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苹果酸脱氢酶说明书
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苹果酸脱氢酶产品名称：苹果酸脱氢酶英文名称：MDH；Malate Dehydrogenase；Malic Dehydrogenase from microorganism&CAS号：分子量：34KDa（SDS-PAGE）级别：BR活力：≥200units/mg protein&活力定义：One unit will cause the oxidation of one micromole NADH per min at PH7.5 at 30℃最佳PH：9.0PH稳定性：4.0～8.0最佳温度：55℃Thermal stability：＜60℃(PH 7.5, 1.5min)抑制剂：Ag+，Hg2+Preparation Instructions：The enzyme is reconstituted in 100mM potassium phosphate buffer,PH 7.5 containing 0.2% BSA for activity assay性状(以下信息仅供参考)：白色无定形粉末，Isoelectic point：4.9, 溶解时候用浓度50毫摩尔的磷酸钾缓冲液，PH在6-8之间，可以加进去一点0.2%的BSA用途：本品仅供科研，不得用于其它用途。(以下用途仅供参考)还原草酰乙酸成为苹果酸或催化苹果酸脱氢生成草酰乙酸保存：2～8℃苹果酸脱氢酶YSRIBIO-5858 PUC18质粒 BR，50u/mg PUC18质粒YSRIBIO-5859 Pfu DNA聚合酶 BR,200u/mg,兔肌,粉末 &Pfu DNA PolymeraseYSRIBIO-5860 PBS磷酸盐缓冲液 AR，99% PBS(Phosphate buffer saline) &powderedYSRIBIO-5861 O-乙酰-L-氢氯化丝氨酸 BR，98% O-Acetyl-L-serine hydrochlorideYSRIBIO-5862 Olig(dT)15 高纯，98% Olig(dT)15YSRIBIO-5863 OED60K型发酵工业通用消泡剂 超纯，98% Antifoam OED60K苹果酸脱氢酶EMS邮政快递，申通快递等，&款到上海3天内发货；2。质优价廉，欢迎订购，一次性订购100Kg以上量大从优。3。其他服务：如您对产品服务及技术指标有特殊要求，请及时通知我方；服务宗旨：竭诚提供优质产品，售后服务客户满意度100％。YSRIBIO-5841 S-腺甘基蛋氨酸 BR，80% AdoMetYSRIBIO-5842 S-苯基丁氨酸 BR，98% L-HomophenylalanineYSRIBIO-5843 SYBRGREENⅠ核苷酸胶体染料 BS SYBR Green 1YSRIBIO-5844 Super Script Ⅱ阴性逆转录酶 标抗级，RZ＞3,≥300u/mg SuperScript II Reverse TranscriptaseYSRIBIO-5845 SP6核糖核酸聚合酶 BR,150u/mg，粉末，微生物 SP6 RNA PolymeraseYSRIBIO-5846 SDS-PAGE超低分子量标准品 BR Super low range protein MW markerYSRIBIO-5847 S-(+)-2-氨基-4-甲基-1-戊醇 BR，98% L-LeucinolYSRIBIO-5848 R-苯甘氨醇 BR，98% D-PhenylglycinolYSRIBIO-5849 RNA酶抑制剂 BR，Ⅴ型，&125CDU/mg Rnasin InhibitorYSRIBIO-5850 RNA酶 BR，35u/mg RNASEYSRIBIO-5851 RNase&DNase清除剂 BR,0.3-3.0u/mg Rnase&Dnase awayYSRIBIO-5852 Rink-Amide树脂 BR Rink-Amide resinYSRIBIO-5853苹果酸脱氢酶 Rink Amide AM树脂 BR Rink Amide AM resinYSRIBIO-5854 RAPD引物 超纯，75% RAPD PrimerYSRIBIO-5855 P-苯二胺 超纯，99% p-PhenylenediamineYSRIBIO-5856 PVC多元复合润滑剂 BR，98% PVCYSRIBIO-5857 PUC19质粒 超纯，98% PUC19质粒烘干前后玉米糖代谢限速酶苹果酸脱氢酶活力的测定--惠东中学生物科组
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烘干前后玉米糖代谢限速酶苹果酸脱氢酶活力的测定
20:14:00 | By: 惠东中学生物科组 ]
玉米淀粉提取液中蛋白质含量(g/ml)＝Ｙ×Ｎ×０.００１×0.1／Ｖ
ＹDD标准曲线查得蛋白质的浓度mg/mL
N――稀释倍数
Ｖ――玉米淀粉提取液的体积mL
根据上述公式计算的结果，玉米淀粉提取液中蛋白质含量为1.01×10-3g/ml。
自然干燥条件下，玉米糖代谢限速酶（MDH）的活力单位为60U/g,
人工烘干条件下，玉米糖代谢限速酶（MDH）的活力单位为29U/g.
