本发明通常涉及含有长链多不饱囷脂肪酸(PUFAs)的胃肠道给药 (enteral)制剂及制备该胃肠道给药组合物的方法还涉及降低坏死 性结肠炎发生率的方法。更具体地说本发明涉及胃肠道給药组合 物，该组合物提供基本上不含胆固醇的长链PUFAs花生四烯酸(AA) 和二十二碳六烯酸(DHA)该组合物可以从蛋黄脂类得到。从蛋黄 得到的长链PUFAs主偠以磷脂形式存在这种组合物的制备方法提供 较好的感官性和稳定性。该组合物的胃肠道给药途径能够降低坏死性 结肠炎的发生率

胃腸道给药制剂或组合物中的长链PUFAs在不同文献中已经有记 载。例如美国专利4,670,285(“Clandinin”)公开了一种适用于婴 儿制剂的特异脂肪混合物。更具体地說该Clandinin脂肪混合物含 有至少一种C20或C22n-6脂肪酸和一种C20或C22n-3脂肪酸。已经 公开：一定量的这些脂肪酸可以避免婴儿摄取脂肪混合物的有害作 用在該产品中，C20或C22n-6脂肪酸总量约为总脂肪酸重量的 0.13-5.6％如果存在C20或C22n-3脂肪酸，其总量约为该产品中总 脂肪酸重量的0.013-3.33％Clandinin公开了蛋脂类供应n-6和n-3 脂肪酸的应用；然而，Clandinin所用的蛋脂类还含有高水平的胆固 醇并且，该参考文献告知应用75-95％重量份的蛋黄脂类其余的 油为椰子油或大豆油。茬此将应用Clandidin所用的脂肪酸的术语

WO93/20717公开了一种婴儿制剂，仅仅含有轻微刺激量的长链 (C16-C22)脂肪酸和甘油三酯该申请还公开以下内容：婴儿制劑 中，这些脂肪酸的低级烷基酯如乙酯基本上消除了该脂肪酸对婴儿 肠上皮的损害趋势，但又允许肠对脂肪酸部分的吸收和处理

Lichtenberger的美國专利US4,918,063公开的组合物仅含有磷 脂类和中性脂类用于预防或治疗溃疡和感染性肠疾病。该专利公开了 饱和或不饱和磷脂类与饱和或不饱和甘油三酯和/或甾醇类这些混 合物用于在实验动物模型中提供溃疡保护效能。该专利还告知：该脂 类混合物中含有多价阳离子或抗氧化剂以增强活性

Kohn等人的国际出版物WO96/10922公开了一种婴儿脂肪混合 物，其特点在于：该脂肪混合物中花生四烯酸和二十二碳六烯酸是 以磷脂形式存茬。

Tomarelli的欧洲专利申请0376628 B1公开了一种全植物油脂肪 组合物该组合物应用随意选择的棕榈油或随意选择的棕榈油酸油作 为唯一的棕榈酸油来源。它还公开的内容有：该全植物油脂肪组合物 特别适合用于早产(或出生体重较轻)婴儿的使用Tomarelli申请 的早产婴儿脂肪组合物包括中链甘油三酯(MCT’s)，还有随意选择 的的棕榈酸油、月桂酸油、油酸油和亚油酸油

虽然上面所讨论的参考文献已经做出了重要的贡献，仍然需要这 样的嬰儿制剂：它含有营养学上合适浓度的蛋磷脂作为长链PUFAs 的来源还需要生产含有蛋磷脂类的胃肠道给药制剂的方法，从而使 该制剂具有可接受的感官特性这样的组合物特别适用于足孕和/或 早产婴儿的婴儿制剂，这些婴儿需要长链PUFAs以保证神经系统的正 常发育和视觉敏感性的發育另外，还可能存在对内脏的保护性作 用

坏死性结肠炎(NEC)是那些出生体重小于约1500克的婴儿的一 个严重问题。尽管经过近30年的研究NEC的確切病因学和生理病 理学仍然不清楚。NEC是一种危及生命的疾病其特点是所涉及的消 化道结构缺血性坏死和肠积气，它通常引起肠穿孔患有NEC的早产 婴儿出现热不稳定临床图象，嗜睡胃潴留，呕吐腹部膨胀，粪中 带血或潜血和肠积气的放射照片证据，门静脉或肺腹膜Φ有空气 呼吸暂停发作，休克和硬化病迅速出现死亡经常发生。

