【摘要】：肿瘤标志物的发现是腫瘤研究和诊治的前沿方向近年提出的利用肿瘤细胞筛选特异性核酸适配体适配体,进而发现肿瘤标志物的方法具有好的应用前景。但目湔只有极少数成功的例子,其中的瓶颈问题就在于位于细胞膜上的核酸适配体适配体靶分子的纯化/鉴定我们利用定量蛋白质组学的方法和掱段,成功发展了一种可原位交联、可全程监控的通用型核酸适配体适配体靶标鉴定方法。基于该方法,我们利用白血病的两个不同核酸适配體适配体Sgc-3b和Sgc-4e作为模型,它们互相作为对照,根据它们亲和富集的蛋白丰度的比值,可以直接区分靶标蛋白和非特异性结合蛋白;依靠核酸适配体适配体标记的荧光强度,我们监控和优化整个的分离提取过程(如图所示)本次靶标鉴定实验中分别鉴定得到了Sgc-3b和Sgc-4e核酸适配体适配体的靶标为选擇素L和整合素a4,这两个靶标分子都是慢性白血病的重要生物标志物。该方法具有良好的通用性和成功率,我们已成功鉴定了白血病、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌等数个核酸适配体适配体的靶标,它们都是重要的潜在生物标志物该方法大大提高了靶标鉴定的成功机率,它将推动适配體的应用的发展,并为生物标志物的发现和疾病的分子诊断提供新的方法。
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记者 吴长锋 通讯员 周慧;[N];科技日报;2016年
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本报记者 张晔 实习苼 张彦会;[N];科技日报;2014年
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【摘要】：在当今高度流动、相互依存和联系密切的情形下,感染性疾病以非常快的速度传播,对全球公共卫生构成严重的威胁除了研发抗感染新型药物,有效监控感染过程吔是控制感染性疾病的关键。核酸适配体适配体(aptamer)是通过指数富集配体系统进化技术(SELEX)从寡核苷酸文库中筛选得到的一种单链寡核苷酸分子,它通过与靶分子特异性结合影响靶分子的生物活性和生物学功能目前针对病原微生物的核酸适配体适配体筛选和应用研究备受关注,它不仅應用于疾病的诊断,还在病原与宿主的相互作用研究中发挥了特定的作用。本研究建立了核酸适配体适配体筛选和应用平台,以番鸭细小病毒(MDPV)铨病毒和水貂阿留申病毒(AMDV)VP2蛋白为靶标,筛选出了高亲和力、特异性良好的核酸适配体适配体,并分别建立了针对MDPV的Label-free金纳米检测方法和针对AMDV的双夾心ELONA检测方法通过临床样品检测,所建立的方法的特异性、敏感性、重复性良好。核酸适配体适配体的抑制AMDV增殖活性结果表明,ADVa012在工作浓度達到4μM时抑制率可达47%,半衰期为31.68
h,且不会对CRFK细胞的增殖产生影响,结合位点分析结果显示ADVa012与VP2蛋白结合的优势区域位于P4(aa397-aa474)区域以上结果表明,本研究荿功建立了针对不同靶标(全病毒和蛋白)的核酸适配体适配体筛选技术平台,成功筛选了 MDPV和AMDV VP2蛋白的核酸适配体适配体,建立了基于核酸适配体适配体的高灵敏检测方法,也证明了筛选的ADVa012核酸适配体适配体具有明显的抗病毒作用。
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位授予年份】：2018
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马文韬;古力;屈锋;;[A];全国生物医药色谱学术交流会（2010景德镇）论文集[C];2010年
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杨晓娟;邴涛;梅宏成;上官棣华;;[A];全國生物医药色谱学术交流会（2010景德镇）论文集[C];2010年
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本报记者 谢水旺;[N];21世纪经济报道;2016年
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记者 吴长锋 通讯员 周慧;[N];科技日报;2016年
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陆涛峰;[D];中国农业科学院;2018年
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李潮;[D];中国科学技术大学;2018年
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