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一次性普通营养琼脂平板保存方法对空气采样结果影响
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平板涂布要等到琼脂凝固到什么程度啊
最近开始做微生物，听说涂布法比倒平板法好，所以用平板法，第一次涂布时我等琼脂凝固七八成时加100ul涂布，结果琼脂被涂破了，第二次我等了1h后去涂布，琼脂比较结实，没涂破，结果涂完后，等30min去取时，发现琼脂表面有菌液在移动，像没有被琼脂吸收一样，这该怎么办呀，我怕一倒置，菌液都流到培养皿盖了。望有经验的人指导下啊！菌液要减少用量吗，还是说不要琼脂太凝固了才接种？那样的话一涂布琼脂就花了呀
我一般半开盖，等到雾气不变多开始涂… 等平板凝固完全之后再涂，要不然会破。菌液当然也是不能太多的，最好是能够涂均匀整块平板，一边涂一边计时，一分钟能干就好。不能吹干，因为菌液集中会长成几个微生物长在一起，分不开，所以最好是一直涂到干才停。 灭菌后可以先把培养基放到60度水浴锅里，等温度降下来再倒平板，凝固的时候可以半开盖，防止在顶部凝结水珠，凝没凝固肉眼可以看出来的，凝固后就可以涂布了，反复涂，转着涂，涂完了就翻过来了
不过个人认为计数的话，还是倒平板比较好 我一般将倒完的平板放在培养箱中检菌一晚上，然后再涂板，这样没有水珠，而且涂布时候也非常容易将菌涂匀 可以到完平板以后半打开培养皿的盖&&放在超净台中通风&&涂布玩了以后 先不要倒置&&在培养箱中方1-2小时&&然后再倒置培养 : Originally posted by hotchange at
我一般半开盖，等到雾气不变多开始涂… 这样会不会污染啊? : Originally posted by jayzhao520 at
灭菌后可以先把培养基放到60度水浴锅里，等温度降下来再倒平板，凝固的时候可以半开盖，防止在顶部凝结水珠，凝没凝固肉眼可以看出来的，凝固后就可以涂布了，反复涂，转着涂，涂完了就翻过来了
不过个人认为计数的 ... 确实，上面有一层水珠，我就是老怕污染，所以都不敢打开盖子啊，下次试试你说的，100ul应该不算多吧，你一般涂多少啊，谢谢！ 我一般只涂20ul，100有点多了，很难干 : Originally posted by 胡小喜 at
这样会不会污染啊?... 不会啊，在酒精灯旁操作一般没问题… : Originally posted by 冼亮淀粉酶 at
等平板凝固完全之后再涂，要不然会破。菌液当然也是不能太多的，最好是能够涂均匀整块平板，一边涂一边计时，一分钟能干就好。不能吹干，因为菌液集中会长成几个微生物长在一起，分不开，所以最好是一直涂到干才停。 倒板子要在超净工作台里面进行，等到不烫手的时候再倒，产生的雾气和水珠很少，而且把盖子打开一半。凝固很快的，不到10分钟就好了。如果雾气还很多，可以放到培养箱里孵育上30min-1h。新倒的板子就是不好凃干，涂得时间稍微长一点，如果在冰箱（4度）放上3天左右，不到30S就干了。板子容易涂破，一是你的琼脂加少了或者板子倒的太薄、太厚。二是你涂得手法不太好，时间长了就好了。我们一般200ML里加3g琼脂。300ML倒7-8个板子（90的） 涂布当然要小心，别把琼脂弄破了。至于培养基要干到什么程度，只要它干了就行，多用L行涂布棒涂布。 : Originally posted by 胡小喜 at
确实，上面有一层水珠，我就是老怕污染，所以都不敢打开盖子啊，下次试试你说的，100ul应该不算多吧，你一般涂多少啊，谢谢！... 我也涂过100微升，可以涂干的，涂一会转90度，四个方向涂 50ul就差不多了，琼脂在40度以下就凝固了，如果容易破，你可以把琼脂的量加多一点，这样就不容易破了，我一般会把琼脂量加到2.4% : Originally posted by wanglei512 at
倒板子要在超净工作台里面进行，等到不烫手的时候再倒，产生的雾气和水珠很少，而且把盖子打开一半。凝固很快的，不到10分钟就好了。如果雾气还很多，可以放到培养箱里孵育上30min-1h。新倒的板子就是不好凃干，涂 ... 300ML倒7-8个板子（90的）
:jok:也倒得太多了吧，一般90的 一个倒15到20毫升就足够吧 我觉得你可以倒完平板把盖子半开着，在超净台中吹风，半个小时后直接涂布，这样的话100ul很快可以涂干 建议将所用涂布液配浓一点，减少涂布液体积，同时，涂布后适当等待后再倒置 建议将所用涂布液配浓一点，减少涂布液体积，同时，涂布后适当等待后再倒置 我一般是100ml的培养基倒5个板，一个板里加80微升的菌液进行涂布
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＞＞＞牛肉膏蛋白胨培养基中加入琼脂这一理想的凝固剂，下列关于琼脂的..
