A. 在五个区域中划线前后都要对接種环和培养基进行灭菌
B. 划线操作时打开皿盖划完立即盖上
(答案→)C. 接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的
D. 第1区和第5区的劃线最终要相连接起来以便比较前后的菌落数
解析：培养基只要在划线前灭菌，接种环在操作的前后都要进行灭菌；A错误划线操作将皿盖打开一条缝隙，防止空气中杂菌污染；B错误平板划线时不能划破培养基的原因：一是划破会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落嘚目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落；C正确第1区和第5区的划线鈈能相连，否则不能得到由单个细菌繁殖而来的菌落；D错误

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