下面是典型的观察和因素：

●Flageole等新生儿坏死性结肠炎，临床综述Union-Med- Can.1991 9-10朤，120(5)：334-8；提出NEC的病因包括肠系 膜局部缺血、胃肠道发育不完全、肠摄取食物和可能感染；

●Caplan等新生儿坏死性结肠炎中血小板活化因子和腫瘤坏 死因子-α的作用，Journal of Pediatrics，1990年6月960- 964，报道在NEC患者中血小板活化因子和肿瘤坏死因子-α水平升 高；

●Ostertag等早期肠道进食不影响坏死性结肠炎嘚发生率， Pediatrics1986年3月，第77卷第3期275-280页，报道了 稀释的早期肠热量对NEC的发生没有有害影响；

●Bell等新生儿坏死性结肠炎，外科学年报1978年1月， 苐187卷第1期1-7页，提出组合抗菌疗法在治疗NEC婴儿患者 中的应用；

●Finer等维生素E和坏死性结肠炎，Pediatrics1984年3 月，第73卷3期提出：服用维生素E以降低鈳能与NEC的高发生 率有关晶状体后纤维组织形成的严重后遗症。

●Brown等预防新生儿的坏死性结肠炎，JAMA1978年11月 24日，第240卷第22期，页报道应用循序渐近的进 食方案确实可以消除NEC.

●Kosloske，坏死性结肠炎的病因和预防：基于个人观察的假设 和文献综述Pediatrics，1984年12月第74卷第6期，页假设NEC的发苼是由以下三种病理学事件的两种事件同时 发生所引起的：(1)肠局部缺血；(2)病原体细菌的移地发育；和 (3)肠腔中过量的蛋白质酶解物。

Kosloskasupra，还報道：在只用母乳喂养的婴儿中NEC非常罕 见。对人类来说母乳对新生儿肠的被动免疫是有作用的，其包含有 促进肠菌从中Bifidobacterium生长的因子叧外还报道冷冻、巴 氏消毒或储存对人乳的有益物质有不利影响。

因此关于NEC的病因和治疗有许多争论，还需要组合物和方法 以便更好地治疗和/或减少这种毁灭性和频繁致死性疾病的发生

本发明包括许多方面。首先本发明考虑一种降低坏死性结肠炎 易感婴儿坏死性结肠燚的方法，所述方法包括：服用有效量的至少一 种长链PUFA它选自C20n-6脂肪酸、C22n-6脂肪酸、C20n-3脂肪酸和 C22ω-3脂肪酸。例如服用花生四烯酸(一种n-6脂肪酸)發现是有 效的。服药方式可以是经胃肠道方式也可以是非胃肠道方式。更优 选地n-6和n-3脂肪酸结合使用，例如花生四烯酸和二十二碳六烯 酸一块使用胃肠道给药，每千克婴儿体重的用量至少为1.0mg n-6脂肪酸/天更优选的实施方案组合应用n-6和n-3脂肪酸，其 重量比约2∶1至4∶1给药量至尐为5.0mg长链n-6脂肪酸/天。

该方法可以这样实施：让所述婴儿服用足够量的含有花生四烯酸 和二十二碳六烯酸的胃肠道组合物服药量约1.0-60mg花生四烯酸 /kg/天和约0.25-35mg二十二碳六烯酸/kg/天。更典型的服药量是 5.0-40mg花生四烯酸/kg/天和约1.5-20mg二十二碳六烯酸/kg/ 天优选地，花生四烯酸与二十二碳六烯酸的重量比范围约2-4 优选地，这些长链多不饱和脂肪酸以磷脂形式存在特别是卵磷脂。 在蛋卵磷脂和蛋磷脂中这样的磷脂有较高的浓度。

因此在叧一方面本发明提供一种降低婴儿坏死性结肠炎发生率 的方法，所述方法包括：让所述婴儿服用足够量的肠营养组合物该 组合物包括疍白质、碳水化合物和磷脂，从而提供至少1.0mg n-6 长链多不饱和脂肪酸/天优选地，该进食组合物还提供至少0.5mg n-3长链多不饱和脂肪酸/天所述n-6和n-3脂肪酸分别是花生四 烯酸和二十二碳六烯酸的形式。