3.5分析和讨论
表5对比数据统计分析
平均值 实验次数 偏离度 平均误差
人工烘干 0..46
自然干燥 0..50
对自然风干和人工烘干的光吸收值进行配对T检验得到P = 0.006，远远小于P=0.01，说明自然风干与人工烘干间有极显著性差异，在自然风干状况下，酶的活力远远高于人工烘干的酶的活力。
苹果酸脱氢酶（malate dehdregenase ,简称MDH，EC1.1.1.37），广泛存在于植物细胞内，是糖代谢途径的关键酶之一，可催化下列反应：
苹果酸+氧化型辅酶I
草酰乙酸+ NADH
苹果酸脱氢酶可溶于水或稀盐溶液，可用它们制备组织匀浆，经浸泡，离心，其上清液是含苹果酸脱氢酶的组织提取液。组织中MDH含量测定方法很多，其中分光光度法更为简单，快速。鉴于MDH在340nm处吸光值的改变，定量测定酶的含量。本实验测定MDH活力，基质液中含苹果酸和还原型辅酶I，在一定条件下，加入一定量酶液，观察NADH在反应过程中340nm处光吸收减少值，减少越多，则苹果酸脱氢酶活力越高，其活力单位是：在25摄氏度，PH=8的条件下，△A340nm/min下降为1.0的酶量为一个单位。可定量测定每克湿重组织中单位，定量测定蛋白质含量即可计算比活力。
利用MDH上述原理，可测定反应MDH过程中A340nm的改变，定量测定酶活力。
（1）在自然干燥和人工烘干条件下，玉米的糖代谢均属于分解代谢，即分解已经合成的淀粉。自然干燥条件下，限速酶（MDH）的活力高，玉米的生理生化反应受限程度弱，反应速度快，被分解的淀粉数量多；而人工烘干的条件下，限速酶（MDH）的活力低，生理生化反应受限程度强，糖代谢反应速度慢，被分解的淀粉数量少。
（2）根据我们的实验结果，随着储藏时间延长，自然风干玉米烘干淀粉含量下降速度应高于人工烘干玉米，因此建议人工烘干时间最好在后熟期刚刚结束时。
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No.1　讨论:尊重：请给我一个位置
[ <span id="t_07-4-14 23:40:00 | By: a2356(游客) ]
不错，我喜欢
No.2　讨论:烘干前后玉米糖代谢限速酶苹果酸脱氢酶活力的测定
[ <span id="t_07-8-16 15:45:00 | By: wnn(游客) ]
苹果酸脱氢酶的详细测定方法是什麽?
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来源：　　作者：刘艳荷陈盛禄张传溪;
西方蜜蜂苹果酸脱氢酶Ⅱ等位基因频率与经济性状的相关性　 苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)是糖代谢中重要的酶,在线粒体上,能催化苹果酸氧化成草酰乙酸;在细胞质中,又能将草酰乙酸还原成苹果酸。西方蜜蜂Apis mellifera L.中,在pH 2～10区间内,MDH存在3类同工酶MDHⅠ、MDHⅡ、MDHⅢ,MDHⅠ位于pH 5.1～5.6范围内,MDHⅡ位于pH 6.7～7.5范围内,MDHⅢ在pH 9.6左右。不同等级和不同发育阶段,蜜蜂的MDHⅠ和MDHⅢ变化不大,MDHⅡ呈现多态现象,由a、bc、(S、M、F或Mdh65,Mdh80,Mdh100)3个等位基因编码,它们编码的酶谱分别位于pH 6.7、pH 7.2和pH 7.5。由受精卵发育而来的二倍体雌性蜂(蜂王、工蜂),MDHⅡ有6种基因型(aa、bbc、ca、b、bc、ac)。MDHⅡ是二聚体酶,在电泳图谱上,纯合子1条带,杂合子3条带[1,2]。MDHⅡ等位基因频率与海拔高度有关,Mdh80等位基因频率与海拔高度成正相关,Mdh65与海拔高度成负相关(P0.01),而Mdh100与环境变化没有相关性[3,4,5]。MDHⅡ等位基因频率还与1月和7(本文共计5页)　　　　　　　　　　
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　　　　　　苹果酸脱氢酶包涵体的表达及复性研究--《天津大学》2006年硕士论文
苹果酸脱氢酶包涵体的表达及复性研究
【摘要】：
苹果酸脱氢酶(Malate dehydrogenase,EC 1.1.1.37,MDH)是一种重要的糖代谢酶,在生物体内特异性催化L-苹果酸成为草酰乙酸从而完成三羧酸循环。可利用MDH底物专一性特征,将其用于拆分DL-苹果酸以得到重要的手性碳源D-苹果酸。此外,MDH具有同源二聚体分子结构,这一结构的特殊性决定了MDH常被用作于寡聚蛋白分子的结构及功能研究的模型分子。鉴于MDH重要的经济及科研价值,本文以大肠杆菌苹果酸脱氢酶(E.coli MDH,eMDH)为研究对象,进行了eMDH的克隆、表达及复性研究。