牛肉膏蛋白胨培养基中加入琼脂这一理想的凝固剂，下列关于琼脂的说法不正确的是
A．不被所培养的微生物分解利用，对所培养的微生物无毒害作用B．在微生物生长温度范围内保持固体状态C．琼脂凝固点低，利于微生物的生长D．琼脂在灭菌过程中不会被破坏，透明度好，凝固力强
题型：单选题难度：偏易来源：同步题
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据魔方格专家权威分析，试题“牛肉膏蛋白胨培养基中加入琼脂这一理想的凝固剂，下列关于琼脂的..”主要考查你对&&微生物的实验室培养&&等考点的理解。关于这些考点的“档案”如下：
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因为篇幅有限，只列出部分考点，详细请访问。
微生物的实验室培养
微生物的实验室培养：1．培养基的概念、种类及营养构成 (1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。 (3)营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。2．无菌技术 (1)关键：防止外来杂菌的入侵。(2)具体操作 ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。(3)消毒和灭菌
3、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。4、接种方法：平板划线法和稀释涂布法。（1）平板划线操作：①挑取他含菌样品：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量菌种。②划A区：将平板倒置于煤气（酒精）灯旁,左手拿出皿底并尽量使平板垂直于桌面，有培养基一面向着煤气灯（这时皿盖朝上，仍留在煤气灯旁)，右手拿接种环先在A区划3—4条连续的平行线(线条多少应依挑菌量的多少面定）。划完A区后应立即烧掉环上的残菌，以免因菌过多而影响后面各区的分离效果。在烧接种环时，左手持皿底并将其覆盖在皿盖上方(不要放入皿盖内)，以防止杂菌的污染。③划其他区：将烧去残菌后的接种环在平板培养基边缘冷却一下，并使B区转到上方，接种环通过A区（菌源区）将菌带到B区，随即划数条致密的平行线。再从B区作C区的划线。最后经C区作D区的划线，D区的线条应与A区平行，但划D区时切勿重新接触A、B区，以免极该两区中浓密的菌液带到D区，影响单菌落的形成。随即将皿底放入皿盖中。烧去接种环上的残菌。④等平板凝固后，将平板倒置。（2）稀释涂布法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。能够测定样品中活菌数的方法是：稀释涂布平板法。纯化大肠杆菌的无菌操作和菌种保存： 1．大肠杆菌 (1)特性：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。 (2)用途：是基因工程技术中被广泛采用的工具。 2．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 (1)计算：依据是培养基配方的比例。 (2)称量：牛肉膏比较黏稠，可同称量纸一块称取。牛肉膏和蛋白胨易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。 (3)溶化：牛肉膏和称量纸+水加热取出称量纸→加蛋白胨和氯化钠→加琼脂（注意：要不断用玻璃棒搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂）→补加蒸馏水至100mL。 3.纯化大肠杆菌（1）方法 ①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。 ②稀释涂布平板法：将骏业进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。（2）鉴定：将接种后的培养基和一个未接种的培养基（对照组）都放入到37℃恒温箱中，培养12h和24h后，分别观察并记录结果。 （3）菌种保存
知识点拨：1、无菌技术操作原则：（1）操作前准备：①操作环境应清洁、宽敞、定期消毒；物品布局合理；无菌操作前半小时应停止清扫工作、减少走动、避免尘土飞扬。②工作人员应做好个人准备，戴好帽子、口罩，修剪指甲并洗手，必要时穿无菌衣、带无菌手套。（2）操作中保持无菌①工作人员应面向无菌区，手臂应保持在腰部或操作台台面以上，不可跨越无菌区避免面对无菌区谈笑、咳嗽、打喷嚏。②用无菌持物镊取用物品；无菌物品一经取出，即使未用，也不可放回无菌容器内；一套无菌物品仅供一位患者使用，避免交叉感染。 ③无菌操作中，无菌物品疑有污染或已被污染，应予更换并重新灭菌。（3）无菌物品保管：①无菌物品必须与非无菌物品分开放置。②无菌物品不可暴露于空气中，应存放于无菌包或无菌容器中，无菌包外须标明物品名称、灭菌日期，并按失效期先后顺序排放。③定期检查无菌物品的灭菌日期及保存情况。无菌包在未被污染的情况下保存期一般为7天，过期或受潮应重新灭菌。2、划线分离操作中的有关问题：（1）在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环，在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环。