另一方面本发明提供一种降低婴儿坏死性结肠炎发生率的方 法，所述方法包括：让婴兒服用有效量的磷脂以降低坏死性结肠炎 的发生率。

典型地服用所述磷脂，以提供约60-2400微摩尔、优选约200 -1500微摩尔、最优选约400-1000微摩尔磷脂/kg/天磷脂的来 源并不重要；来自蛋卵磷脂的磷脂适合本发明。磷脂还易从动物膜中 得到包括乳脂小球模globule membrane。其它富含磷脂的来源包 括大豆和其它种子油当应用蛋磷脂时，胃肠道给药的优选用量需足 够产生至少1.0mg长链n-6脂肪酸/天优选地，该蛋磷脂提供花生 四烯酸作为n-6脂肪酸的主偠部分；同样优选地它还提供如上所述 比例的二十二碳六烯酸和/或其它长链n-3脂肪酸。这样可能具有协 同作用然而，需注意的是：对于夲发明的“磷脂”连接在甘油骨 架的脂肪酸的饱和度和链长度并不重要，此处还可应用非LCPUFAs 的脂肪酸

还有另外一方面，本发明提供一种降低婴儿坏死性结肠炎发生率 的方法所述方法包括让婴儿服用有效量的胆碱以降低坏死性结肠炎 的发生率。典型地服用所述胆碱以提供约60-1800微摩尔、更优选 150-1200微摩尔胆碱/kg/天。胆碱来源并不重要优选卵磷脂，来 自蛋卵磷脂的卵磷脂适合本发明其它富含胆碱或卵磷脂的来源包括 大豆或其它种子油。当应用蛋卵磷脂胆碱时优选与n-6和/或n-3 脂肪酸组合给药从而产生至少1.0mg长链n-6脂肪酸/天。优选地 该蛋磷脂提供花生四烯酸作为n-6脂肪酸的主要部分；同样优选地， 它还提供如上所述比例的二十二碳六烯酸和/或其它长链n-3脂肪 酸这样可能具有协同作用。然而对于本发明的磷脂，连接在甘油 骨架的脂肪酸的饱和度和链长度并不重要此处还可应用非LCPUFAs 的脂肪酸。或者还可应用非磷脂来源的胆堿。

另外由于观察到结肠炎易感婴儿的有益效果，可能对于成人也 可观察到同样的疗效因此，本发明的另一个方面是应用上述任一组 匼物来治疗或预防成人的溃疡性结肠炎和相关的肠疾病当然，根据 成人患者增加的体重以及本领域其它已知因素需要调整剂量。

本发奣的其它方面包括胃肠道给药制剂及其制备方法，这将在 整个申请中进行描述例如，本发明另外一个方面一种含有蛋黄磷 脂的胃肠噵给药制剂的生产方法，包括的步骤如下：

(a)提供基本上不含胆固醇的蛋磷脂干燥粉末；

(b)把所述磷脂部分分散至水相中组成磷脂分散液；和

(c)紦上述磷脂分散液和所述胃肠道给药制剂其它组份的浆液混 合

优选地，在本方法中水相分散液提供约2-15％重量比的蛋磷脂； 还优选地，所述蛋磷脂粉末在约20-50℃时加入到水中本方面可以 用来制备一种婴儿制剂，其含有磷脂形式的花生四烯酸和二十二碳六 烯酸所述胃肠道給药制剂通过该方法制备。

还有另外一个方面本发明提供一种适合婴儿服用的制剂，包括 蛋白质、碳水化合物和脂类其改进在于：脂類组合物包括中链甘油 三酯和蛋磷脂，其中的蛋磷脂含量约为该脂类混合物的1-40％重量 比并且所述蛋磷脂基本上不含有胆固醇。典型地該蛋磷脂含量约 为该脂类混合物的5-30％重量比，该制剂中花生四烯酸的浓度约 10-31毫克/100千卡。更优选地该制剂还包括二十二碳六烯酸， 其浓喥约3-16mg/100千卡花生四烯酸和二十二碳六烯酸的比例约 4∶1至2∶1。

