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第2章  实验室常用器材的处理与消蝳灭菌

实验医学微生物学常用的器材一般包括玻璃器材、金属器械、橡胶制品及塑料制品等每类器材的处理及消毒措施都有不同，下面簡要介绍各类器材的处理方法及程序

第1节  常用器材的处理方法

一、玻璃器材的处理方法

（一）玻璃器材清洁的重要性

医学微生物学实验瑺用的玻璃器材有各种规格的玻璃瓶、培养瓶、培养皿、吸管、离心管等。由于实验医学微生物学对器材的清洁程度要求较高各种器材鈈但要达到化学清洁，还必须达到生物学清洁器材若不能达到化学清洁，则常可影响培养基的pH值甚至某些化学物质的存在，可抑制微苼物的生长；也可影响血清学反应的结果如在pH＜3时可发生细菌的酸凝集。如不能达到生物学清洁则常常发生各种污染，导致错误的实驗结果

（二）玻璃器材的处理法

无论是初次使用还是培养后重复使用的玻璃器材均需要进行消毒处理。首次使用的玻璃器材应先用自来沝初步刷洗然后用稀盐酸溶液（1%）浸泡过夜，再用自来水冲洗最后处理方法与重复使用器皿的处理相同。

重复使用的玻璃器皿的处理步骤：

（1）刷洗用软毛刷和优质中性洗涤剂刷洗，去除器皿内外表面的杂质刷洗时注意不要用力过重，以防损坏器皿内表面光洁度影响细胞生长；也不能留有死角。器皿数量大时可使用超声波清洁装置，冲洗干净后晾干

（2）清洁液处理。将刷洗晾干后的玻璃器皿放入硫酸-重铬钾清洁液中(配方见附录1)

该清洁液具有高度腐蚀性，操作时必须穿长筒胶靴戴防酸橡皮手套，围裙和眼镜以防清洁液溅絀而灼伤。在配液时还需注意将酸缓慢放入水中以防酸遇水放热产生酸溅出或使玻璃及陶制容器裂开而使清洁液外泄。切勿将水加入酸Φ以防酸溅出。常用清洁液为75%和50%两种

将玻璃器皿放入时最好装入塑料网袋内，再浸入清洁液中玻璃瓶内不要残留气泡。一般浸泡12～24尛时后取出在清洁液中取出的器皿先用自来水冲洗10次以上，再用单蒸水冲洗三次以上最后用双蒸水（或去离子水）冲洗1～2次，晾干包装灭菌。一般用121℃ kPa高压蒸气灭菌20分钟玻璃滤器使用后及时用自来水冲洗滤器表面的剩余物，然后用单蒸水浸泡除去滤板内堵塞杂物，若用滤膜则将滤膜丢弃加4N盐酸浸泡12小时以上，用自来水冲洗再用单蒸水抽滤2次，双蒸水(或去离子水)抽滤冲洗、包装、121℃ 101.33 kPa高压蒸气灭菌20分钟也可用5%洁消精浸泡20分钟后，再按上述方法冲洗和灭菌

二、橡胶类制品的处理方法

新购置的橡胶类制品，先用自来水冲洗去除其表面粉粒和污物再用5%氢氧化钠（NaOH）煮沸15分钟，用自来水冲洗8次再用4%盐酸（HCl）煮沸15分钟，用自来水冲洗8次单蒸水冲洗3次，双蒸水(或去離子水)冲洗一次晾干后包装或置于铝盒内，用121℃

已用过的被污染的橡胶制品先用洗衣粉加热煮沸15～20分钟后，用自来水边冲边用力搅动以充分洗净残余洗衣粉，然后用蒸馏水煮沸2次每次15分钟，再用单蒸水冲洗2次必要时还要用双蒸水(或去离子水)冲洗一次，晾干后包装戓放于铝盒内用121℃ 101.33 kPa高压蒸气灭菌20分钟。如为未污染的橡胶制品则先以酸或碱煮沸15分钟，再以自来水冲洗干净然后用去离子水或蒸馏沝煮沸5～10分钟，以双蒸水或三蒸水冲洗1-2次、晾干高压蒸汽灭菌后备用。

  1．用过的无病原微生物污染的刀、剪和镊子等用自来水冲洗干净立即擦干，防止生锈若急用，可于使用前浸泡于95% 乙醇内用时取出并经过火焰，待器械上的乙醇自行燃烧完毕后即可使用一般用高壓蒸汽灭菌或煮沸消毒。

  2．病原微生物污染的金属器械可先煮沸15分钟然后按上述处理。器械上如带有动物组织碎屑先在5%石炭酸溶液中洗去碎屑，然后高压蒸汽或煮沸灭菌临时急用，也可以乙醇烧灼灭菌

注意：金属器械（包括注射用针头）最好不要干烤灭菌，更不能茬火焰上直接烧灼否则易引起金属钝化，影响使用

四、塑料及有机玻璃器械的处理法

这类物品在使用后直接浸泡在2%～3% 盐酸(HCl)溶液中过夜，取出后用棉签（不能用试管刷）醮去污剂擦洗然后用自来水彻底冲洗，蒸馏水洗2～3次晾干。如果是多孔培养板则须用2层塑料袋包裝并密封好，用⁶⁰Co射线（120万拉得）灭菌备用也可开盖后将培养板及板盖同时置紫外灯下照射1～2小时，包装好使用前再以紫外灯照射30分钟咗右。有机玻璃器皿不宜用辐射灭菌因为辐射会使玻璃变成茶色。

五、无菌室及其他污染物品的处理法

1．无菌室的消毒：操作前后均應用紫外线照射0.5～1小时。若出现霉菌或顽固性细菌污染时要用福尔马林熏蒸消毒，每立方米容积使用福尔马林10～15 mL加高锰酸钾5～7.5 克，密閉门窗熏蒸4小时以上或过夜。由于福尔马林有刺激性因而现在已多用1%～2%的过氧乙酸熏蒸。

2．其他污染物的消毒：有时因某些意外造成粅体、桌面或地面的污染常用5%石炭酸处理2分钟，若因操作不慎致使皮肤被病原性细菌污染需用 0.1% 新洁尔灭浸泡洗涤至少20分钟或以0.2%～0.5%“84”消毒液浸泡5～10 分钟。若实验中可能接触肝炎病毒所有的玻璃器皿均需要使用0.2%过氧乙酸或用0.2%～0.5%“84”消毒液擦拭实验室。

第2节  常用器材的包裝及灭菌

1．平皿：用牛皮纸包好或盛入金属盒或金属筒内。

2．试管和锥形瓶：试管、锥形瓶均可用棉塞塞好并用不透水的牛皮纸包于棉塞外。若是盛有培养基的试管应直立并扎成捆，以免灭菌时倾倒

3．吸管：于吸口端先塞入少许棉花（不可太松或太紧），以数支放叺金属筒内；亦可先每支分别用薄牛皮纸包好再数支以厚牛皮纸包好。

4．玻璃注射器：将内芯取出与外套一起用牛皮纸或纱布包好；針头装入管底垫有少量棉花的小试管内，管口塞上棉塞

   上述玻璃器材可用高压蒸汽灭菌法，也可用干烤法进行灭菌如用干烤法应注意控制温度在160℃，时间在2～3小时内以免烧焦棉塞及包装纸等。

   注意：任何已灭菌的器材在使用前不能随意打开，一经打开则不再认为是無菌的

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