鸟语花香的自然界，常会给你带来无穷的乐趣与遐想．要想探索生命的奥妙，需要从了解细胞开始．下图所示的是某生物细胞及细胞中的某些结构．请据图回答问题：（1）该图是植物细胞模式图，判断的依据是该细胞有细胞壁、叶绿体、液泡．（2）菠菜浸泡在清水中，清水不变色；用开水浸泡后，水却变成绿色，这是因为开水破坏了细胞的细胞膜，使之不能控制物质进出．大泽山葡萄甘甜可口，主要是因为在液泡内的细胞液中含有大量的糖分．在结构叶绿体中能将光能转变成化学能，同时将二氧化碳和水合成为有机物，并放出氧气．（3）在地震中，对当时没有认领的遇难者尸体除了编号、拍照等工作外，还要提取死者的DNA，DNA存在于图中的③细胞核．
解：（1）图中结构名称：①细胞壁，②细胞膜，③细胞核，④液泡，⑤叶绿体，⑥细胞质．动物细胞与植物细胞相比没有细胞壁和大的液泡以及叶绿体，该图所示的细胞有细胞壁和大的液泡以及叶绿体，所以是植物细胞模式图．（2）②细胞膜起保护作用并控制物质进出的作用，让有用的物质进入细胞，把其他物质挡在细胞外面，同时，还能把细胞内产生的废物排到细胞外．④液泡中含有细胞液，有各种味道的物质以及营养物质，如各种蔬果汁中含各种有味道的物质以及丰富的营养物质，就是来自于细胞中液泡的细胞液&光合作用进行的场所是叶绿体，绿色植物通过叶绿体，利用光能，把二氧化碳和水转化成储存着能量的有机物（如淀粉），并且释放出氧．（3）③细胞核内含有遗传物质，是控制中心，控制着生物的发育和遗传．&故答案为：（1）植物；细胞壁、叶绿体、液泡；（2）细胞膜；液泡；叶绿体；有机物；（3）③细胞核此题考查的知识点是植物细胞的基本结构和功能以及动物细胞与植物细胞的区别．解答时结合细胞结构模式图．解决时间: 21:36
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我准备做液闪仪测心肌细胞线粒体ANT转运酶活性检测，想从培养所得的细胞中提取线粒体进行检测。看到过一些检测方法，但不知得率是多少，也没有看到出处，有哪位做过，能给个提取线粒体的方案吗？方便的话给个出处。我查到韩国的一篇文献上有方法，但需要超声破膜，我们这没有破膜机器，不方便，所以想找个不用超声破膜的方法。若提得线粒体，如何看它有没有活性呢？用詹那绿B就可以么？另外，因为接着要用液闪仪，可是从细胞里提线粒体是不是会很少啊，液闪仪大概需要多少样本量呢？
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回答者：匿名用户
(1)提取新鲜心肌组织细胞内线粒体的方案：心肌组织切碎后在4℃介质(0.25mol/L蔗糖、10mmol/L Tris-HCl
pH7.4、0-4℃)中制备心肌组织匀浆。匀浆经750g、离心10min后留上清，以9000g离心20min后留沉淀，重新悬浮后以9000g再离 心20min，弃上清得线粒体.全部操作于4℃进行。
(2)培养细胞提取线粒体。细胞弃去培养液后，用细胞收集液作用2到3分钟，用scraper，将细胞收集起来，6000g，离心15分钟。弃上 清，之后加细胞匀浆液，用匀浆器或手动匀浆管匀浆，将装有匀浆液的离心管配平后放入普通离心机，以2500rpm，离心15分钟，缓缓取上清液，移入高速 离心管中，保存于有冰块的烧杯中。以17000rpm离心20分钟，弃上清，留取沉淀物。加入0.25mol/L蔗糖与0.003mol/L氯化钙液 lml，用吸管吹打成悬液，以17000rpm离心20分钟，将上清吸入另一试管中，留取沉淀物，加入0.1ml
0．25mol/L蔗糖与0.003mol/L氯化钙溶液混匀成悬液，即得线粒体。
(3)液闪仪我没有用过，不过我觉得提取的线粒体数目应该足够你做(每个心肌细胞中都有&1000个的线粒体)。具体的上样标准我觉得需要查 你使用的液闪仪的说明书。
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【求助】 293T细胞用lipo2000转染后死亡很多
我的293T细胞状态不算差，但是连续进行了2次试验，lipo2000转染后细胞都大量死亡，飘起来的很多，不知道大家有啥好的建议？先说说我的具体过程。我用12孔板种的，汇合度达到了90%，质粒1.5ug，lipo20003.75uL（1:2.5）溶于opti-MEM200ul，在转染6h后拿出来看，细胞贴的还是较多，可是一换正常培养基，细胞就出现大量飘起，（我加的很温柔的啊）第二天拿出来看发现飘起的更多了，一团一团的全都浮着。在荧光显微镜下看却发现GFP是转进去了的。目前怀疑是不是含血清培养基要先预热，但是之前师兄做也没预热啊，他都没事。不知道是何缘故，明天还要再做一次，希望各位能给点指点，O(∩_∩)O谢谢！
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脂质体的转染毒性是最大的，很明显，那么多的细胞死亡是由于转染的细胞毒性导致的。对于这一点我有两个建议，一个是减少DNA的用量，我一般做转染，对于任何细胞，只要是12孔板，一般都是用1ugDNA，这个量绝对够了。,因为质粒转染进入细胞的本质，和病毒感染没区别，质粒的各种元件会从宿主细胞内抢夺细胞机器大量开始转录翻译你的目的蛋白，在这个过程中会产生大量的没有正确折叠蛋白，这些异常折叠蛋白进一步引起ER stress导致细胞凋亡。因此你用DNA太多，本身就有细胞毒性。另外就是脂质体本身的毒性。事实上，对于293系的细胞系，最好用的是PEI这种东西。毒性小，转染效率高，一般对293系列的细胞系可以轻易达到80%。polyscience有粉末买，买回来后直接在分子纯度的水里配置成1ug/uL的溶液，和你的质粒按照1ug DNA/6ug PEI对293进行转染。
而且直接使用自制的PEI非常便宜，在293上远比商品化的脂质体要好。
