非原代培养的细胞一般冻存于液氮之中需要培养时要先从液氮中取出使

之复苏。细胞复苏的原则——快速融化：必须将冻存在－196℃液氮中的细胞快

速融化至37℃使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细

胞形成再结晶对细胞造成损害。

1.1、将水浴锅预热至37℃并将含10%FBS的培养液置于其中預热；。

1.2、用75％酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面

1.3、在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。

2、取出冻存管及迅速解冻：

2.1、根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号

2.2、从液氮罐中取出细胞盒，取出所需的细胞同时核对管外的编号。

2.3、迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻并要不断的摇动，使

管中的液体迅速融化约1-2min后冻存管内液体完全溶解，取出用酒精棉球擦

拭冻存管的外壁再拿入超净台内。

3、平衡离心将细胞悬液吸到离心管中1000～1500rpm离心3分钟；

4、制备细胞悬液吸去上清液，加入10 ml培养液用吸管轻轻吹打均匀，使

5、细胞计数细胞浓度以5×105/ml为宜

6、培养细胞将复合细胞计数要求的细胞悬液吸到培养瓶中，将培养瓶放入37℃囷5％CO2的培养箱内培养（略微拧松培养瓶盖）换液的时间由细胞情况而定。通常除少数特别注明对DMSO 敏感的细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性

细胞）在解冻之后，可直接放入含有10-15ml（5－10倍）新鲜培养基的培