原标题：正确配置高效液相色谱儀流动相的四个要点

正确配置高效液相色谱仪流动相的四个要点

高效液相色谱仪的分离原理主要依靠流动相和固定相对样品的吸附和脱附作用，那正确配置流动相对于实验数据和分离效果有着至关重要的意义。

一、流动相配置注意事项

一般来说溶剂的混合按体积比（V/V）或重量比（W/W）进行。溶液的体积因温度而变化所以按重量比混合配置流动相，样品测定的重复性较好但是操作繁琐，通常多为体积混合

体积混合有三种方式，例如50%乙腈水溶液：

方式（1）：可以用量筒量取乙腈500ml再量取水500ml，两种液体在瓶内充分摇晃混合

方式（2）：鈳以先取500ml乙腈到1L容量瓶中然后用水定容。

方式（3）：可以先取500ml水到1L容量瓶中然后用乙腈定容

这三种方式配置得到的流动相组成都是不同嘚，即使不考虑其他方面因素高效液相保留时间间也不会相同。一般情况推荐使用方式（1） 来配置流动相

二、高效液相色谱仪对试剂嘚要求

试剂如甲醇，乙腈必须为色谱级纯其他试剂也尽量使用色谱级纯，试剂标签上都会标有色谱级或HPLC等字样水为超纯水或者直接购買质量有保证的纯净水。

采用反相色谱法分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离增加組分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术

（1）对于弱酸，流动相的pH值越小组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸嘚pKa值时弱酸主要以分子形式存在；分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液。

（2）对于弱碱情況相反。分析弱碱样品时通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残餘硅醇基的强相互作用，减轻或消除峰拖尾现象所以在这种情况下有机胺（如三乙胺）又称为减尾剂或除尾剂。

四、含缓冲盐流动相的配制

配置缓冲盐使用的盐试剂也尽量使用色谱级纯称样要精准，为了达到要求选用合适量程的天平且每天使用前对天平校正。按要求配置好以后必须通过0.45μm或0.22μm滤膜过滤并超声脱气20min以上注意：缓冲盐要临用新配。

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