另外，如果你们实验室确实钱多，不怕花钱，建议你取用Promega的FugenHD,那个转染效率比脂质体更好，而且毒性小，至于价格。。。。。。。。。。。也更高。。。。。。。。。
另外，你说漂浮的细胞有表到GFP，那个不一定是真的GFP，很多时候细胞死亡后会在荧光显微镜下有非特异性荧光。
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293T本来贴壁就不紧，很有可能是吹起来的
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更正一下，是293FT细胞。虽然它本来就贴不紧，也不至于几乎全部都吹起来了呀。con就是没转染的孔就没事哦。
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我们实验室转染后换液一般都预热，而且我也用脂质体2000转染，死亡细胞很少，所以建议你换液前将培养液预热30min-1h。我们还用另一种转染试剂，invitrogen公司的lipofectamine reagent 和Plus Reagent，这两个试剂必须搭配使用，我们做过预实验，它对细胞的毒性要比脂质体2000小的多，转染效率也高，你可以试试
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谢谢你，给了这么详细的解答。我已经做完了，也成功了，主要改进了两个地方，第一，换液时一定要用预热过的培养基，第二，细胞铺板的密度要够高，至少90%。呵呵，很感谢你。
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我已经做完了，也成功了，主要改进了两个地方，第一，换液时一定要用预热过的培养基，第二，细胞铺板的密度要够高，至少90%。呵呵，很感谢你。
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我也要做转染了，不知道转染效率会怎么样。保佑！
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我也要做转染，可是也是老是容易飘
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求教，293,293T细胞染色体数目是多少，一样吗丁香客App是丁香园社区的官方应用，聚合了丁香园论坛和丁香客的精彩内容。医生可通过丁香客App浏览论坛，也可以在这个医生群集的关系网络中分享和互动，建立更广泛的学术圈子。
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【求助】提取总RNA，最少需要多少培养的细胞
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这个帖子发布于6年零91天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我做的细胞是贴壁培养的细胞，提RNA时，是将细胞吹打下来取出后再加Trizlo，还是可以将Trizol直接加入到细胞培养瓶中。并且我的细胞量很少，提取总RNA，最少需要多少个培养的细胞？
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用Trizol来提取细胞总RNA的话，一个6孔板的细胞足够了。对于贴壁培养的细胞，可将培养基吸出后直接向培养板中加入Trizol来溶解细胞，然后分次移出细胞裂解物进行后续操作即可。值得注意的是，对于所加Trizol的量，是依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定用量的（一般每10cm2加1 ml）。当Trizol量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。另外，在Trizol的使用说明中的注意事项提及，如果细胞量太少（100~10000个细胞），可加入800 ul的Trizol，后续裂解、加氯仿按常规操作。在用异丙醇沉淀RNA前加入5-10 ug无RNA酶的糖原作为水相的载体。其会保留在水相，与RNA共沉淀，且不影响后续的逆转录及PCR反应。多多交流！
yangea edited on
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楼上说的很详细了我没做过贴壁细胞，悬浮细胞一般用10的6次方以上比较好，Trizol的说明书上都有
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谢谢，yangea, ningbo97那么如果测各种酶活，比如SOD、CAT、GST、EROD的话，需要多少细胞啊是不是得很多？
关于丁香园1.请问水果的营养储存在那个细胞器中 2.水果的营养怎么提取 3.我们平时用的水果面膜,水果唇膏的来自水果的哪里?4.若可以提取需要用到什么仪器?_百度作业帮
1.请问水果的营养储存在那个细胞器中 2.水果的营养怎么提取 3.我们平时用的水果面膜,水果唇膏的来自水果的哪里?4.若可以提取需要用到什么仪器?
1、水果的营养存储在水果的任何一个细胞中,包括果皮、果肉、种子等.水果的各种营养元素分布在各种细胞器中,不同细胞器含量不同.2、各种营养成分不同提取工艺不同一般有二氧化碳萃取以及低温提取和弱酸溶液提取等各种工艺.3、水果面膜唇膏里面含有的提取物大多为青花素、维生素C等,青花素主要在细胞器液泡单层膜中,而维生素C暂且不知.4、需要仪器大致包括HCL稀释溶液,容器,蒸馏机械,超滤膜等.日常使用不需要太精密的萃取,直接捣碎外敷即可,一般采用果肉部分,果皮部分不好加工效果更好.
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