首先运用PCR方法从大肠杆菌基因组DNA中扩增出编码eMDH的cDNA,将其与温控质粒载体pBV220连接构建重组质粒;经限制性内切酶酶切分析及全序列分析得到阳性重组子。继而进行基因工程菌培养,42℃诱导外源蛋白eMDH的表达。SDS-PAGE分析发现外源蛋白主要以不可溶的包涵体形式存在于破菌沉淀中;经电泳凝胶光密度扫描分析得目标蛋白表达量占全菌蛋白的42%;包涵体蛋白的产量为87.3mg?(L培养液)-1。对包涵体蛋白进行脲及Triton洗涤纯化后,蛋白纯度由表达后的42%增加到72%。
在包涵体复性得研究中,重点考察了人工伴侣体系对eMDH包涵体的促进复性作用。结果显示,当酶浓度为0.1mg?mL-1,CTAB与β-环糊精的浓度比为0.6mmol?L-1:4.8 mmol?L-1 (1:8),pH值为7.6,变性剂脲终浓度为0.32 mol?L-1及5mmol?L-1 DTT存在时,人工伴侣可有效辅助eMDH复性,复性后的比活可达160U/mg。
利用荧光光谱法、圆二色光谱法分析表明,复性后的eMDH具有正确的分子结构。体积排阻色谱分析证明,其比自发复性的eMDH含有更多的二聚体分子。另外,温度动力学结果显示,低温有利于降低eMDH分子的折叠反应速率,提高eMDH的复性比活;与自发复性相比,人工伴侣辅助复性体系,可以降低eMDH的折叠速率,有效协助eMDH折叠为正确的结构。
【关键词】：
【学位授予单位】：天津大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2006【分类号】：TQ920.1【目录】：
中文摘要3-4
ABSTRACT4-9
第一章 文献综述10-28
1.1 苹果酸脱氢酶的简介10-16
1.1.1 苹果酸脱氢酶的理化性质及生理功能10-11
1.1.2 苹果酸脱氢酶的用途11
1.1.3 苹果酸脱氢酶的结构分析11-14
1.1.4 苹果酸脱氢酶活性检测14-15
1.1.5 苹果酸脱氢酶的表达研究15-16
1.2 基因工程重组蛋白质在大肠杆菌中的表达16-20
1.2.1 目标基因获得——PCR 技术16-18
1.2.2 表达载体选择18
1.2.3 表达产物的定位18-20
1.3 包涵体蛋白质复性20-26
1.3.1 蛋白质体外复性20-23
1.3.2 复性动力学模型23-24
1.3.3 苹果酸脱氢酶复性的研究现状24-26
1.4 本文的研究意义及主要内容26-28
第二章 苹果酸脱氢酶的表达28-47
2.1 实验材料28-30
2.1.1 菌种和载体28
2.1.2 工具酶及分子量参照物28-29
2.1.3 主要化学试剂29
2.1.4 主要仪器29-30
2.1.5 引物合成30
2.2 实验方法30-38
2.2.1 PCR 扩增目的基因30-33
2.2.2 pBV220-eMDH 表达质粒的构建33-34
2.2.3 pBV220-eMDH 的转化及阳性克隆的筛选34-36
2.2.4 目标蛋白质在大肠杆菌中的诱导表达36-37
2.2.5 SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳检测表达产物37-38
2.2.6 蛋白质含量的测定38
2.3 结果与讨论38-45
2.3.1 PCR 产物的酶切鉴定38-39
2.3.2 阳性克隆的鉴定39-41
2.3.3 目标基因的序列测定41-44
2.3.4 基因工程菌生长曲线的测定44
2.3.5 表达产物的鉴定44-45
2.3.6 表达产物蛋白质含量的测定45
2.4 本章小结45-47
第三章 苹果酸脱氢酶包涵体的纯化、变性及复性47-73
3.1 实验材料和设备47-48
3.2 实验方法48-50
3.2.1 包涵体纯化48-49
3.2.2 包涵体的溶解和变性49
3.2.3 包涵体的复性49-50
3.2.4 荧光光谱分析50
3.2.5 圆二色光谱分析50
3.2.6 体积排阻色谱分析50
3.2.7 苹果酸脱氢酶活性测定50
3.3 结果及讨论50-71
3.3.1 包涵体纯化结果50-51
3.3.2 包涵体变性时间对复性效果的影响51-52
3.3.3 苹果酸脱氢酶包涵体复性初探52-57
3.3.4 人工伴侣辅助苹果酸脱氢酶包涵体复性条件探索57-64
3.3.5 人工伴侣辅助复性的复性产物结构分析64-69
3.3.6 人工伴侣辅助复性的温度动力学分析69-71
3.4 本章小结71-73
第四章 结论与展望73-75
4.1 结论73-74
4.2 展望74-75
参考文献77-83
发表论文情况83-84
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