下列叙述正确的是A．DNA是蛋白质合成的直接模板B．每种氨基酸仅有一种密码子编码C．DNA复制就是基因表达的过程D．真核生物细胞中的遗传物质都是DNAＤ略河南省南阳市2011年高一春期期末考试生物&#..域名：学优高考网，每年帮助百万名学子考取名校！问题人评价，难度：0%下列叙述正确的是 A．DNA是蛋白质合成的直接模板? B．每种氨基酸仅有一种密码子编码 C．DNA复制就是基因表达的过程? D．真核生物细胞中的遗传物质都是DNA 马上分享给朋友：答案Ｄ略点击查看答案解释河南省南阳市2011年高一春期期末考试生物点击查看解释相关试题资料类别:&&/
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当DNA进行复制时，双螺旋结构解开成两条单链，各自作为模板合成与之互补的新链。在子代DNA双链中，一条是来自于亲代，另一条完全重新合成。
真核细胞的DNA复制有6大特点1.复制的方式的半保留复制。半保留复制：以DNA分子的双链为模板，以碱基互补配对为原则，合成一条新链的过程。新和成的DNA分子链中一条来自亲本，另一条是新合成的。2.复制是以一个起始点开是的，一个DNA分子能有一个或者多个这样的起始点。即从一个点开始解旋，复制。3.复制是单向或双向的，原核生物复制一般为单向，真核生物复制一般为双向。4.复制起始时，需要一小段RNA引物激活DNA聚合酶的活性，促使多核苷酸链不断增长。5.复制的方向是有5端到3端添加核苷酸。6.DNA的复制在一条链上是相对连续的，而另一条链是间断的，先合成片段，再连成整体，即是DNA的合成2条链的复制不是同步的。合成的片段叫做冈崎片段。半保留复制（semiconservative replication）：一种双链脱氧核糖核酸（DNA）的复制模型，其中亲代双链分离后，每条单链均作为新链合成的模板。因此，复制完成时将有两个子代DNA分子，每个分子的核苷酸序列均与亲代分子相同，这是1953年沃森（J.D.Watson）和克里克（F.H.C.Crick）在DNA双螺旋结构基础上提出的假说，1958年得到实验证实。DNA既然是主要的遗传物质，它必须具备自我复制的能力。瓦特森和克里克（1953）在提出DNA双螺旋结构模型的同时，对DNA复制也进行了假设。他们根据DNA分子双螺旋结构模型，认为DNA分子的复制，首先是从它的一端氢键逐渐断开。当双螺旋的一端已拆开为两条单链时，各自可以作为模板，从细胞核内吸取与自己碱基互补的游离核苷酸（A吸取T，C吸取G），进行氢键的结合，在复杂的酶系统的作用下，逐渐连接起来，各自形成一条新的互补链，与原来模板单链互相盘旋在一起，两条分开的单链恢复为双链DNA分子，与原来的完全一样。DNA的这种复制方式称为半保留复制（semiconservative replication）,因为通过复制所形成的新的DNA分子，保留原来亲本DNA双链分子的一条单链。DNA在活体内的半保留复制特征已为1958年以来的大量试验所证实。DNA的这种复制方式对保持生物遗传的稳定具有非常重要的作用。还可能存在其他两种复制方式，都以原来亲本DNA双链分子作为模板链。一种方法称为全保留复制（conservative replication）,在复制过程中新的DNA分子单链结合在一起，形成一条新的DNA双链，而亲本DNA双链仍然被保留在一起。另一种方法称为散布式复制(dispersive replication)，在复制过程中亲本ＤＮＡ双链被切割成小片段，分散在新合成的两条DNA双链分子中。1953年J．D．Watson和 F．H．C． Crick在提出DNA双螺旋结构时，对其互补关系予以很大的重视，而且提出了DNA的复制模型。DNA在进行复制时各以双链中的每一条链作为模板，各个和互补的前体单核苷酸配对重合而形成与这二条单链各各对应的双重子螺旋二条。所谓互补就是指腺嘌呤一定只与胸腺嘧啶配对，鸟嘌呤一定只与胞嘧啶配对，新的单核苷酸排列在模板上时，其排列法是依原来链上的碱基通过互补来决定的。这样无论子分子与子分子间，还是子分子与母分子间，碱基排列顺序是完全相同。这样一来具有和亲本完全一样的遗传信息的子分子自我增殖了二倍。这时所产生的子双重螺旋分子一条链是从亲代原封不动的接受下来的，只有相对的一条链是新合成的，所以把这种复制方式称作半保留复制。这个模型曾用重同位素标记的DNA以密度梯度离心法进行分析，或用放射性同位素标记的DNA以放射自显影法进行测定等等，用几种不同原理的方法，曾在从人到病毒的许多种生物中进行了验证，肯定了这个模型的正确性和普遍性。关于DNA是以半保留方式复制这一点已被认为是生物学中最基本的肯定性原理。
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应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质——同源或异源、原核或真核、天然或人工的DNA与载体DNA相结合成一具有自我复制能力的DNA分子——复制子，继而通过转化或转染、筛选出含有目的基因的细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子，即DNA克隆。
