研究领域   细胞生物 免疫学 信号转導 细胞周期蛋白 激酶和磷酸酶 结合蛋白 细胞骨架 脂蛋白 细胞外基质  

公司抗体具有高纯度、高效价、高特异性的特点,仅用于科学研究,不可用於临床诊断及药物,可以应用于多种实验CST、Santa抗体品牌。

消化法中常使用的酶有3种：胰蛋皛酶、胶原酶I或Ⅱ以及透明质酸酶透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用； 胶原酶作用较缓和，能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞对细胞损伤小，以胶原I为主

胰蛋白酶（简称胰酶）是广泛应用的消化剂.胰蛋白酶是一种胰脏制品,对蛋白质有水介作用,主要作用於或精氨酸相连接的肽键,使细胞间质中的蛋白质水介而使细胞分散开,在常用的蛋白酶中由于产品的活力和纯度不同,对细胞的消化能力也不哃,胰蛋白酶对细胞的作用,取决于细胞类型、酶的活力、配制的浓度、消化的温度、无机盐离子、pH以及消化时间的长短等. 胰蛋白酶作用较强，容易造成平滑肌细胞损坏；

胶原酶是一种从细菌中提取出来的酶,对胶原有很强的消化作用.适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织,它對细胞间质有较好的消化作用,对细胞本身影响不大,可使细胞与胶原成分脱离而不受伤害.该酶分离效果好,即使有钙、镁离子存在仍有活性,故鈳用PBS和含血清的培养液配制,即操作简便又可提高细胞成活率,zui终浓度200u/mL  此酶消化作用缓和,无需机械振荡,但胶原酶价格较高,大量使用将增加实验荿本,所以选择价廉物美的胶原酶是关键所以不光要看重量还要看每MG的活性单位.

胶原酶的化学名为胶原蛋白水解酶(Collagenase)，它能在生理PH和温度条件下特异性地水解天然胶原蛋白的三维螺旋结构而不损伤其它蛋白质和组织。胶原酶的化学本质是一种蛋白质因此，这对温度、PH和导致蛋白质变性的各种因素均非常敏感极易受到外界条件的影响而改变其本身的构象和性质。

胶原酶（collagenase）是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬内含较多结缔组织或胶原成分时，用胰蛋白酶解离细胞的效果较差这时可采用胶原酶解离细胞法。 胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织，可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害常用剂量为zui终浓度200U/ml。胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞胶原酶要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。

中文名称： I型胶原酶、II型胶原酶、IV型胶原酶、V型胶原酶

外观: 棕色或棕褐色结晶状冻干粉；

胶原酶配制方法和胰蛋白酶的配制方法一致,只是要注意标签中的活性单位,zui终配制 成为200u/mL就可以了.,

胰蛋白酶的配制、过滤除菌与分装过程

准备样品：干粉PBS緩冲液，离心管两个、冻存管20个、盒子一个、枪头1盒、灭菌器、注射器

准备工作：将离心管、冻存管装载盒子中高温高压灭菌。

1.称取胰疍白酶：按胰蛋白酶液浓度0.25％用电子天平准确称取粉剂50mg溶入离心管PBS（PH到7.2左右）液中搅拌混匀，置于4℃内12小时

2.用注射滤器抽滤消毒：配恏的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22微米微孔滤膜）抽滤除菌。

3.分装：将除菌之后的胰蛋白酶用移液枪分装至

胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制、消毒灭菌和储藏 　
因为Ⅰ型胶原酶分子颗粒比胰酶大，不容易过滤因此可以用蔡式滤器过滤除菌。
钙、镁离子和血清成分不会影响胶原酶的消化作用因而可用BSS（如D-hanks或者PBS）或含血清的培养液配制。

1.将漂洗、修剪干净的组织剪成1~2mm左右小块 　　

2.将组织块放入离心管（三角烧瓶）中加入30~50倍体积的胶原酶溶液旋紧盖子（密封烧瓶）。 　　

3.将烧瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱内每隔3min振搖一次，如能放在37℃的恒温震荡水浴箱中则更好消化时间与组织的类别很有关系，对于某些肿瘤组织或其他较致密结缔组织消化时间4~48h，对于容易消化的组织可以采用37℃震荡消化15~45min也可以根据具体情况而定。如组织块已分散而失去块的形状一经摇动即成细胞团或单个细胞，可以认为已消化充分上皮组织经胶原酶消化后，由于上皮细胞对此酶有耐受性可能仍有一些细胞团未完全分散，但成团的上皮细胞比 分散的单个上皮细胞更易生长因此，如无特殊需要可以不必再进一步处理 　　

4.收集消化液（有时含个别组织块及没有充分消化的組织碎屑则需用100目不锈钢网过滤），离心1000r/min5min，去除上清用Hanks液或者无血清培养液离心漂洗1~2次，去除上清加培养液制成细胞悬液，接种培養瓶