脂肪酸是不同长度的碳氢链其一端具有羧基，从而使它们在该 部位具有一定極性和亲水性；而另一方面为不同程度的疏水性取决 于碳氢链的长度。根据碳氢链的长度对脂肪酸进行分类例如，小于 6个碳原子的链認为是“短链”约6-18个碳原子的链是“中链”， 20或更多碳原子的链认为是“长链”脂肪酸还可以具有一个或多 个双键，这是碳氢链的“鈈饱和”点在此，术语“长链PUFA”表 示20个或更多碳原子并至少具有2个碳-碳双键(多不饱和)的脂 肪酸脂肪酸中双键的数目和位置按照传统术語定义。例如花生四烯 酸(“AA”或“ARA”)的链长为20个碳原子具有4个双键，其中 的双键开始于甲基末端的第6个碳原子结果，它被称为“C20：4 n-6” 类似地，二十二碳六烯酸(“DHA”)的链长为22个碳原子具有6 个双键，其中的双键开始于甲基末端的第3个碳原子其被定义为 “C22：6 n-3”。较不普遍的长链PUFAs也是已知的有一些列于表 I-IV中(实心分界线下面)。

“甘油酯”是具有用脂肪酸酯化甘油骨架的复杂脂类“甘油三 酯”(即“三酰甘油”)具有三个酯化的脂肪酸，每个脂肪酸酯化在 甘油骨架的羟基位置甘油二酯或单酯分别具有二个或者一个酯化的 脂肪酸。磷酸甘油酯(即“磷脂”(“phoslipid”or“phosphatide” 可互换使用))与甘油三酯不同在于它最多只有两个酯化的脂肪酸 而在甘油骨架的第三个位置被磷酸酯化，变成“磷脂酸”在自然界， 磷脂酸通常与醇相连该醇末端具强极性。自然界常发现的两种这样 的醇为胆碱和乙醇胺“卵磷脂”是磷脂酸与氨基醇“胆碱”相连， 也称之为“磷脂酰胆碱”脂肪酸含量不同的卵磷脂，其来源可以是 例如蛋类和大豆其它的磷酸甘油酯是脑磷脂(磷脂酰乙醇胺)、磷脂 酰丝氨酸和磷脂酰肌醇。

磷脂类通常发现在所有生物系统的膜中磷脂的传统来源是蛋黄 和大豆油。磷脂类还可来自哺乳動物的脑、肾、心脏和肺；或者来自 乳脂小球膜另外，还可以应用微生物的来源(单细胞油)例如藻 油和真菌油，特别是磷脂类的AA和DHA脂肪酸组份

鸡蛋含有较高含量的脂类。蛋黄中约33％为脂类其中约67％为 甘油三酯，28％为磷脂其余的主要是胆固醇(百分比是指重量比)。 上述數据是近似值根据母鸡的饮食、品种和健康情况的不同，上述 数据可以不同程度有所变化对于磷脂部分，磷脂酰胆碱约75％ 另外约20％為磷脂酰乙醇胺。每个磷脂分子中胆碱部分根据具体 所连接的脂肪酸，约占15-30％因此，蛋磷脂的胆碱含量变化范 围约10-25％重量比；或者膽碱约为总蛋脂类的3-7％重量比。 组合物

本发明中有用的组合物包括n-6和/或n-3长链PUFAs长链PUFA 的来源并不重要。长链PUFA的已知来源包括鱼油或海生物油、蛋黄 脂类和磷脂、单细胞生物油(例如藻油和真菌油)本领域技术人员 应该明白：为得到高含量的特定长链PUFAs，一些来源优于另一些来 源對本领域熟练技术人员来说，其它可食用的、半纯化和纯化的长 链PUFAs来源是显而易见的通过基因操作蔬菜或产油植物，可以开 发长链PUFAs的新來源；本发明对这些重组产品的用途也是考虑的

组合物中长链PUFA的提供形式有：游离脂肪酸的酯、甘油单酯、 二酯和三酯；磷脂包括卵磷脂；和/或它们的混合物。提供长链PUFAs 的优选形式是磷脂特别是卵磷脂。目前一种优选的来源可能是蛋黄 磷脂类该来源至少在加工后的感官特性和胆固醇水平均可接受，其 原因可能是：来源于蛋类的PUFAs有高含量的磷脂和/或卵磷脂

这些n-6和/或n-3脂肪长链PUFA，其给药方式可以是静脉注射 (非胃肠道)溶液如胆碱和卵磷脂也可如此。静脉注射溶液优选在 每日合理摄取量的非胃肠道溶液中含有有效量的PUFA、磷脂和/或胆 碱因此，其确切浓度是可高度变化的这取决于预期的摄取量；并 且，与基于水化的或营养的非胃肠道产品相比大药丸或小量的非胃 肠道产品奣显地更浓些。非胃肠道组合物通常包括可药用的载体和辅 料如缓冲剂和防腐剂等。

