Image J软件中的条带灰度分析，很简单的
点个预染marker，看看大小是否正确，WB结果情况很多，描述一下才能帮你分析啊
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出门在外也不愁western blot中条带呈弥散状是怎么回事
不清晰，很弥散，看不见主条带
09-07-04 &匿名提问
western blot 印迹方法，又称为免疫印记，是将获得的蛋白质样品通过sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳，对不同分子量的蛋白质进行分离，并通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印至固相支持物（nc膜或pvdf 膜）上，用抗靶蛋白的非标记抗体（一抗）与转印后膜上的靶蛋白进行特异性结合，再与经辣根过氧化物酶标记（偶联）的二抗结合，最后用ecl超敏发光液试剂检测。如果转印膜上含有靶蛋白，经x 光片曝光、 显影后，则会在x-光片上出现特异性蛋白条带。您留个邮箱,资料可以给您发过去,或者登陆普利莱,查询技术电话,直接咨询也可以.
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