一个完整的DNA克隆过程应包括：目的的获取，基因载体的选择与构建，目的基因与载体的拼接，重组DNA分子导入受体细胞，筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞（转化子）。利用重组DNA技术构建时，欲插入载体DNA的外源DNA片段中即含有我们感兴趣的或DNA序列—。目前获取目的基因大致有如下几种途径或来源。如果已知某种基因的核苷酸序列，或根据某种基因产物的氨基酸序列推导出该多肽编码基因的核苷酸序列后，再利用DNA合成仪通过化学合成原理合成目的基因。利用该法合成的基因有人生长激素释放抑制、胰岛素原、及干扰素基因等。分离组织或细胞染色体DNA，利用限制性核酸内切酶将染色体DNA切割成基因水平的许多片段，其中即含有我们感兴趣的基因片段。将它们与适当的拼接 成重组DNA分子，继而转入受体菌扩增，使每个细菌内都携带一种重组DNA分子的多个拷贝。不同细菌所包含的重组DNA分子内可能存在不同的染色体DNA 片段，这样生长的全部细菌所携带的各种染色体片段就代表了整个基因组。存在于细菌内、由所携带的所有基因组DNA的集合称基因组DNA文库(genomicDNAlibrary)。基因组DNA文库就象图书馆库存万卷书一样，涵盖了基因组全部，也包括我们感兴趣的基因。建立后需要结合适当筛选方法从众多中筛选出含有某一基因的菌落，再进行扩增，将重组DNA分离、回收，获得的—克隆。以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA(complementary DNA，cDNA)，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受菌体，扩增为cDNA文库(cDNA library)，然后再采用适当方法从cDNA文库种筛选出目的cDNA。与基因组DNA文库类似，由总mRNA制作的cDNA文库包括了细胞全部mRNA信息，自然也含有我们感兴趣的编码cDNA。当前发现的大多数蛋白质的编码基因几乎都是这样分离的。(polymerasechain reaction，PCR)：目前，采用PCR获取目的DNA十分广泛，应用这一技术可以将微量的目的DNA片段在体外扩增100万倍以上。PCR的基本工作原理是以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5'末端和3'末端相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。组成PCR反应体系的基本成分包括：模板DNA、引物、 DNA聚合酶（具耐热性）、dNTP以及含有Mg 的。1） 变性——将反应系统加热至95℃，使模板DNA完全变性成为单链，同时引物自身和引物之间存在的局部双链也得以消除；2）退火(anneal)——将温度 下降至适宜温度（一般较Tm低5℃）使引物与模板DNA退火结合；3）延伸，将温度升至72℃，DNA聚合酶以dNTP为底物催化DNA的合成反应。上述 三个步骤称为一个循环，新合成的DNA分子继续做为下一轮合成的模板，经多次循环（25～30次）后即可达到扩增DNA片段的目的。外 源DNA片段离开染色体是不能复制的。如果将外源DNA连接到复制子上，外源DNA则可做为复制子的一部分在受体细胞中复制。这种复制子就是。重组DNA技术中的选择和改进是一项极富技术性的专门工作，目的不同，操作的性质不同，载体的选择和改建方法也不同。通过不同途径获取含的外源DNA、选择或改建适当的后，下一步工作是如何将外源DNA与载体DNA连接在一起，即DNA的。 这种DNA重组是靠DNA连接酶将外源DNA与共价连接的。改建载体、着手进行外源与载体连接前，必须结合研究目的及感兴趣基因特性，认真设计最终构建的重组体分子。应该说，这是一件技术性极强的工作，除技巧问题，还涉及对重组DNA技术领域深刻的认识。下面仅就连接方式做扼要介绍。同一限制酶切割位点连接由同一切割的不同DNA片段具有完全相同的末端。只要酶切割DNA后产生单链突变（5'突出及3'突出）的粘性末端，同时酶切位点附近的DNA序列不影响连接，那么，当这样的两个DNA片段一起退火时，粘性末端单链间进行碱基配对，然后在DNA连接酶催化作用下形成共价结合的重组DNA分子。
不同限制性内切酶位点连接由两种不同的限制性核酸内切酶切割的DNA片段，具有相同类型的粘性末端，即配伍末端，也可以进行粘性末端连接。例如MboⅠ(GATC)和BamHⅠ(GGATCC)切割DNA后 均可产生5'突出的GATC粘性末端，彼此可互相连接。DNA连接酶可催化相同和不同限制性核酸内切酶切割的之间的连接。原则上讲，限制酶切割DNA后产生的也属配伍末端，可彼此相互连接；若产生的经特殊酶处理，使单链突出处被补齐或削平，变为平端，也可实行。连接是利用同聚物序列，如多聚A与多聚T之间的退火作用完成连接。在末端(terminal transferase)作用下，在DNA片段端制造出，而后进行粘性末端连接。这是一种人工提高连接效率的方法，也属于粘性末端连接的一种特殊形式。对DNA片段或DNA，可在连接前将磷酸化的接头(linker)或适当分子连到平端，使产生新的位点。再用识别新位点的限制性内切酶切除接头的远端，产生。外源DNA（含目的DNA）与载体在体外连接成重组DNA分子（嵌合DNA）后，需将其导入受体菌。随着受体菌的生长、增殖，重组DNA分子也复制、扩增，这一过程即为无性繁殖；筛选出的含目的DNA的重组体分子即为一或克隆。在选择适当的受体菌后，经特殊方法处理，使之成感受态细胞 (competent cell)，即具备接受外源DNA的能力。根据重组DNA时所采用的性质不同，导入重组DNA分子有转化(transformation)、转染(transfection)和感染(infection)等不同手段。通 过转化、转染或感染，DNA分子被导入受体细胞，经适当涂布的培养板培养得到大量或转染。由于每一只携带某一段外源基因，而 转化或转染时每一受体菌又只能接受一个重组体分子，如何将众多的转化或转染噬菌斑区分开来，并鉴定哪一菌落或噬菌斑所含重组DNA分子确实带有目的基 因，这一过程即为筛选或选择。根据体系、特性及外源基因在受体细胞表达情况不同，可采取直接选择法或非直接选择法。
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