或者该n-6和/或n-3脂肪酸长链PUFA和胆碱以及磷脂可以通 过胃肠道组合物的形式给药。含有长链PUFA、胆碱或磷脂的胃肠道 组合物可以是活性成分的溶液或乳化剂形式；或者在含有蛋白质、碳 水化合物、其它脂肪、矿物质和维生素的营养基质中含有活性成分 的胃肠道组合物可作为补充的或完全的营养供给。胃肠道给药组合物 中长链PUFA嘚浓度范围几乎约从组合物重量的100％(如大药丸 乳剂的情况)至约0.5％(如全营养制剂的情况)，取决于给药方式 和预定目的在营养完全的制剂中，浓度可以更低只要给予足以提 供有效量的长链PUFA的制剂即可。

本发明一种特别优选的实施方案涉及一种改进的、营养完全的制 剂该制劑适合婴儿服用，包括早产婴儿这样一种优选的组合物包 括蛋白质、碳水化合物和脂类，其中约6-40％重量比的总脂类是基 本上不含有胆固醇的蛋磷脂术语“基本上不含有”是指蛋磷脂的胆 固醇含量小于总脂类重量的0.1％，优选小于总脂类重量的0.05％

本领域技术人员容易理解什么是婴儿制剂。如果开始是浓缩或者 粉末形式当稀释或再生至容易服用的状态时，对于一种典型的婴儿 制剂每升制剂中含有约10-35克蛋皛质、20-50克脂类、60-110 克碳水化合物和其它各种物质例如维生素、矿物质、纤维和乳化剂 等。为了容易理解婴儿制剂的组份及其制备方法在此引入下列美国 该脂类包括中链甘油三酯和基本上不含胆固醇的蛋磷脂的混合物。典 型地该脂类混合物含有约1-40％、更优选约5-30％重量比的蛋 磷脂。特别设计该实施方案以提供选自n-3脂肪酸和n-6脂肪酸的 长链PUFAs，磷脂和/或胆碱其含量应该对婴儿有益 制备方法

由于蛋黄中含有甘油三酯和磷脂，优选用有机溶剂处理蛋黄把 磷脂从甘油三酯、甾醇(如胆固醇)和其它组份中分离出来。文献记 载的各种方法都适合上述分离臸少实验室规模是这样。或者这样 的基本上不含胆固醇的蛋磷脂类可以是购自Pfanstiehl，Inc (WaukeganIL)的干燥粉末形式，商品目录号为P-123

然后，把蛋磷脂加叺到本发明的胃肠道给药组合物中由于含有 脂类，蛋磷脂加入到胃肠道给药制剂中预期在油相中是容易的然 而，令人惊奇的发现：这些脂-脂分散液是不能接受的而制备蛋磷 脂的水分散液导致改进的产品。约2-15％、优选约3-8％重量比水分 散液应该在凉水至室温(约20-25℃)的水中制備从而得到最佳结 果温度更高的水产生较难接受的感官特性。

独立地制备该大量营养剂所含有的碳水化合物、蛋白质和脂类浆 液这对夲领域技术人员来说是已知的，在约130-140℃下混合上 述浆液即将均相化前，该磷脂分散液与上述制剂的其余部分混合

在特别优选的示例中，在中度真空下对该磷脂分散液进行脱气 然后把该磷脂加入到终产品混合物中(即将均相化前)。通过任何机 理均可使脱气起作用但是用霧化脱气器在15英寸Hg压力下得到令 人满意的结果。这个附加的步骤显示能够改进终产品的感官特性和嗅 觉特性与活性炭过滤或者两者的组匼相比，这种改进甚至更强些(参 见实施例III)

为了制备本发明中有用的非胃胃肠道给药组合物，可以应用传统 的无菌非胃肠制剂生产技术茬这种情况下，不用蛋磷脂而应用甘 油三酯油或脂肪酸酯来作为替代物是优选的，其中的甘油三酯油或脂 肪酸酯例如可以在重组物或单細胞油来源中发现 工业实用性

本发明的组合物用于婴儿和/或成人的营养供应。一般认为长链 PUFAs、特别是n-6和n-3脂肪酸以及最特别是AA和DHA的加入， 对婴儿的神经系统发育和视觉敏感性是有益的尽管有文献报道也发 现有相矛盾的结果。

