cck8试剂盒能取代传统mtt吗?既然cck8试剂盒更有优势?为何很多人还在用MTT

MTT升级版细胞计数试剂盒CCK8
价格:¥5400
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产地:天津-天津
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采购商点评:关于"MTT升级版细胞计数试剂盒CCK8"的点评
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& & & & &Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 细胞增殖与活性检测试剂盒是一种基于SST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。其主要成分为水溶性四唑盐SST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝....
MTT升级版细胞[]
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MTT升级版细胞[]
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MTT法和CCK8法检测悬浮细胞增殖的比较|
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求助CCK8法测悬浮细胞增殖,如何检测
如题,由于培养的是悬浮细胞,
CCK8法检测细胞增殖能力时,若是贴壁细胞只要将培养液取出测OD值即可,由于是悬浮细胞,细胞浮在培养液里会影响OD值的检测,平常所采用的体系为每100微升培养基加10微升CCK8,悬浮培养时也采用该体系,若检测时取出一半检测,是否会影响实验结果或影响与他人结果的对比,能否将细胞悬液取出,离心后进行检测,但由于只有200微升,离心后取出的体积也会损失一些
为啥在培养液里会影响很大?其实你同比的话应该还好 我做都是细胞处理好重悬 每孔分一样的培养液(一般200ul)一定要分的均一,不能有气泡,然后用你悬细胞的培养液单独加一个孔,然后每孔加CCK-8(我用20ul),这个量要自己试,有的细胞大 出来颜色会很深 可能会超出酶标仪的范围,然后空白培养基的孔里也加同样体系的CCK-8,然后得出的吸光值减去空白孔的 : Originally posted by caddie1111 at
为啥在培养液里会影响很大?其实你同比的话应该还好 我做都是细胞处理好重悬 每孔分一样的培养液(一般200ul)一定要分的均一,不能有气泡,然后用你悬细胞的培养液单独加一个孔,然后每孔加CCK-8(我用20ul),这个量 ... 不是说在培养液里影响大,是说我培养的细胞是悬浮细胞,测的话取样之前要把培养基打匀之后就成了细胞悬液,细胞在培养基里的话去测OD值会影响结果的吧 : Originally posted by vivian-303 at
不是说在培养液里影响大,是说我培养的细胞是悬浮细胞,测的话取样之前要把培养基打匀之后就成了细胞悬液,细胞在培养基里的话去测OD值会影响结果的吧... 用同样的培养基 然后扣除培养基本身的背景,个人觉得对OD值没什么影响 【CCK8法检测细胞增殖能力时,若是贴壁细胞只要将培养液取出测OD值即可】
CCK-8检测贴壁细胞,是不需要将培养液取出的,直接用酶标仪检测度数即可
【由于是悬浮细胞,细胞浮在培养液里会影响OD值的检测,平常所采用的体系为每100微升培养基加10微升CCK8,悬浮培养时也采用该体系,若检测时取出一半检测,是否会影响实验结果或影响与他人结果的对比,能否将细胞悬液取出,离心后进行检测,但由于只有200微升,离心后取出的体积也会损失一些】
CCK-8比起MTT或者MTS最大的优势就是能够检测悬浮细胞,如果细胞在生长时没有出现团聚,那么孵育完之后可以直接上酶标仪检测 我想说悬浮细胞用药处理的,再要用CCK8检测增的话,不同浓度的药呀,应该要去掉含 药培养基吧?怎么做?平板离心机是多大转速离得下来呢。感觉3500也离不下来
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E-mail: & QQ:8835100转帖——靶细胞杀伤实验:MTT和CCK8比较
靶细胞杀伤实验:MTT和CCK8比较
Cell&Counting&Kit-8简称CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8的广泛
应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还
原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
Cell Counting
Kit-8简称CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
WST-8是MTT的一种升级替代产品,和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先,MTT被线粒体内的一些还
原生成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶解液来溶解;而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的,可以省去后续的溶
解步骤。其次,WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次,WST-8比XTT和MTS更稳定,
使实验结果更加稳定。另外,WST-8和MTT、XTT等相比,线性范围更宽,灵敏度更高。
该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等。
总之,CCK-8的原理跟MTT其实是相同的,不同之处在于CCK-8法生成的formazan是水溶性的,不需要再吸出培养液加入有机溶剂溶解这个步骤,因此可以减少一定的误差。其他优点就是重复性优于MTT;对细胞毒性小;为1瓶溶液,毋需预制,即开即用。
但是CCK-8比MTT的价格要贵不少,所以一般来说,还是MTT法用的多。
MTT和CCK-8(上海同仁)的原理基本是一致的,但也存在如下的区别:
1、常规操作的MTT法受药物本身的颜色、培养基的颜色、的浓度使结果的变异较大。如采用潘兴瑜的MTT改进法将有效的降低试验的飘变率,本人硕士期间就采用潘的MTT改进法,试验重复一两次就的到理想的结果!受益非浅!
2、CCK-8是最近新出现的方法,它操作简便、结果变异率小。对悬浮细胞的测定有它独到的地方!CCK-8为黄色的,要采用无酚红的培养基进行测量!
本人博士期间采用的CCK-8法,自我认为两种方法各有千秋,有时不可能互相替代。当你测量药物的药效时,如果药物本身有颜色,那么采用潘的MTT
改进法可以通过离心去除颜色的干扰!多次的离心和吸取上清要求操作者要小心和仔细,否则有降低试验的准确率,而这却是CCK-8法的长处所在!
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