【摘要】：本文致力于设计和制備基于聚乙烯亚胺(PEI)的低毒性,高转染效率的新型基因载体,以期将促进内皮细胞增殖的ZNF580基因质粒递送到EA.hy926内皮细胞内,通过基因转染和表达,实现促進血管内皮细胞(ECs)的增殖和迁移的目的1.将低分子量聚乙烯亚胺(PEI,Mw=1800)和聚乙二醇单甲醚(mPEG)分别接枝到可生物降解的聚乳酸-co-羟基乙酸(PLGA)上,得到嵌段共聚粅甲氧基聚乙二醇-b-(聚乳酸-co-羟基乙酸)(mPEG-b-PLGA)和PEI-b-PLGA-b-PEI。经过上述两种嵌段共聚物的自组装,制备出以PLGA为疏水核,以mPEG和PEI为混合壳层的复合嵌段共聚物胶束解体研究,并负载了能促ECs增殖的DNA质粒pEGFP-ZNF580(绿色荧光蛋白融合质粒pEGFP-ZNF580)通过改变壳层mPEG和PEI的比例可以较容易的降低嵌段共聚物胶束解体研究的细胞毒性或提高嵌段共聚物胶束解体研究/质粒DNA(pDNA)复合物的转染效率。利用动态光散射(DLS)研究了复合嵌段共聚物胶束解体研究体外的降解过程;DLS结果表明复合嵌段囲聚物胶束解体研究和嵌段共聚物胶束解体研究/pDNA复合物的粒径和zeta电位均适合于细胞内吞;(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐)比色法(MTT)细胞毒性实验表明当复合嵌段共聚物胶束解体研究中mPEG-b-PLGA/PEI-b-PLGA-b-PEI比例为3/1时,复合嵌段共聚物胶束解体研究表现出低的细胞毒性;细胞增殖实验表明,该复合嵌段共聚物胶束解体研究/pDNA复合物能够促进内皮细胞的增殖2.为了平衡嵌段共聚物胶束解体研究基因载体的细胞毒性和转染效率,以实现基因载体较高的转染效率,同时降低载体的细胞毒性,制备了两种两亲性嵌段共聚物甲氧基聚乙二醇-b-聚(乳酸-3(S)-甲基-吗啉-2,5-二酮)(mPEG-b-PLMD)和聚乙烯亚胺-b-聚(乳酸-3(S)-甲基-吗啉-2,5-二酮)-b-聚乙烯亚胺(PEI-b-PLMD-b-PEI),通过这两种共聚物在水溶液中的自组装,制备出一系列以PLMD为内核,mPEG和PEI链段为壳层的复合嵌段共聚物胶束解体研究。采用这种复合嵌段共聚物胶束解体研究做为基因载体,负载了能促ECs增殖的DNA质粒pEGFP-ZNF580嵌段共聚物胶束解体研究及嵌段共聚物胶束解体研究/pDNA复合物的流体力学直径(Dh)和zeta电位的测定结果表明,该基因载体的粒径和zeta电位都适合于细胞内吞和细胞转染;嵌段共聚物胶束解体研究/pDNA复合物的MTT实验和转染实验结果表明,通过調节复合嵌段共聚物胶束解体研究壳层中mPEG/PEI比例可以方便的调控基因载体的细胞毒性和细胞的转染效率;Western blot分析结果表明该基因载体可以促进转染细胞内ZNF580蛋白的表达,而且随着复合嵌段共聚物胶束解体研究壳层中PEI链段比例的增加,转染细胞内ZNF580蛋白的表达水平是逐渐升高的;此外,划痕实验證明了经由嵌段共聚物胶束解体研究/pDNA复合物转染的EA.hy926细胞的迁移能力也得到了增强。因此,这种复合嵌段共聚物胶束解体研究作为基因载体成功的负载了pEGFP-ZNF580质粒并转染EA.hy926细胞,通过细胞内ZNF580基因的成功表达,细胞的增殖和迁移能力明显增强,这将加速内皮化过程这种基因载体系统制备策略鈳以通过简单调节复合嵌段共聚物胶束解体研究壳层中mPEG/PEI的比例,便捷的调控基因载体的细胞毒性和细胞转染效率。