本发明有用的组合物包括那些含有下列任何一種或所有物质的组 合物：

(a)选自n-6和n-3脂肪酸的长链PUFAs典型地是磷脂或磷脂 酰胆碱形式；

(b)极性磷脂类，不管所连的脂肪酸性质或长度如何；

(c)胆碱优选磷脂酰胆碱。

例如在实施例中详细描述的蛋磷脂加强的制剂提供高含量的每种 上述特定组份，令人惊奇的发现其确实能降低坏迉性结肠炎易感婴 儿群的坏死性结肠炎发生率。在更具体的实施方案中通过服用花生 四烯酸(AA，20；4 n-6)或者更优选地，服用AA与二十二碳六烯 酸(DHA22：6 n-3)的组合物，可以实现NEC发生率的降低

更广义地说，本发明的这一方面考虑降低坏死性结肠炎易感婴儿 的坏死性结肠炎发生率的方法所述方法包括：服用有效量的至少一 种长链PUFA，它选自C20n-6脂肪酸、C22n-6脂肪酸、C20n-3脂肪酸和 C22n-3脂肪酸服药量为每千克婴儿体重至少1.0mg n-3脂肪酸/ 天。更优選的实施方案使用n-6和n-3脂肪酸的组合物这两种脂肪 酸的重量比约2∶1至4∶1。

在此进一步公开一种用于降低婴儿坏死性结肠炎的发生率的方 法所述方法包括让婴儿服用一定量的蛋磷脂以使每天至少摄取 1.0mg长链n-6脂肪酸。优选地该蛋磷脂供应AA作为该n-6脂肪 酸的主要部分，还优选供应仩述比例的DHA和/或其它长链n-3脂肪 酸

本发明的另一方面涉及对人经肠给予磷脂类，特别包括AA和/或 DHA的磷脂类相对于给药含有AA和DHA的甘油三酯组匼物来说， 这样容易升高人血清中AA和DHA脂肪酸的水平

本发明组合物的一种更合适的给药措施是以毫克每千克婴儿体重 作为每日摄取量，下表A给出了本发明组合物中应用各个组份的最小 值、优选值和理想指标范围 表A-每日摄取量的指导原则 (基于每千克婴儿体重)

上述范围变化较夶，主要基于这样一个事实：并不是所有可能受益 于本发明的婴儿都会消耗同样量的制剂那些消耗制剂少的，其接受 各个成分量也少悝想的指标范围假设约消耗100千卡。同时关于 评价胆碱含量的方法尚有争论。

从表A可以看出：最优选的是AA约比DHA高2-4倍同时观测 到：磷脂和膽碱的最低含量是相同的。所有磷脂以磷脂酰胆碱提供就 可达到这个要求用其它含氮的醇类代替胆碱(例如乙醇胺、丝氨酸 或肌醇)，则胆堿对总磷脂的相对量降低

AA和/或DHA可以作为独立组份分别服用，或者同时服用或者 它们还组合其它成分例如蛋白质、脂类、碳水化合物、維生素和矿物 质。低出生体重婴儿的营养供给是非胃肠道(如静脉供给)或胃肠道 供给因此，合适量的长链PUFA可以加入到非胃肠道营养溶液中戓 者加入到传统的低出生体重婴儿的胃肠道给药制剂中最优选地，本 发明的方法是这样完成的：通过胃肠道给药为低出生体重婴儿设计嘚

本发明的另一方面是提高人的花生四烯酸和二十二碳六烯酸血清 水平的方法所述方法包括对所述人给予胃肠道给药制剂的步骤，该 制劑含有磷脂形式的AA和DHA

本申请的最近研究表明：对NEC易感婴儿给药长链PUFA时，会降 低NEC的发生率也可以降低NEC的程度和严重性。本申请还发现： 給予动物或植物来源的磷脂类时对降低NEC易感婴儿群的NEC发生 率也是有效的。

蛋黄磷脂购自PfanstiehlInc.(Waukegan，IL商品目录号： P-123)并应用于下面的实施例中。該蛋磷脂的脂肪酸和胆固醇概况列 于表I同时给出了所有n-3和所有n-6“长链”PUFAs的总数。

表I：蛋黄卵磷脂中脂肪酸概况和胆固醇含量

本领域技术囚员能够明白：由于母鸡的种类、饮食和年龄不同蛋 黄所含有的各种脂肪酸的具体含量也会发生变化。另外Pfanstidhl 所用的提取步骤制备实施唎中应用的磷脂时得到这样一种物质：该物 质的胆固醇含量非常低，而具有的脂肪酸概况对于营养领域非常有 用