②在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，以免接种环温度太高，杀死菌种。 ③在进行第二次以及其后的划线操作时'要从上一次划线的末端开始划线。每次划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 (2)进行恒温培养时，要将培养皿倒置的原因如果正放培养皿，则皿盖上形成的水滴会落入培 养基表面并且扩散开。如果培养皿中已形成菌落，则茵落中的细菌会随水扩散，菌落间相互影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的。因此恒温培养时，培养皿必须倒置。 (3)培养后判断是否有杂菌污染的方法 ①从菌落的形态看，是否湿润、透明、黏稠，呈何种颜色等等，是区别细菌、酵母菌、放线菌和霉菌的关键指标。 ②用显微镜镜检观察其形态、大小，看是否有菌丝、孢子、芽孢等，这也是区别细菌、酵母菌、放线菌和霉菌的关键指标。 知识拓展：1、对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。2、并不是所有微生物都需添加特殊营养物质，有些微生物需添加，原因是它们自身缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。3、含抗生素的牛奶不能发酵为酸奶的原因：牛奶发酵成酸奶是利用乳酸菌来完成的，乳酸菌属于细菌， 4、化学药剂的消毒方法，其作用原理是使细菌体内蛋白质变性，但是化学物质很难透过孢子或芽孢的坚硬外层进入细胞内，因此化学方法难以消灭孢子和芽孢。5、体积分数为70%的乙醇杀菌效果最强，浓度过低，杀菌力弱，浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固形，成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其内，因此杀菌效果受影响。 6、倒平板的方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰；然后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住管（瓶）塞（也可将试管塞或瓶塞放在左手边缘或小指与无名指之间夹住。如果试管内或三角瓶内的培养基一次用完，管塞或瓶塞则不必夹在手中）。左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速例入培养基约15mL，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。7、在斜面培养基上接种时，其正确的操作顺序： ①用左手大拇指、食指和无名指夹住菌种试管和待接种的斜面试管，管口并齐，使斜面向上成水平状态 ②右手拧松棉塞，但不取下③右手拿接种环，在火焰上灼烧灭菌 ④在火焰边用右手无名指和小指夹两个棉塞，将它们取下，同时左腕转动，灼烧管口一周 ⑤将接种环伸入管内，让环先接触培养基上未长菌的部位，使环冷却，然后轻轻挑取少量菌体⑥在火焰旁边迅速将沾有菌体的接种环伸到培养基的底部，由里向外轻轻画蛇形细线 ⑦抽出接种环，再用火焰灼烧管口，并在火焰上方将棉塞塞上 8、自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别在于碳源。9、平菇培养的操作程序：配制棉籽壳培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养。10、菌种的保存：对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法；临时保藏的菌种一般是接种到试管的固体斜面培养基上；临时保藏的菌种容易被污染或产生变异；在临时保藏过程中，每3～6个月都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上；
发现相似题
与“牛肉膏蛋白胨培养基中加入琼脂这一理想的凝固剂，下列关于琼脂的..”考查相似的试题有：
806319528070269782168041581082}