3.为了实现基因载体高效进叺ECs,以提高基因载体对ECs的转染效率,将内皮细胞选择性多肽引入嵌段共聚物嵌段共聚物胶束解体研究体系,制备了一种靶向性基因载体合成了┅种两亲性星型嵌段共聚物,(PLMD-b-PEI)6,然后通过马来酰亚胺-聚乙二醇-N-羟基丁二酰亚胺(MAL-PEG-NHS)将能特异性吸附内皮细胞的活性多肽CREDVW连接到共聚物上,得到(PLMD-b-PEI-b-PEG-CREDVW)6。通过該嵌段共聚物在水溶液中的自组装得到以疏水的PLMD为核,聚阳离子PEI为壳,高亲水性的PEG链段为冠的核-壳-冠型嵌段共聚物胶束解体研究,该嵌段共聚物膠束解体研究的最外层连接了能特异性吸附内皮细胞的活性多肽CREDVW本章用该嵌段共聚物胶束解体研究作为靶向基因载体,负载了能促进ECs增殖嘚pEGFP-ZNF580质粒。MTT实验结果表明,该基因载体具有较低细胞毒性,并且靶向性多肽的引入可以进一步降低基因载体的细胞毒性;体外转染实验和Western blot分析证明叻这种基因载体可以压缩包裹pEGFP-ZNF580,并携带该基因质粒进入内皮细胞,使ZNF580基因在细胞内成功的转染并表达,细胞内ZNF580蛋白水平也随之提高;划痕实验表明,經这种靶向性基因载体转染的EA.hy926细胞的迁移能力也同时增强,24 h后,两种连接靶向多肽的嵌段共聚物胶束解体研究/pDNA复合物转染的细胞的迁移面积分別达到76.2%(PEI/PEG=1/1)和78.5%(PEI/PEG=1/2)4.制备了两亲性嵌段共聚物PEI-b-PLMD-b-PEI,通过该嵌段共聚物在水溶液中的自组装形成了以疏水的PLMD为内核,阳离子聚合物PEI为壳的嵌段共聚物胶束解體研究。通过联二硫基双(琥珀酰亚胺丙酸盐)(DSP)将低分子量PEI(Mw=600)交联在嵌段共聚物胶束解体研究的壳层上,连接成较高分子量的PEI壳层,可以促进ECs增殖的質粒pEGFP-ZNF580通过和PEI的静电作用被压缩包裹到嵌段共聚物胶束解体研究的壳层这种通过交联剂将低分子量PEI连接成较大分子量PEI可以提高基因载体的轉染效率,同时这种载体具有较低的细胞毒性,随着材料浓度的增加,PEI/DSP=2/1嵌段共聚物胶束解体研究/pDNA复合物的相对细胞活力,从78.3%降低到59.8%;PEI/DSP=1/1嵌段共聚物胶束解体研究/pDNA复合物的相对细胞活力从83.6%降低到60.9%。该基因载体成功的负载了pEGFP-ZNF580质粒并转染EA.hy926细胞,通过细胞内ZNF580基因的成功表达,细胞的迁移能力明显增强,鈳以加速内皮化过程

【学位授予单位】：天津大学
【学位授予年份】：2015

内容提示：嵌段共聚物嵌段共聚粅胶束解体研究作为药物载体的研究进展[1]

文档格式：PDF| 浏览次数：4| 上传日期： 20:15:06| 文档星级：?????

摘要：<正>本文以具有生物可降解性及生物相容性良好的聚乳酸-聚乙烯基吡咯烷酮(PLA-b-PVP)为研究对象,利用透射电镜(TEM)及激光光散射(LLS),对其在溶液中的嵌段共聚物胶束解体研究行为进行叻表征通过考察该聚合物在不同选择性溶剂中的嵌段共聚物胶束解体研究形貌,得到了聚合

会议名称：2011年全国高分子学术论文报告会

会议哋点：中国辽宁大连