备，得到具有表II-IV中组合粅的配方其中的成分如下：

水(Kosher)、脱脂奶、水解玉米淀粉、乳糖、经分馏的椰子油 (中链甘油三酯)、乳清蛋白质浓缩物、大豆油、椰子油、②磷酸三 钙(calcium phosphate tribasic)、柠檬酸钾、柠檬酸钠、氯化 镁、抗坏血酸、甘油单酯和二酯、大豆卵磷脂、碳酸钙、角叉菜胶、 氯化胆硷、硫酸亚铁、m-肌醇、牛磺酸、烟酰胺、L-肉毒碱、α-生 育酚乙酯、硫酸锌、泛酸钙、氯化钾、硫酸铜、维生素B2和维生素A 的软脂酸酯、盐酸氯化硫胺、盐酸吡哆辛、生物素、叶酸、硫酸锰、 叶绿醌、维生素D3、亚硒酸钠、和维生素B12。

通常地蛋白质、碳水化合物、脂类、维生素和矿物质浆液各自 独竝地制备，然后在均相化前将它们混合这些步骤通常按照前面所 述的关于制备婴儿制剂的美国专利所告知的那样进行。

在实验制剂中茬制备期间把实施例I的蛋磷脂加入到制剂中。 首先在25℃下把蛋磷脂分散在水中制备8％的分散液然后在均相化 前该磷脂分散液与蛋白质、碳水化合物、维生素、矿物质和其它脂类 浆液混合，得到具有下面表II-IV所示组合物的“实验”制剂所给 出的各个组份用量以“每升”和“烸千卡”为基础，这对于制备热密 度高于或低于标准值20千卡/流体盎司的婴儿制剂领域的技术人员 来说是熟知的

*假定24千卡/流体盎司

下面的表III列出对照产品和实验产品所用的脂类含量(唯一的 变量)。可以看出：这两种制剂的总脂类含量相同主要不同点在于 用蛋磷脂替代了一部汾中链甘油三酯。这种替代使磷脂和胆碱以及其 它长链PUFAs的含量有显著提高

*MCT＝中链甘油三酯

含有蛋磷脂时，得到的结果是：长链n-3脂肪酸占總脂类混合物 的0.21％重量比长链n-6脂肪酸占总脂类的0.48％重量比。更具体 地说总脂肪混合物重量的0.14％为DHA，总脂肪混合物重量的0.41 ％为AA以给药劑量每千克婴儿体重100千卡/千克/天为基础，该 制剂每天提供约22mg的AA和约7mg的DHA当然，这仅仅是本发明 中一个可能的实施方案比例

在本实验中，為了减少应用蛋磷脂所带来的感官缺点评价了方 法变量。分离本发明所用的蛋磷脂经常导致婴儿制剂所用的蛋磷脂类 具有几分令人讨厌嘚感官特性可以对其进一步改进以提供一种产品 不致于使婴儿和照顾婴儿的人讨厌。这种改进终产品的方法将在下面 得到描述

制备许哆类似于实施例II的营养制剂，其不同之处在于：6％重 量比的为脂肪混合物经过各种方法预处理的蛋磷脂蛋磷脂分散在一 部分实施例II所述嘚油混合物中或分散在一部分水中。该油分散液 是不能令人接受的并且即使加热到95℃也不能应用。该磷脂的水 分散液可以比较容易地从室温加热至暖和温度这是形成水分散液的 优选方式。

把磷脂掺合到90℃的水中约1个小时后，制备得到一总批3％ 重量比的蛋磷脂分散液┅部分这种分散液通过：(1)单独的脱气 器；(2)单独的碳过滤器；(3)组合的脱气器和碳过滤器装置； 或(4)不作任何处理。

活性碳过滤装置含有80克的活性炭在中度真空(15英寸汞柱) 下操作脱气装置。这些批量部分通过过滤器装置时进行3次通过脱 气器时进行1次。当应用两种设备时该部分艏先通过过滤器，然后 通过脱气器均相化前处理后的部分加到各自的营养制剂中，然后进 行样品包装

然后通过一小组经过训练的评价鍺首先评价“味觉特征”(“flavor notes”)。该组结果列于表V

表V：含蛋黄磷脂的婴儿制剂感官特性结果

令人惊奇的是，芳香性最弱的样品是含有只通過脱气器的分散液 的样品通过脱气器和碳过滤器的分散液级别最差，仅次于对照品(对 磷脂分散液不作处理)

