反应的关键因素主要有引物的选擇与设计酶的质量.模板的制备,在前二者都稳定可行的情况下PCR模板的制备尤为重要.模板处理方法的选择及操作人员的基 本技能,决定汾离模板核酸(DNA或RNA)的质和量及PCR的成败.而提高模板核酸质量的 关键是除去杂质(、酶、脂肪等).除去抑制Taq DNA聚合酶活性抑制因子提高 模板核酸的产量.
传统的核酸模板提取方法是采用去垢剂如SDS等来破坏细胞组份,溶解细胞膜 使蛋白质变性,再用蛋白酶K来消化去除蛋白质尤其是與DNA结合的蛋白质,再用 酚:氯仿抽提然后用乙醇或异丙醇沉淀核酸,供PCR实验用.但近几年来也发展了些 简便实用较为有效的标本消化处理方法.亦可满足PCR实验的要求.采用哪种方法消化 处理标本视PCR实验的目的(是科研还是检测)及环境条件而定.
模板核酸的提取制备方法
(一)蛋白酶K消化裂解法: 适用于所有标本的消化处理,尤以DNA样品为佳.如组 织细胞(包括石蜡包埋组织)绒毛、毛发、精斑、血液(、血浆、全血)局部分泌 物、尿粪便等.
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7. 下列关于生物学研究方法的叙述Φ错误的是 ( )
A .噬菌体侵染大肠杆菌实验中,搅拌、离心的目的是把噬菌体的 DNA 和蛋白质分离
B .可用同位素标记法研究 DNA 的半保留复制
C .使用纸层析法分离叶绿体中的色素时不能让层析液没及滤液细线
D .可以用差速离心 法分离各种细胞器
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