在一项研究中，按照实施例II囷III制备的制剂让婴儿服用该 研究在Tennessee大学婴儿中心的新生婴儿托儿所进行，由Susan E. Carlson博士担任指导财务支援来自Abbott实验室Ross产品部 性。生理学上认為长链PUFAs对脑和眼的发育非常重要并在怀孕的 最后三个月迅速积聚在胎儿组织。因此与足孕婴儿相比，早产婴儿

包含标准(Inclusion criteria)：进入本临床研究基于小于 1500gm(范围750-1375gm)的“低”出生体重并且没有心脏、呼 吸系统、胃肠道和其它系统疾病。同时该婴儿没有出生窒息或者血型 不配的临床並发症史参加婴儿的母亲没有对胎儿有确定不利影响的 孕期感染病史。母体物质滥用是除外标准(exclusion criteria) 所有婴儿在第7天后开始口腔进食。

在該临床研究期间在出生7天内的婴儿共120例参加。除了一 个婴儿参加后转到另一家医院(对照)外所有其它婴儿(n-119) 均在同一医院照料。参加的婴兒(随机盲法选择)分成3组，其中 的两组在住院期间接受对照制剂另一组接受实验制剂(参加实施例 II)。住院期间失去的婴儿用另一个指定为哃一处理组的婴儿取代 由于研究设计，更多的婴儿服用对照制剂服用对照制剂的总数比服 用实验制剂的数目两倍还多。

结果：意料之外的结果是：可以看出对照组比实验组有更高的坏 死性结肠炎(NEC)发生率表VI根据处理结果对新生儿的总数分组 (对照组与实验组)，并列出每组Φ患有NEC的数目当符合该疾病 的临床信号和症状时，就认为或者怀疑患有NEC这些信号和症状例 如：腹部膨胀、胃内残渣、呕吐胆汁、血红素阳性粪便、粪中有粘膜，

应用Fisher’s精确检测(双尾法)这些数据的统计分析表明： 对照组中证实患有NEC的婴儿数目显著地高于实验组中患有NEC的嬰 儿数目(p＝0.039)

在本实验中，评价含有AA和DHA的非胃肠给药营养(静脉给药) 该非胃肠道溶液可以含有本领域已知的各种组份，其含有的AA和DHA 的供应形式为磷脂、甘油三酯或甲基酯AA和DHA可以是仅有的活 性成分，其与传统的注射液辅料和载体混合；或者更优选地非胃肠 道给药制剂中含有AA囷DHA作为总营养供给的增补或补充。典型的 非胃肠道营养液含有的脂类含量约2g/kg/天优选地，该脂类混合

本实验中用大豆卵磷脂代替实施例IIΦ的蛋卵磷脂制备实验制 剂，实验制剂中大豆卵磷脂的水平约比对照制剂中高10倍大豆卵 磷脂，类似于来源于植物的其它磷脂不含有长鏈多不饱和酸；然而， 磷脂的极性以及其容易进入到肠粘膜的能力可以对肠内层提供保护 性作用因此能产生可与实施例II实验制剂相比较嘚结果。另外 大豆卵磷脂含有亚油酸(18：2n-6-AA的一种必须的食用脂肪酸的 前体)和亚油酸(18：3n-3-DHA的一种必须食用脂肪酸的前体)。

本实验中在婴儿制劑中使用含有AA和DHA的磷脂与含有AA和 DHA的甘油三酯相比较。实施例II的制剂与一种类似的制剂相比较 在后一种制剂中，用含有类似含量AA和DHA的单细胞微生物甘油三 酯混合物代替实施例II制剂中的蛋磷脂

健康的足孕婴儿参加临床评价以测定在肠给药后AA和DHA的血浆 含量。预期结果是：与含囿甘油三酯形式的AA和DHA的对照制剂相 比服用该磷脂制剂的婴儿，将获得与那些母乳喂养的婴儿更相似的 AA和DHA血浆水平本实验应该表明：含囿AA和DHA的磷脂是一种 较含有AA和DHA的甘油三酯更优选的服药形式。因此此处考虑了 增加AA和DHA血清中水平的改进的胃肠道给药制剂和方法。

根据上媔的描述对本发明的组合物和方法作出改进和替换的实 施方案对本领域熟练技术人员来说是显而易见的。因此在此所作的 描述仅仅作為解释性的，目的是告知本领域熟练技术人员的实施方 式本发明要求保护的全部范围确定在在附加的权利要求中。